Effetto di Super-GDF9 su CAPA-IVM di COC da piccoli follicoli antrali (sGDF-9)

La tecnologia CAPA-IVM (In Vitro Maturation) è un metodo di riproduzione assistita che offre vantaggi significativi in ​​termini di sicurezza e costi di trattamento, in particolare per i pazienti ad alto rischio. Questi includono individui con sindrome da iperstimolazione ovarica (OHSS), trombosi venosa, torsione ovarica o sindrome dell'ovaio policistico (PCOS) - che tipicamente si presentano con un numero elevato di follicoli antrali (che costituiscono quasi il 15% di tutti i pazienti). Sebbene il tasso di nati vivi dopo il primo trasferimento nel gruppo CAPA-IVM sia del 35,2%, non è statisticamente diverso dal gruppo IVF convenzionale che è del 43,2% (differenza di rischio: -8,1%; intervallo di confidenza al 95%: da -16,6% a 0,5 %), il numero di embrioni di buona qualità per ciclo e il tasso cumulativo di gravidanza clinica rimangono inferiori rispetto alla fecondazione in vitro convenzionale. Pertanto, è essenziale migliorare il processo di coltura CAPA-IVM per ottenere il numero e la qualità ottimali degli ovociti.

Allo stesso tempo, l’aggiunta di fattori di crescita comunemente presenti nel fluido follicolare al terreno di coltura rappresenta un notevole progresso nel miglioramento della qualità degli ovociti nella CAPA-IVM. Alcuni compartimenti somatici, come l’espansione, il metabolismo e l’apoptosi, sono regolati da fattori di crescita solubili, noti come fattori di secrezione ovocitaria (OSF). Due OSF, il fattore di differenziazione della crescita 9 (GDF9) e la proteina morfogenetica ossea 15 (BMP15), sono stati identificati come fondamentali per lo sviluppo follicolare e la fertilità in varie specie come topi, pecore e esseri umani. Durante la coltura IVM, sono state testate sia le forme immature che quelle mature di questi fattori, nonché le loro strutture omo ed eterodimeriche. In particolare, la struttura eterodimerica ha mostrato gli effetti più positivi sui complessi cumulo-ovociti (COC) durante la coltura IVM.

Sebbene entrambi i fattori di crescita esistano in forme omodimeriche, studi recenti hanno scoperto che l'eterodimero GDF9 e BMP15 possono anche formare un fattore di crescita più potente chiamato cumulina. BMP15 attiva GDF9 latente nella cumulina, portando a una forte segnalazione nelle cellule della granulosa tramite i recettori di tipo I (ALK4/5) e i fattori di trascrizione SMAD2/3. È stato proposto che la cumulina ingegnerizzata biomedicamente migliori notevolmente i risultati embrionali nei modelli murini e suini. Recentemente, è stato dimostrato che una versione modificata di GDF9 wild-type, chiamata super GDF9, è >1000 volte più potente di GDF9 e 4 volte più attiva della cumulina nei test trascrizionali sensibili a SMAD2/3 nelle cellule della granulosa. Precedenti ricerche hanno dimostrato che l'aggiunta di super GDF9 ai mezzi CAPA-IVM nei topi induce l'espressione genica nella cascata ovulatoria durante la maturazione di CAPA-IVM che ricorda da vicino la maturazione in vivo. Super GDF9 promuove efficacemente l'espansione delle cellule del cumulo e migliora la competenza di sviluppo degli ovociti in vitro. Pertanto, il super GDF9 può potenzialmente sostituire la cumulina, che deve affrontare sfide nella produzione e nella purificazione.

Questo studio indaga l'impatto dell'integrazione di super GDF9 durante la coltura CAPA-IVM, con l'obiettivo di migliorare i risultati dei complessi cumulo-ovociti (COC) da piccoli follicoli e, in definitiva, migliorare il successo del trattamento.

• Screening per l'idoneità

  • Questo studio sarà condotto presso il My Duc Hospital, Ho Chi Minh City, Vietnam.
  • Alle donne potenzialmente idonee verranno fornite informazioni sullo studio al momento dell'indicazione del trattamento IVM.
  • Lo screening per l'idoneità verrà eseguito il giorno della prima visita quando è indicato il trattamento IVM.
  • Ai pazienti verranno fornite informazioni sullo studio e documenti di consenso informato. Gli investigatori otterranno moduli di consenso informato firmati da tutte le donne prima dell'arruolamento.
  • Alle donne idonee verrà programmato di sottoporsi a procedure di prelievo di ovociti entro 1-7 giorni dal consenso informato.
• Prelievo degli ovociti La procedura di prelievo degli ovociti sarà condotta secondo le pratiche standard del centro per i cicli CAPA-IVM.

I complessi cumulo-ovociti (COC) provenienti da piccoli follicoli dopo OPU saranno divisi in 2 gruppi:

• Gruppo 1: 10 COC donati verranno coltivati ​​nelle fasi CAPA e IVM, aggiungendo 50 ng/ml Super-GDF9 durante entrambe le fasi in CAPA-IVM.
• Gruppo 2: i COC rimanenti del soggetto verranno coltivati ​​nelle fasi CAPA e IVM senza aggiungere Super-GDF9 durante CAPA-IVM.

Gruppi 1 e 2: Raccolta dopo la fase di capacitazione: mezzi esauriti e pozzetti vuoti. Raccolta dopo la fase di maturazione: mezzi esauriti, cella cumuliforme e pozzetti vuoti.

+ CAPA e coltura di maturazione: la CAPA e la coltura di maturazione verranno eseguite di routine seguendo gli attuali protocolli di laboratorio. L'ICSI verrà utilizzata per fecondare gli ovociti maturi.