Efeito do Super-GDF9 no CAPA-IVM de AOCs de pequenos folículos antrais (sGDF-9)

A tecnologia CAPA-IVM (Maturação In Vitro) é um método de reprodução assistida que oferece benefícios significativos em termos de segurança e custos de tratamento, especialmente para pacientes de alto risco. Estes incluem indivíduos com síndrome de hiperestimulação ovariana (SHO), trombose venosa, torção ovariana ou síndrome dos ovários policísticos (SOP) - que normalmente apresentam um elevado número de folículos antrais (constituindo quase 15% de todos os pacientes). Embora a taxa de nascidos vivos após a primeira transferência no grupo CAPA-IVM seja de 35,2%, o que não é estatisticamente diferente do grupo de fertilização in vitro convencional de 43,2% (diferença de risco: -8,1%; intervalo de confiança de 95%: -16,6% a 0,5 %), o número de embriões de boa qualidade por ciclo e a taxa cumulativa de gravidez clínica permanecem inferiores aos da fertilização in vitro convencional. Portanto, melhorar o processo de cultura CAPA-IVM para atingir o número e a qualidade ideais de oócitos é essencial.

Ao mesmo tempo, a adição de fatores de crescimento comumente encontrados no fluido folicular ao meio de cultura representa um avanço notável na melhoria da qualidade do oócito no CAPA-IVM. Alguns compartimentos somáticos, como expansão, metabolismo e apoptose, são regulados por fatores de crescimento solúveis, conhecidos como fatores de secreção de oócitos (OSFs). Dois OSFs, o fator de diferenciação de crescimento 9 (GDF9) e a proteína morfogenética óssea 15 (BMP15), foram identificados como críticos para o desenvolvimento folicular e a fertilidade em várias espécies, como camundongos, ovelhas e humanos. Durante a cultura IVM, foram testadas tanto as formas imaturas como maduras destes factores, bem como as suas estruturas homo e heterodiméricas. Notavelmente, a estrutura do heterodímero mostrou os efeitos mais positivos nos complexos cumulus-oócitos (COCs) durante a cultura IVM.

Embora ambos os fatores de crescimento existam em formas homodiméricas, estudos recentes descobriram que o heterodímero GDF9 e BMP15 também pode formar um fator de crescimento mais potente chamado cumulina. A BMP15 ativa o GDF9 latente na cumulina, levando a uma forte sinalização nas células da granulosa através de receptores tipo I (ALK4/5) e fatores de transcrição SMAD2/3. A cumulina biomédica foi proposta para melhorar visivelmente os resultados embrionários em modelos de camundongos e suínos. Recentemente, foi demonstrado que uma versão modificada do GDF9 de tipo selvagem, chamada super GDF9, é> 1000 vezes mais potente que o GDF9 e 4 vezes mais atividade que a cumulina em ensaios transcricionais responsivos a SMAD2/3 em células da granulosa. Pesquisas anteriores ilustraram que a adição de super GDF9 à mídia CAPA-IVM em camundongos induz a expressão gênica na cascata ovulatória durante a maturação CAPA-IVM que se assemelha muito à maturação in vivo. Super GDF9 promove efetivamente a expansão das células do cumulus e aumenta a competência de desenvolvimento do oócito in vitro. Conseqüentemente, o super GDF9 pode potencialmente substituir a cumulina, que enfrenta desafios na produção e purificação.

Este estudo investiga o impacto da suplementação de super GDF9 durante a cultura CAPA-IVM, com o objetivo de melhorar os resultados dos complexos cumulus-oócitos (COCs) de pequenos folículos e, em última análise, aumentar o sucesso do tratamento.

• Triagem de elegibilidade

  • Este estudo será realizado no Hospital My Duc, cidade de Ho Chi Minh, Vietnã.
  • As mulheres potencialmente elegíveis receberão informações sobre o estudo no momento da indicação do tratamento IVM.
  • A triagem para elegibilidade será realizada no dia da primeira consulta quando o tratamento IVM for indicado.
  • Os pacientes receberão informações sobre o estudo e documentos de consentimento informado. Os investigadores obterão formulários de consentimento informado assinados de todas as mulheres antes da inscrição.
  • As mulheres elegíveis serão submetidas a procedimentos de coleta de ovócitos dentro de 1 a 7 dias a partir do consentimento informado.
• Recuperação de oócitos O procedimento de coleta de oócitos será realizado de acordo com as práticas padrão do centro para ciclos CAPA-IVM.

Complexos cumulus-oócitos (COCs) de pequenos folículos após OPU serão divididos em 2 grupos:

• Grupo 1: 10 AOCs doados serão cultivados nas etapas CAPA e IVM, adicionando 50ng/ml de Super-GDF9 durante ambas as etapas no CAPA-IVM.
• Grupo 2: Os COCs restantes do sujeito serão cultivados nas etapas CAPA e IVM sem adição de Super-GDF9 durante CAPA-IVM.

Grupos 1 e 2: Coleta após a etapa de capacitação: meio gasto e poços brancos. Coleta após a etapa de maturação: meio gasto, células cumulus e poços em branco.

+ CAPA e cultura de maturação: A cultura de CAPA e maturação será realizada rotineiramente seguindo os protocolos laboratoriais atuais. ICSI será usada para fertilizar oócitos maduros.