Cultivo CAPA-IVM con baja tensión de oxígeno

La maduración in vitro por capacitación (CAPA-IVM) ha avanzado recientemente en el cultivo de ovocitos desde la etapa de vesícula germinal (GV). Este enfoque es una versión modificada de la fertilización in vitro (FIV) convencional y la inyección intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI), después de una estimulación leve o sin que se haya producido una estimulación ovárica controlada. Específicamente, la MIV puede estar indicada para pacientes diagnosticadas con síndrome de ovario poliquístico (SOP), un mayor número de folículos secundarios (que constituyen casi el 15% del total de pacientes) y tratar una variedad de pacientes con riesgos de hiperestimulación ovárica, tromboembolismo venoso o enfermedad ovárica. torsión. Además, CAPA-IVM ayuda a acortar el tiempo de tratamiento, es menos costoso y mejora la comodidad del paciente sin múltiples exámenes de seguimiento. La tasa de nacidos vivos después de la primera transferencia de embriones en el grupo CAPA-IVM fue del 35,2 %, lo que no fue estadísticamente diferente del grupo de FIV con 43,2 % (diferencia de riesgo -8,1 %; intervalo de confianza del 95 % de -16,6 % a 0,5 % ). Sin embargo, la cantidad de embriones de alta calidad en cada ciclo y la tasa acumulada de embarazo clínico en CAPA-IVM fueron aún más bajas que en cIVF.

Además, se debe considerar realizar más investigaciones debido a la falta de evidencia de alta calidad de informes simultáneos. Por lo tanto, es esencial mejorar las condiciones de maduración de los ovocitos en CAPA-IVM para recolectar el número óptimo de ovocitos y la mayor posibilidad de desarrollo embrionario. Muchos estudios realizados en modelos animales y humanos han demostrado que la eficacia de CAPA-IVM depende de varios factores. Entre ellas, las condiciones ambientales de cultivo, como la concentración de oxígeno (O2), desempeñan un papel crucial en la producción de ovocitos maduros sanos. El O2 es un componente físico y químico vital de las trompas de Falopio, el útero y el folículo ovárico, está estrechamente relacionado con la actividad metabólica, la maduración de los ovocitos y el desarrollo embrionario temprano. Investigaciones recientes sugirieron que la concentración de O2 puede regular significativamente la maduración de los ovocitos y el desarrollo embrionario temprano a través del factor inducible por hipoxia (HIF). No se ha llegado a un consenso sobre el índice de concentración de O2 en el entorno de cultivo MIV. Los sistemas de cultivo incluidos en ovocitos se han utilizado comúnmente en dos concentraciones de O2, 5% y 20% en todo el mundo. En el cuerpo humano, los complejos cúmulo-ovocitos (COC) maduran en condiciones con bajas concentraciones de O2 que oscilan entre el 2% y el 9%.

Por el contrario, los AOC están expuestos a una concentración atmosférica de O2 del 20% durante la manipulación y el cultivo de IVM. Aunque la concentración del 5% imita el entorno más adecuado en las trompas de Falopio y el útero, el O2 al 20% se aplica ampliamente en las técnicas de MIV. El uso de altas concentraciones facilita una mejor progresión de los procesos de diferenciación y aumenta la tasa de maduración de los ovocitos. Sin embargo, algunos marcos referenciales indicaron que un 20% de O2 puede representar un riesgo de estrés oxidativo reactivo (ROS), lo que lleva a un desequilibrio en la proporción de prooxidantes y antioxidantes, lo que resulta en daño celular. Además, el análisis de la respiración en tiempo real de ovocitos cultivados con 5% de O2 es similar al de los ovocitos desarrollados in vivo, pero induce actividad celular y consumo de oxígeno con 20% de O2. El impacto de la concentración atmosférica de O2 (20%) y la baja concentración de O2 (5%) durante el cultivo CAPA-IVM en ratones demostró en el estudio de la Vrije Universiteit Brussel (VUB) - Bélgica que la capacidad respiratoria de los AOC cultivados con un 5% de O2 era relativamente similar a los AOC que se desarrollan y maduran in vivo.

