Sytomorfometrian ja BRAFV600E -immunosytokemian rooli sytologisella diagnoosilla "epäilyttävä kilpirauhasen karsinoomassa"

Kilpirauhasen kyhmyjä on yleinen kliininen havainto rutiininomaisessa päivittäisessä lääketieteellisessä ja kirurgisessa käytännössä. Ultrasonografia havaitsee ne noin 70 prosentilla kliinisesti terveistä yksilöistä. Kilpirauhasen kyhmyt ovat neljä kertaa yleisempiä naisilla ja jopa 90% tapauksista johtuu hyvänlaatuisista olosuhteista.

Kilpirauhasen kyhmyjen kliinisen hoidon pääkohde on pahanlaatuisuuden poissulkeminen (4-6,5% kaikista kilpirauhasen kyhmyistä), paineoireiden arviointi ja kilpirauhasen toimintahäiriöiden arviointi.

Kilpirauhasen kyhmyjen kehitykseen liittyi monia riskitekijöitä, mukaan lukien pitkäaikainen ikä, sukupuoli, lisääntynyt tai vähentynyt jodia, syövän tai polypoosin perheen historia sekä pään ja kaulan säteilyn historia. Yleisimmät kilpirauhasen kyhmyt ovat kolloidisia kyhmyjä, Hashimoton kilpirauhastulehdus, subakuutti kilpirauhastulehdus, kystat, follikulaarinen adenooma ja kilpirauhasen syöpä.

Kilpirauhasen pahanlaatuisten kasvainten suhteen kilpirauhassyövän esiintyvyys kasvoi viime vuosikymmeninä Yhdysvalloissa ja kansainvälisesti. Se on 7. yleisin syöpä väestössä ja viides yleisin naisilla. Kilpirauhassyövän esiintyvyys on noin 3 kertaa korkeampi naisilla kuin miehillä, ja se kasvaa murrosikäisestä keski -ikään, kun huippu on noin 55 vuotta naisilla ja 65 vuotta miehillä, sitten vähenee vanhemman iän myötä.

Syöpätapausten lukumäärän lisääntyminen johtuu lisääntyneestä diagnoosista, joka johtuu diagnostiikkatyökalujen laajasta käytöstä, mukaan lukien ultraäänikuvaus, hienon neulan aspiraatiosytologia, tietokonetomografia, magneettikuvauskuva ja fluorodeoksiglukoosi positroniemissiotomografia. Sen lisäksi, että etiologisille tekijöille altistuminen on lisääntynyt ionisoivana säteilyssä lapsuuden ja liikalihavuuden aikana.

Kilpirauhasen karsinooma (PTC) on yleisin kilpirauhasen syöpien histologinen tyyppi, joka edustaa 90% tapauksista. Loput 10% sisältää follikulaarisen kilpirauhasen karsinooman 4%, Hurthle -solukarsinooma 2%, medullaarinen kilpirauhasen karsinooma 2% ja anaplastinen kilpirauhasen karsinooma 1%.

Kilpirauhassyövän ennuste on erinomainen, koska useimmat tapaukset ovat papillaarisia kilpirauhasen karsinoomia, jotka on lokalisoitu kilpirauhanen diagnoosin aikana. Viiden vuoden eloonjäämisaste on 98,6%, 99,9% paikallisille, 98,3% alueellisille ja 54,9% kaukaisilla etäpesäkkeillä.

Kilpirauhanen hieno neulan aspiraatiosytologia (FNAC) on kultastandardin tarkka diagnostinen testi, jota käytetään rutiininomaisesti kilpirauhasen kyhmyjen alkuperäisessä arvioinnissa, koska se on yksinkertainen, turvallinen, kustannustehokas ja sillä on suotuisa tarkkuus. Kilpirauhasen FNAC: n herkkyys ja spesifisyys ovat 68-98% ja vastaavasti 56–100% epäonnistumisasteen kanssa johtuu suorituskyvyn tekniikasta ja kokemuksesta.

