Super-GDF9:n vaikutus pienten antaalirakkuloiden yhdistelmäehkäisytablettien CAPA-IVM:ään (sGDF-9)

CAPA-IVM (In Vitro Maturation) -teknologia on avusteinen lisääntymismenetelmä, joka tarjoaa merkittäviä etuja turvallisuuden ja hoitokustannusten kannalta erityisesti korkean riskin potilaille. Näitä ovat henkilöt, joilla on munasarjojen hyperstimulaatio-oireyhtymä (OHSS), laskimotromboosi, munasarjojen kiertymä tai munasarjojen monirakkulaoireyhtymä (PCOS) – joilla on tyypillisesti suuri määrä antrualisia follikkeleja (lähes 15 % kaikista potilaista). Vaikka elävänä syntyvyys ensimmäisen siirron jälkeen CAPA-IVM-ryhmässä on 35,2 %, mikä ei eroa tilastollisesti perinteisestä IVF-ryhmästä 43,2 % (riskiero: -8,1 %; 95 %:n luottamusväli: -16,6 % - 0,5 %), hyvälaatuisten alkioiden määrä kiertoa kohden ja kumulatiivinen kliininen raskausaste ovat pienempiä kuin perinteisessä IVF:ssä. Siksi CAPA-IVM-viljelyprosessin parantaminen oosyyttien optimaalisen määrän ja laadun saavuttamiseksi on välttämätöntä.

Samanaikaisesti follikulaarisessa nesteessä yleisesti esiintyvien kasvutekijöiden lisääminen elatusaineeseen edustaa huomattavaa edistystä munasolujen laadun parantamisessa CAPA-IVM:ssä. Joitakin somaattisia osia, kuten laajentumista, aineenvaihduntaa ja apoptoosia, säätelevät liukoiset kasvutekijät, jotka tunnetaan munasolujen eritystekijöinä (OSF). Kaksi OSF:ää, kasvudifferentiaatiotekijä 9 (GDF9) ja luun morfogeneettinen proteiini 15 (BMP15), on tunnistettu kriittisiksi follikkelien kehitykselle ja hedelmällisyydelle eri lajeissa, kuten hiirissä, lampaissa ja ihmisissä. IVM-viljelyn aikana on testattu näiden tekijöiden sekä epäkypsät että kypsät muodot sekä niiden homo- ja heterodimeerirakenteet. Erityisesti heterodimeerirakenne on osoittanut positiivisimmat vaikutukset cumulus-oosyyttikomplekseihin (COC) IVM-viljelyn aikana.

Vaikka molemmat kasvutekijät ovat homodimeerisissä muodoissa, viimeaikaiset tutkimukset ovat osoittaneet, että GDF9- ja BMP15-heterodimeeri voivat myös muodostaa tehokkaamman kasvutekijän, jota kutsutaan kumuliiniksi. BMP15 aktivoi latentin GDF9:n kumuliinissa, mikä johtaa voimakkaaseen signalointiin granulosasoluissa tyypin I reseptorien (ALK4/5) ja SMAD2/3-transkriptiotekijöiden kautta. Biolääketieteellisesti muokatun kumuliinin on ehdotettu parantavan huomattavasti alkiotuloksia hiiri- ja sikamalleissa. Äskettäin villityypin GDF9:n modifioidun version, nimeltään super GDF9, on osoitettu olevan > 1000 kertaa tehokkaampi kuin GDF9 ja 4 kertaa enemmän aktiivisuutta kuin kumuliinilla SMAD2/3-responsiivisissa transkriptiomäärityksissä granulosasoluissa. Aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että super-GDF9:n lisääminen CAPA-IVM-väliaineeseen hiirillä indusoi geenin ilmentymistä ovulaatiokaskadissa CAPA-IVM-kypsymisen aikana, mikä muistuttaa läheisesti in vivo -kypsymistä. Super GDF9 edistää tehokkaasti cumulus-solujen laajenemista ja parantaa munasolujen kehityskykyä in vitro. Näin ollen super GDF9 voi mahdollisesti korvata kumuliinin, joka kohtaa haasteita tuotannossa ja puhdistuksessa.

Tässä tutkimuksessa tutkitaan super GDF9:n lisäyksen vaikutusta CAPA-IVM-viljelyn aikana, tavoitteena parantaa pienten follikkelien cumulus-oosyyttikompleksien (COC) tuloksia ja viime kädessä parantaa hoidon onnistumista.

• Kelpoisuuden seulonta

  • Tämä tutkimus suoritetaan My Duc Hospitalissa, Ho Chi Minh Cityssä, Vietnamissa.
  • Naisille, jotka ovat mahdollisesti kelvollisia, tiedotetaan tutkimuksesta IVM-hoitoaiheen aikaan.
  • Kelpoisuusseulonta suoritetaan ensimmäisen käynnin päivänä, jolloin IVM-hoito on aiheellinen.
  • Potilaille toimitetaan tiedot tutkimuksesta ja tietoon perustuvat suostumusasiakirjat. Tutkijat hankkivat allekirjoitetut tietoon perustuvat suostumuslomakkeet kaikilta naisilta ennen ilmoittautumista.
  • Tukikelpoisille naisille määrätään oosyyttikeräystoimenpiteet 1–7 päivän kuluessa tietoisesta suostumuksesta.
• Munasolujen haku Munasolujen poimintamenettely suoritetaan keskuksen CAPA-IVM-syklien vakiokäytäntöjen mukaisesti.

Cumulus-oosyyttikompleksit (COC) pienistä follikkeleista OPU:n jälkeen jaetaan kahteen ryhmään:

• Ryhmä 1: 10 luovutettua COC:tä viljellään CAPA- ja IVM-vaiheissa, lisäämällä 50 ng/ml Super-GDF9:ää molemmissa CAPA-IVM-vaiheissa.
• Ryhmä 2: Kohteen jäljellä olevat COC:t viljellään CAPA- ja IVM-vaiheissa lisäämättä Super-GDF9:ää CAPA-IVM:n aikana.

Ryhmät 1 ja 2: Keräys kapasitointivaiheen jälkeen: käytetyt väliaineet ja tyhjät kuopat. Keräys kypsytysvaiheen jälkeen: käytetty elatusaine, cumulussolu ja tyhjät kuopat.

+ CAPA ja kypsymisviljely: CAPA ja kypsymisviljely suoritetaan rutiininomaisesti nykyisten laboratoriokäytäntöjen mukaisesti. ICSI:tä käytetään kypsien munasolujen hedelmöittämiseen.