Kultura CAPA-IVM z niskim ciśnieniem tlenu

Ostatnio osiągnięto postęp w procesie dojrzewania kapacytacyjnego in vitro (CAPA-IVM) w hodowli oocytów ze stadium pęcherzyka zarodkowego (GV). Podejście to stanowi zmodyfikowaną wersję konwencjonalnego zapłodnienia in vitro (IVF) i docytoplazmatycznego wstrzyknięcia plemnika (ICSI), po łagodnej stymulacji lub po braku kontrolowanej stymulacji jajników. W szczególności IVM może być wskazany u pacjentek, u których zdiagnozowano zespół policystycznych jajników (PCOS), większą liczbę pęcherzyków wtórnych (co stanowi prawie 15% wszystkich pacjentek) oraz w leczeniu szeregu pacjentek obciążonych ryzykiem nadmiernej stymulacji jajników, żylnej choroby zakrzepowo-zatorowej lub choroby zakrzepowo-zatorowej jajników. skręcenie. Dodatkowo CAPA-IVM pomaga skrócić czas leczenia, jest tańszy i zwiększa wygodę pacjenta bez wielokrotnych badań kontrolnych. Wskaźnik żywych urodzeń po pierwszym transferze zarodków w grupie CAPA-IVM wyniósł 35,2% i nie różnił się istotnie statystycznie od grupy IVF wynoszącej 43,2% (różnica ryzyka -8,1%; 95% przedział ufności od -16,6% do 0,5% ). Jednak liczba zarodków wysokiej jakości w każdym cyklu i skumulowany odsetek ciąż klinicznych w CAPA-IVM były nadal niższe niż w cIVF.

Ponadto należy rozważyć dalsze badania ze względu na brak wysokiej jakości dowodów w postaci równoległych raportów. Dlatego też istotne jest polepszenie warunków dojrzewania oocytów w CAPA-IVM, tak aby pozyskać optymalną liczbę oocytów i jak największą możliwość rozwoju zarodka. Wiele badań przeprowadzonych zarówno na modelach zwierzęcych, jak i ludzkich wykazało, że skuteczność CAPA-IVM zależy od wielu czynników. Wśród nich kluczową rolę w wytwarzaniu zdrowych dojrzałych oocytów odgrywają warunki środowiskowe, takie jak stężenie tlenu (O2). O2 jest istotnym fizycznym i chemicznym składnikiem jajowodu, macicy i pęcherzyka jajnikowego, jest ściśle powiązany z aktywnością metaboliczną, dojrzewaniem oocytów i wczesnym rozwojem zarodka. Ostatnie badania sugerują, że stężenie O2 może znacząco regulować dojrzewanie oocytów i wczesny rozwój zarodka poprzez czynnik indukowany niedotlenieniem (HIF). Nie osiągnięto konsensusu w sprawie wskaźnika stężenia O2 w środowisku hodowli IVM. Systemy hodowli z osadzonymi w oocytach są powszechnie stosowane na całym świecie w dwóch stężeniach O2, 5% i 20%. W organizmie człowieka kompleksy cumulus-oocyte (COC) dojrzewają w warunkach o niskim stężeniu O2 w zakresie od 2% do 9%.

Odwrotnie, COC są narażone na atmosferyczne stężenie O2 wynoszące 20% podczas manipulacji i hodowli IVM. Chociaż stężenie 5% naśladuje najodpowiedniejsze środowisko w jajowodzie i macicy, 20% O2 jest szeroko stosowane w technikach IVM. Stosowanie wysokich stężeń sprzyja lepszemu przebiegowi procesów różnicowania i zwiększa tempo dojrzewania oocytów. Jednakże niektóre ramy referencyjne wykazały, że 20% O2 może stwarzać ryzyko reaktywnego stresu oksydacyjnego (ROS), prowadzącego do braku równowagi w stosunku prooksydantów do przeciwutleniaczy, co skutkuje uszkodzeniem komórek. Co więcej, analiza oddychania w czasie rzeczywistym oocytów hodowanych przy 5% O2 jest podobna do analizy oocytów rozwiniętych in vivo, ale indukuje aktywność komórkową i zużycie tlenu przy 20% O2. Wpływ atmosferycznego stężenia O2 (20%) i niskiego stężenia O2 (5%) podczas hodowli CAPA-IVM u myszy wykazano w badaniu Vrije Universiteit Brussel (VUB) – Belgia, w którym stwierdzono, że zdolność oddechowa COC hodowanych przy 5% O2 była stosunkowo podobne do COC rozwijających się i dojrzewających in vivo.