Kilpirauhasen sytopatologian raportoinnin Bethesda -järjestelmä (TBSRTC) julkaistiin ensimmäisen kerran vuonna 2010, ja sitä päivitettiin useita kertoja raportointiterminologian standardointiin ja sytopatologien ja lääkäreiden väliseen parempaan viestintään.

Vuoden 2023 Bethesda-järjestelmä kilpirauhasen sytopatologian ilmoittamiseksi on yksinkertainen luokkapohjainen raportointijärjestelmä hienon neulan aspiraatiosytologialle (FNAC) kilpirauhasen ja siitä tuli yksi eniten käytetyistä raportointi- ja diagnoosimenetelmistä ja sisältää 6 luokkaa.

Luokka (i) ei-diagnostinen ja 13%: n (5-20) pahanlaatuisuuden riski, luokka (ii) hyvänlaatuinen 4%(2-7) pahanlaatuisuuden riski, luokka (III) määrittelemättömän merkityksen atypialla määrittelemättömällä merkityksellä (13-30) pahanlaatuisuuden riski, luokka (IV) follicular neoplasmilla 30%: lla (23-34). 74%(67-83) pahanlaatuisuuden ja luokan (VI) pahanlaatuinen riski, jolla on 97%(97-100) pahanlaatuisuuden riski.

Epäilyttäviä pahanlaatuisuuden luokassa käytetään, kun sytomorfologiset piirteet ovat epävarmoja ja herättävät voimakasta epäilyksiä pahanlaatuisuudesta, mutta ovat kvantitatiivisesti tai laadullisesti riittämättömiä vakuuttavan diagnoosin suhteen, ja tässä tapauksessa tavanomainen hallinta on molekyylitestaus, lobektomia tai lähellä kokonaisvaltaista kilpailuväriä.

Bethesda-järjestelmäluokan mukaan epäilyttävä pahanlaatuisuudesta (SFM) sisältää epäilyttäviä papillaarikarsinoomaa (SPTC), joka on yleisin alatyyppi (yli 90%) ja harvemmin epäilyttäviä ei-parilaitoksen karsinoomasta, joka koostuu epäilyttävistä medioksiryhmän karsinoomasta ja epäilyttävistä karsinoomasta. pahanlaatuisuuden vuoksi ei muuten määritetä.

Papillaarisen kilpirauhasen karsinooman epäilyttäviä diagnosoidaan hajanaisten ydinmuutosten vuoksi (merkityksettömät follikulaarisolut, jotka on kutsuttu soluilla, jotka osoittavat ydinvoiman laajentumista, valheita, uria ja hienoja kromatiinia, niukkoja tai puuttuvia intranukleaarisia pseudoinclusions- ja puuttuvia papillaria ja grooes -aukkoja, haihtuvia ydinmuutoksia (yleisiä ydinvoimaa koskevia syytöksiä, haarautuneita ydinmuutoksia (yleisiä ydinvoimaa koskevia ydintargaanisia ydintarjouksiaan, papillaaria ja hajautettuja ydintargaanisia ydintargaanisia ydintargaanita koskevia ydintarjouksiaan, papillaria ja pukeutumista koskevia ydintargaanisia ydintargaanisia ydintargaanisia ydintargaanisia ydintargaanita koskevia ydintarjouksia. Ydinmembraani ja intranukleaariset pseudoinclusions ja puuttuvat papillaarinen arkkitehtuuri ja psammoma -kappaleet), harvoin solunäytteet tai kystinen rappeutuminen (kystisten roskien ja makrofagien tausta, ydinasemattomat ja tavarat, epätyypilliset histositoidiset solut ja sytoplasmilliset tyhjöt ja poissa olevat papillaarinen arkkitehtuuri sekä psammoma -kehot.