No obstante, los AOC cultivados con 20% de O2 aumentaron notablemente la actividad respiratoria y el consumo de oxígeno. El estudio observó que el cultivo de AOC con 20% de O2 antes de la IVM causaba alteraciones en el desarrollo. Además, el resultado fue desfavorable si los AOC de ratón se cultivaban en el paso IVM con 5 % de O2. Con base en estos análisis, los investigadores plantearon la hipótesis de que un 5 % de O2 era la condición de cultivo óptima para el paso previo a la IVM, mientras que un 20 % de O2 era más relevante para el paso de cultivo de IVM. Combinando estos hallazgos con los resultados de VUB y las características del proceso de diferenciación en ovocitos CAPA-IVM, este estudio se divide en dos grupos principales, que incluyen 5% pre-IVM y 20% IVM versus 20% pre-IVM e IVM) y demuestra si Esta hipótesis debería aplicarse CAPA-IVM en humanos. La mejora del sistema de cultivo CAPA-IVM conduce a una mayor eficiencia del tratamiento de esta técnica y proporciona diversos beneficios a los pacientes sometidos a tecnología de reproducción asistida.

Procedimiento de estudio:

Detección de elegibilidad y aleatorización

• Este ensayo se llevará a cabo en el Hospital My Duc, Ciudad Ho Chi Minh, Vietnam.
• Las mujeres que sean potencialmente elegibles recibirán información sobre el ensayo en el momento de la indicación del tratamiento con MIV.
• La evaluación de elegibilidad se realizará el día de la primera visita cuando esté indicado el tratamiento IVM.
• Los pacientes recibirán información relacionada con el estudio junto con los documentos de consentimiento informado. Los investigadores obtendrán formularios de consentimiento informado firmados de todas las mujeres antes de la inscripción.

Los ovocitos se dividirán en 2 grupos:

Grupo 1 (incluye 2 subgrupos: 1A y 1B): Concentración de oxígeno en el aire Cultivo CAPA-IVM T = Número total de ovocitos después de la operación y hay dos subgrupos.

El número de ovocitos se divide a continuación:

Si T es un número par:

• Número de ovocitos en el Grupo 1A: Un ovocito.
• Número de ovocitos en el Grupo 1B: T1B = (T-2)/2.

Si T es un número impar:

• Número de ovocitos en el Grupo 1A: Un ovocito.
• Número de ovocitos en el Grupo 1B: T1B = ([T-1]-2)/2. Un ovocito restante del primer paciente se asignará al grupo 1B y el resto del siguiente paciente se asignará al grupo 2B. Continuar haciéndolo secuencialmente durante el siguiente resto.

Grupo 2 (incluye 2 subgrupos: 2A y 2B): cultivo CAPA-MIV de baja concentración de oxígeno T = Número total de ovocitos después de la operación y hay dos subgrupos.

El número de ovocitos se divide a continuación:

Si T es un número par:

• Número de ovocitos en el Grupo 2A: Un ovocito.
• Número de ovocitos en el Grupo 2B: T2B = (T-2)/2.

Si T es un número impar:

• Número de ovocitos en el Grupo 2A: Un ovocito.
• Número de ovocitos en el Grupo 2B: T2B = ([T-1]-2)/2. Un ovocito restante del primer paciente se asignará al grupo 1B y el resto del siguiente paciente se asignará al grupo 2B. Continuar haciéndolo secuencialmente durante el siguiente resto.

Grupo 1A, 2A: Recolección después de la capacitación: ovocito y célula del cúmulo.

Grupo 1B, 2B: Recolección después de la capacitación: medios gastados, pozo en blanco. Recolección después de la maduración: medio gastado, cúmulo de células, pocillo en blanco.