Niemniej jednak COC hodowane w 20% O2 znacznie zwiększały aktywność oddechową i zużycie tlenu. W badaniu zaobserwowano, że hodowla złożonych doustnych środków antykoncepcyjnych przed wprowadzeniem preparatu IVM przy 20% O2 powodowała zaburzenia rozwojowe. Ponadto wynik był niekorzystny, jeśli mysie COC hodowano na etapie IVM z 5% O2. Na podstawie tych analiz badacze postawili hipotezę, że optymalnymi warunkami hodowli na etapie poprzedzającym IVM jest 5% O2, natomiast na etapie hodowli IVM bardziej odpowiednie jest stężenie 20% O2. Łącząc te ustalenia z wynikami VUB i charakterystyką procesu różnicowania w oocytach CAPA-IVM, badanie to podzielono na dwie główne grupy, w tym 5% przed IVM i 20% IVM w porównaniu z 20% przed IVM i IVM) i wykazuje, czy hipotezę tę należy zastosować CAPA-IVM u ludzi. Udoskonalenie systemu hodowli CAPA-IVM prowadzi do poprawy efektywności leczenia tą techniką i zapewnia szereg korzyści pacjentom poddawanym technologiom wspomaganego rozrodu.

Procedura badania:

Badanie przesiewowe pod kątem kwalifikowalności i randomizacji

• Badanie to zostanie przeprowadzone w szpitalu My Duc w Ho Chi Minh City w Wietnamie.
• Kobiety, które potencjalnie kwalifikują się do badania, zostaną poinformowane o badaniu w momencie wskazania wskazania do leczenia IVM.
• Badanie kwalifikacyjne zostanie przeprowadzone w dniu pierwszej wizyty, gdy wskazane jest leczenie IVM.
• Pacjenci otrzymają informacje związane z badaniem wraz z dokumentami świadomej zgody. Podpisane formularze świadomej zgody badacze uzyskają od wszystkich kobiet przed włączeniem do badania.

Oocyty zostaną podzielone na 2 grupy:

Grupa 1 (obejmuje 2 podgrupy: 1A i 1B): Stężenie tlenu w powietrzu Hodowla CAPA-IVM T = Całkowita liczba oocytów po OR i istnieją dwie podgrupy.

Liczbę oocytów podzielono poniżej:

Jeśli T jest liczbą parzystą:

• Liczba oocytów w grupie 1A: Jeden oocyt.
• Liczba oocytów w grupie 1B: T1B = (T-2)/2.

Jeśli T jest liczbą nieparzystą:

• Liczba oocytów w grupie 1A: Jeden oocyt.
• Liczba oocytów w grupie 1B: T1B = ([T-1]-2)/2. Jedna pozostała część oocytu pierwszego pacjenta zostanie przydzielona do grupy 1B, a pozostała część następnego pacjenta zostanie przydzielona do grupy 2B. Kontynuuj to sekwencyjnie przez następną pozostałą część.

Grupa 2 (obejmuje 2 podgrupy: 2A i 2B): Hodowla CAPA-IVM o niskim stężeniu tlenu T = Całkowita liczba oocytów po OR i istnieją dwie podgrupy.

Liczbę oocytów podzielono poniżej:

Jeśli T jest liczbą parzystą:

• Liczba oocytów w grupie 2A: Jeden oocyt.
• Liczba oocytów w grupie 2B: T2B = (T-2)/2.

Jeśli T jest liczbą nieparzystą:

• Liczba oocytów w grupie 2A: Jeden oocyt.
• Liczba oocytów w grupie 2B: T2B = ([T-1]-2)/2. Jedna pozostała część oocytu pierwszego pacjenta zostanie przydzielona do grupy 1B, a pozostała część następnego pacjenta zostanie przydzielona do grupy 2B. Kontynuuj to sekwencyjnie przez następną pozostałą część.

Grupa 1A, 2A: Zbiórka po kapacytacji: oocyt i wzgórek.

Grupa 1B, 2B: Zbiórka po kapacytacji: zużyte media, pusta studzienka. Zbiór po dojrzewaniu: zużyte podłoże, wzgórek, dołek pusty.