Papillaarisen kilpirauhasen karsinooman epäilyttäviä diagnosoidaan 2,4-8%: lla hienon neulan aspiraatiotuloksista ja 60–80% heistä vahvistetaan resektoiduissa näytteissä papillaarisina kilpirauhasen karsinoomana, ja loput tapaukset osoittivat hyvänlaatuisia olosuhteita kroonisena lymfosyyttisenä kilpirauhasen (Hashimoto thyroidiitti) ja solmulaarisena. Hashimoto -kilpirauhasentulehdus on yksi yleisimmistä tekijöistä väärien positiivisten papillaaristen kilpirauhasen karsinooman diagnoosissa, koska niiden välillä on voimakas morfologiset piirteet.

Kilpirauhasen karsinooman diagnoosin epäilyttävä on hämmentävä kirurgien ja potilaille ja vaikeuttaa optimaalisen kirurgisen päätöksen, koska pahanlaatuisuuden esiintyvyys tässä diagnoosiluokassa on korkea. Jotkut kirurgit etsivät kokonaisvaltaista kilpirauhasen ja tämä tekee noin 25% potilaista (väärät positiiviset tapaukset) voi kärsiä ylisuuria ja tarpeen hormonikorvaushoidosta koko elämän ajan. Monet tutkimukset tehtiin lisäämään pahanlaatuisuuden havaitsemisen tarkkuutta tässä luokassa ja vähentämään ylisuurten mahdollisuuksia. Jotkut kirjoittajat sovelsivat yksityiskohtaisia ​​ultraäänikriteerejä tapauksille, jotka diagnosoivat sytologisesti epäilyttäviä kilpirauhasen karsinoomassa ja ilmoittivat tarkkuuden lisääntymisen 86%: sta 94%: iin, kun taas toiset suorittivat intraoperatiivisen jäädytetyn osan ja apulaiskokeet molekyylimarkkereina.

Sytomorfometristä analyysiä on käytetty kliinisenä diagnostiikkatyökaluna ja siitä on käsitelty kirjallisuudessa yli 30 vuoden ajan. Sitä on käytetty monissa elimissä, kuten nenänielun, ihon, virtsarakon, paksusuolen, rinnan ja kilpirauhanen. Morfometria on tietokoneistettu menettely, joka suoritetaan kvantitatiivisella analyysillä rakenteiden geometristen piirteiden avulla millä tahansa ulottuvuudella. Pahanlaatuisten ytimien ydinmorfometria, mukaan lukien koko, muoto ja kromatiinikuvio, ovat erilaisia ​​kuin ei -maltillisten solujen ytimet, mikä sallii ydinmorfometrian erottaa hyvänlaatuiset ja pahanlaatuiset tapaukset. Ydinmorfometriaa käyttämällä voimme kvantifioida useita parametreja, kuten ydinkokoon ja muotoon liittyvät parametrit.

Morfometria voi auttaa lisäyksenä morfologisiin piirteisiin kilpirauhasen vaurioissa, kun ne levitetään oikein sopivilla raja -arvoilla. Tähän mennessä suurin osa kuvaanalyysitutkimuksista on suoritettu histopatologisista osista ja vain harvat sytologisilla levityksillä tehdyt tutkimukset. On ehdotettu, että ydinmorfometriset parametrit, kuten ydinalue ja kehä, ja muototekijät voivat mahdollistaa erilaistumisen kilpirauhasen vaurioiden välillä. Morfometrian soveltaminen sytologiaan olisi hyödyllinen automatisoidun morfometrisen seulonnan kannalta sekä kilpirauhasen kasvainten tarkkaan diagnoosiin.

Kilpirauhasen histologisten liukujen tietokoneistettu morfometrinen tutkimus tunnisti tehokkaat morfometriset parametrit, jotka erottavat erot hyvänlaatuisten ja pahanlaatuisten epiteelisolujen ja luotettavimpien parametrien välillä, ovat pinta -ala, kehä, pituus, leveys, pyöreysaste ja ydinmemerien pyöreysaste.

