Cultura CAPA-IVM com baixa tensão de oxigênio

A maturação in vitro de capacitação (CAPA-IVM) foi recentemente avançada no cultivo de oócitos do estágio de vesícula germinativa (GV). Esta abordagem é uma versão modificada da fertilização in vitro convencional (FIV) e da injeção intracitoplasmática de espermatozóides (ICSI), após estimulação leve ou sem ocorrência de estimulação ovariana controlada. Especificamente, a MIV pode ser indicada para pacientes com diagnóstico de síndrome dos ovários policísticos (SOP), com maior número de folículos secundários (constituindo quase 15% do total de pacientes) e tratar uma série de pacientes com riscos de hiperestimulação ovariana, tromboembolismo venoso ou ovário. torção. Além disso, o CAPA-IVM ajuda a reduzir o tempo de tratamento, é mais barato e aumenta a conveniência do paciente sem a necessidade de vários exames de acompanhamento. A taxa de nascidos vivos após a primeira transferência de embriões no grupo CAPA-IVM foi de 35,2%, o que não foi estatisticamente significativamente diferente do grupo de fertilização in vitro de 43,2% (diferença de risco -8,1%; intervalo de confiança de 95% de -16,6% a 0,5% ). No entanto, o número de embriões de alta qualidade em cada ciclo e a taxa cumulativa de gravidez clínica no CAPA-IVM ainda eram inferiores aos da FIVc.

Além disso, devem ser consideradas investigações adicionais devido à falta de provas de alta qualidade de relatórios concorrentes. Portanto, é essencial melhorar as condições de maturação dos oócitos no CAPA-IVM para colher o número ideal de oócitos e a maior possibilidade de desenvolvimento embrionário. Muitos estudos realizados em modelos animais e humanos demonstraram que a eficácia do CAPA-IVM depende de vários fatores. Entre estas, as condições ambientais de cultura, como a concentração de oxigênio (O2), desempenham um papel crucial na produção de oócitos maduros saudáveis. O2 é um componente físico e químico vital da trompa de Falópio, do útero e do folículo ovariano, está intimamente relacionado à atividade metabólica, à maturação dos oócitos e ao desenvolvimento inicial do embrião. Pesquisas recentes sugeriram que a concentração de O2 pode regular significativamente a maturação dos oócitos e o desenvolvimento inicial do embrião através do fator induzível por hipóxia (HIF). Não foi alcançado um consenso sobre o índice de concentração de O2 no ambiente de cultura IVM. Sistemas de cultura incorporados em oócitos têm sido comumente usados ​​em duas concentrações de O2, 5% e 20% em todo o mundo. No corpo humano, os complexos cumulus-oócitos (COCs) amadurecem em condições com baixas concentrações de O2 variando de 2% a 9%.

Por outro lado, os COCs são expostos a uma concentração atmosférica de O2 de 20% durante a manipulação e cultura do IVM. Embora a concentração de 5% imite o ambiente mais adequado na trompa de Falópio e no útero, o O2 de 20% é amplamente aplicado em técnicas de MIV. O uso de altas concentrações facilita uma melhor progressão dos processos de diferenciação e aumenta a taxa de maturação dos ovócitos. No entanto, alguns referenciais indicaram que um O2 de 20% pode representar um risco de estresse oxidativo reativo (ROS), levando a um desequilíbrio na proporção de pró-oxidantes para antioxidantes, resultando em danos celulares. Além disso, a análise da respiração em tempo real de oócitos cultivados a 5% de O2 é semelhante à de oócitos desenvolvidos in vivo, mas induziu atividade celular e consumo de oxigênio a 20% de O2. O impacto da concentração atmosférica de O2 (20%) e da baixa concentração de O2 (5%) durante a cultura CAPA-IVM em camundongos mostrou no estudo da Vrije Universiteit Brussel (VUB) - Bélgica que a capacidade respiratória dos COCs cultivados a 5% O2 foi relativamente semelhante ao desenvolvimento e maturação dos COCs in vivo.

No entanto, os COCs cultivados com 20% de O2 aumentaram notavelmente a atividade respiratória e o consumo de oxigênio. O estudo observou que a cultura pré-MIV de COCs com 20% de O2 causou perturbações no desenvolvimento. Além disso, o resultado foi desfavorável se COCs de camundongos fossem cultivados na etapa IVM com 5% de O2. Com base nessas análises, os pesquisadores levantaram a hipótese de que 5% de O2 era a condição de cultura ideal para a etapa pré-MIV, enquanto 20% de O2 era mais relevante para a etapa de cultura de IVM. Combinando esses achados com resultados de VUB e características do processo de diferenciação em oócitos CAPA-IVM, este estudo é dividido em dois grupos principais, incluindo 5% pré-IVM e 20% IVM versus 20% pré-IVM e IVM) e demonstra se esta hipótese deve ser aplicada CAPA-IVM em humanos. O aprimoramento do sistema de cultura CAPA-IVM leva à melhoria da eficiência do tratamento desta técnica e proporciona diversos benefícios para pacientes submetidos à tecnologia de reprodução assistida.

Procedimento de estudo:

Triagem para elegibilidade e randomização

• Este ensaio será realizado no Hospital My Duc, cidade de Ho Chi Minh, Vietnã.
• As mulheres potencialmente elegíveis receberão informações sobre o estudo no momento da indicação do tratamento IVM.
• A triagem de elegibilidade será realizada no dia da primeira consulta quando o tratamento IVM for indicado.
• Os pacientes receberão informações relacionadas ao estudo juntamente com os documentos de consentimento informado. Os formulários de consentimento informado assinados serão obtidos pelos investigadores de todas as mulheres antes da inscrição.

Os oócitos serão divididos em 2 grupos:

Grupo 1 (inclui 2 subgrupos: 1A e 1B): Concentração de Oxigênio no Ar Cultura CAPA-IVM T = Número total de oócitos após OR e há dois subgrupos.

O número de oócitos é dividido abaixo:

Se T for um número par:

• Número de oócitos no Grupo 1A: Um oócito.
• Número de oócitos no Grupo 1B: T1B = (T-2)/2.

Se T for um número ímpar:

• Número de oócitos no Grupo 1A: Um oócito.
• Número de oócitos no Grupo 1B: T1B = ([T-1]-2)/2. Um ovócito restante do primeiro paciente será atribuído ao grupo 1B, e o restante do próximo paciente será atribuído ao grupo 2B. Continuando a fazer isso sequencialmente para o próximo restante.

Grupo 2 (inclui 2 subgrupos: 2A e 2B): Baixa Concentração de Oxigênio CAPA- Cultura IVM T = Número total de oócitos após OR e há dois subgrupos.

O número de oócitos é dividido abaixo:

Se T for um número par:

• Número de oócitos no Grupo 2A: Um oócito.
• Número de oócitos no Grupo 2B: T2B = (T-2)/2.

Se T for um número ímpar:

• Número de oócitos no Grupo 2A: Um oócito.
• Número de oócitos no Grupo 2B: T2B = ([T-1]-2)/2. Um ovócito restante do primeiro paciente será atribuído ao grupo 1B, e o restante do próximo paciente será atribuído ao grupo 2B. Continuando a fazer isso sequencialmente para o próximo restante.

Grupo 1A, 2A: Coleta após capacitação: oócito e célula do cumulus.

Grupo 1B, 2B: Coleta após capacitação: mídia gasta, poço vazio. Coleta após maturação: meio gasto, célula cumulus, poço branco.