Tutkimus paljasti sytomorfometrisen kuvaanalyysin sytomorfologialla, että potentiaali erotella paitsi hyvänlaatuista follikulaarista kasvainta/epäilyttävää follikulaarisen kasvaimen, pahanlaatuisia kilpirauhasen vaurioita, mutta se voi myös erottaa solmio -acliano -aclus -aclus -aduleiden ja follikulaarisen varianssin, follikulaarisen varianssin, follikulaarisen varianssin, follikulaarisen varianssin, follikulaarisen kasmin ja follikulaarisen kasvinsa follikulaarisen kasminsa follikulaarisen acleninsa follikulaarisen acrinooman allekirjoituksen ja follikulaarisen acliano -aclenoominsa vaunut, follikulaariset aclianoomat, Follikulaarinen karsinooma.

Monet molekyylipohjaiset analyyttiset tutkimukset ovat osoittaneet, että useimmat papillaariset kilpirauhasen karsinoomat johtuvat kahdesta erillisestä signalointimekanismista MAPK: n (mitogeen-aktivoidun proteiinikinaasin) reitin, joko BRAF-kaltaisen tai Ras-tyyppisen.

Yleisin geenimutaatio papillaarisessa kilpirauhasen karsinoomassa (60%) on missense-mutaatio BRAF-onkogeenissä, valiini (V), joka subuttoi glutamiinihappoa (E) aminohappoasennossa 600, joka lopulta ohjaa mitogeenia aktivoitua proteiinikinaasireitin signalointia.

Systemaattinen katsaus ja metaanalyysi osoittivat, että BRAFV600E: n mutatoituneiden kilpirauhasen karsinoomien (24,9%) toistumisnopeus oli kaksi kertaa korkea, kun villityyppinen papillaarinen kilpirauhasen karsinoomat (12,6%). BRAFV600E -mutatoituneilla PTC: llä on enemmän riski imusolmukkeiden etäpesäkkeille, ekstrathyoidaaliseen laajennukseen ja siihen liittyy edistyneitä AJCC III/IV -vaihetta.

Molekyylitestauksen saatavuus on helpottanut terapeuttisten aineiden käyttöä, jotka kohdistuvat spesifisiin mutaatioihin BRAFV600E: nä.

BRAFV600E-mutaatio on hyvin yleinen papillaarisessa kilpirauhasen karsinoomassa (esiintyvyys 38-90%) ja esiintyy harvoin kilpirauhasen vaurioissa, joten sen diagnostinen spesifisyys on korkea. Se johtaa mitogeeniaktivoidun proteiinikinaasireitin epänormaaliin aktivoitumiseen, jolla on tärkeä rooli kilpirauhasen karsinooman papillaarisen kehityksen yhteydessä. Raportoitiin, että hieno neulan aspiraatiosytologia yhdistettynä preoperatiiviseen BRAFV600E -mutaation havaitsemiseen voi parantaa kilpirauhanen kyhmyjen diagnostista suorituskykyä verrattuna pelkästään hienon neulan aspiraatiosytologiaan.

Pelkästään papillaarisen kilpirauhasen karsinooman BRAFV600E -mutaatiotestauksen herkkyys ja spesifisyys olivat vastaavasti 76,71% ja 100% ja nousivat vastaavasti 96,62%: iin ja 88,03%: iin yhdistettynä sytologiaan. Joten hienon neulan aspiraatiosytologian ja BRAFV600E -mutaatiotestien välinen yhdistelmä on vähentänyt vääriä negatiivisia kilpirauhasen karsinooman diagnoosissa.

Tutkimuksen tavoite:

• Arvioida pahanlaatuisuuden riski TNS: ssä, jonka FNAC on diagnosoitu SPTC: ksi.
• Erilaisten morfometristen parametrien karakterisoimiseksi tapauksissa, jotka diagnosoivat sytologisesti SPTC: ksi.
• BRAFV600E: n immunosytokemiallisen ekspression arvioimiseksi tapauksissa, jotka diagnosoivat sytologisesti SPTC: nä.
• Sytomorfometrisen analyysin hyödyllisyyden ja BRAFV600E: n immuunijärjestelmän tai yhdistelmän arvioimiseksi SPTC-tapausten diagnostisen tarkkuuden parantamiseksi.

Materiaali ja menetelmät:

Retrospektiivinen kuvaileva tutkimus suoritetaan kilpirauhasen kyhmyjen FNA-levyille ASSUT University Hospital -sairaalan patologian laitoksella kuuden vuoden ajanjakson aikana (2018-2025). Tutkimuksessa tarkastellaan papanicolaou (PAP) ja hematoksyliini- ja eosiini (H&E) värjättyjä 45 potilaalla, joilla kilpirauhasen karsinooma on diagnosoivat kilpirauhasen karsinoomaa (Bethesda V), yhdistettynä heidän resektoitujen kilpirauhasen sidennysten histopatologisiin tietoihin.

Sisällyttämiskriteerit:

Tutkimukseen vain papanicolaou (PAP) ja hematoksyliini- ja eosiini (H&E) -värjättyjä FNAC-levyjä, joilla on hyvin säilytetty ydinmorfologia, joka on diagnosoitu epäilyttäviksi.

Poissulkemiskriteerit:

• FNAC -levitykset, joilla ei ole histopatologista vahvistusta.
• Smuterit, joilla on laaja ydinvoiman päällekkäisyys ja huono morfologia.
• Tulehduksen, veren tai mukoidimateriaalin peittämät levitykset.
• Leikkaukset, joilla on solujen rappeuttavia muutoksia tai kuivausesineitä.
• Jokainen potilas, jolla on puuttuvia tietoja. Kaikki kliiniset, radiologiset ja patologiset tiedot kerätään sairauskertomuksista.

Henkilötiedot, mukaan lukien ikä ja sukupuoli, kliininen tieto kilpirauhasen kyhmyjen lukumääränä ja niiden koon ja kohdunkaulan imusolmukkeiden laajentumis- ja paineoireiden ja radiologisten tietojen läsnäolo tai puuttuminen kilpirauhasen kuvantamisraportointina ja tietojärjestelmänä (TI-Rads), joka sisältää koostumuksen, ehogeenisyyden, muodon, marginaalin ja puhkeamisen ekogeenisen kohdan.

Morfometrinen tutkimus:

Jokaista tapausta varten valitaan 50 ytimestä epäilyttävän soluryhmän follikulaarisoluista, joilla on hyvin säilyneitä morfologia. Tulehdukset, veri tai muciini peittävät ytimet, joilla on päällekkäinen, tai ne peittävät rappeuttavat muutokset suljetaan pois. Etusija annetaan eristetyille ytimille tai niille, jotka vain koskettavat toisiaan ilman päällekkäisyyttä puhtaalla taustalla. Jokainen valittu ydin, joka keskittyy 1000x: n öljyn upotusobjektiivien käyttämiseen, kuvataan digitaalikameralla ja analysoidaan kuvaanalyysiohjelmistolla. Ohjelmisto määrittelee tietyn numeron jokaiselle kuvan ytimelle ja kvantifioi sen morfometriset parametrit.

Immunosytokemiallinen tutkimus:

BRAFV600E -immunosytokemiaa sovelletaan niiden sakeutumisen jälkeen.

Smulit värjätään brafv600E -vasta -aineilla immunoperoksidaasivärjäyksellä visualisointimenetelmänä.

Vasta -aineen laimennus- ja inkubaatioaika suoritetaan valmistajan ohjeiden mukaisesti.

Korrelaatio sytomorfometristen tutkimusten tulosten välillä tehdään BRAFV600E -mutaatiotestien ja histopatologisten diojen tulosten tulokset.