Роль цитоморфометрии и иммуноцитохимии BRAFV600E с цитологическим диагнозом «подозрительно для папиллярной карциномы щитовидной железы»

Узелки щитовидной железы являются общим клиническим обнаружением в обычной ежедневной медицинской и хирургической практике. Они обнаруживаются ультрасонографией примерно у 70% клинически здоровых людей. Узелки щитовидной железы в четыре раза больше распространены у женщин, и до 90% случаев вызваны доброкачественными условиями.

Основной целью клинического лечения узелков щитовидной железы является исключение злокачественности (4-6,5% всех узлов щитовидной железы), оценка симптомов давления и оценка дисфункции щитовидной железы.

Многие факторы риска были выявлены, связанные с развитием узелков щитовидной железы, включая старший возраст, пол, повышенное или уменьшение йода, семейный анамнез рака или полипоза и анамнез головы и шеи. Наиболее распространенными узлами щитовидной железы являются коллоидные узелки, тиреоидит Хасимото, подостливый тиреоидит, кисты, фолликулярную аденому и рак щитовидной железы.

Что касается злокачественных опухолей щитовидной железы, частота рака щитовидной железы увеличилась за последние десятилетия в Соединенных Штатах и ​​на международном уровне. Это 7 -й самый распространенный рак в общей популяции и 5 -й наиболее распространенный у женщин. Частота заболеваемости раком щитовидной железы примерно в 3 раза выше у женщин, чем у мужчин, и она увеличивается с подросткового до среднего возраста, пик около 55 лет у женщин и 65 лет у мужчин, а затем снижается с старшим возрастом.

Увеличение количества случаев рака вызвано повышенной диагнозом в результате широкого распространенного использования диагностических инструментов, включая ультразвуковую визуализацию, цитологию аспирации тонкой иглы, компьютерная томография, магнитно -резонансная томография и фтородезоксиглюкоза позитронная томография. В дополнение к увеличению воздействия этиологических факторов как ионизирующего излучения в детстве и ожирении.

Папиллярная карцинома щитовидной железы (PTC) является наиболее распространенным гистологическим типом рака щитовидной железы, представляющей 90% случаев. Остальные 10% включают фолликулярную карциному щитовидной железы 4%, клеточную карциному Hurthle 2%, медуллярную карциному щитовидной железы 2% и анапластическую карциному щитовидной железы 1%.

Прогноз рака щитовидной железы превосходен, потому что большинство случаев - это папиллярные карциномы щитовидной железы, локализованные в щитовидной железе во время диагноза. 5-летняя выживаемость составляет 98,6% в целом, 99,9% для локализованных, 98,3% для региональных и 54,9% для отдаленных метастазий.

Аспирационная цитология аспирации из тонкой лиги (FNAC) щитовидной железы представляет собой точный диагностический тест с золотым стандартом, регулярно используемый при начальной оценке узелков щитовидной железы, поскольку он прост, безопасен, экономична и имеет благоприятную точность. Чувствительность и специфичность FNAC щитовидной железы составляют 68-98% и 56-100% соответственно с показателями отказов связаны с техникой и опытом работы.

Система Bethesda для сообщения о цитопатологии щитовидной железы (TBSRTC) была впервые опубликована в 2010 году и много раз обновлялась для стандартизации терминологии отчетности и для лучшей связи между цитопатологами и клиницистами.

Система Bethesda 2023 года для сообщения о цитопатологии щитовидной железы-это простая система отчетности, основанная на категории, для тонкой иглы аспирационной цитологии (FNAC) щитовидной железы и стала одним из наиболее используемых методов отчетности и диагностики и включает в себя 6 категорий.

Категория (i) не диагностическая с 13%(5-20) риск злокачественной опухоли, категория (ii), доброкачественная с 4%(2-7) риском злокачественности, категория (iii) атипия неопределенной значимости с 22%(13-30) риском злокачественности, категория (IV) Фолликулярное неоплаз 74%(67-83) риск злокачественных новообразований и категории (VI) злокачествен с риском злокачественности 97%(97-100).

Категория подозрительных для злокачественных новообразований используется, когда цитоморфологические особенности неубедительны и вызывают сильное подозрение к злокачественной опухоле, но количественно или качественно недостаточны для окончательного диагноза, а обычное лечение в этом случае - молекулярное тестирование, лобэктомия или почти полная тиреоидэктомия.

Подозрительные для злокачественных новообразований (SFM), согласно категории системы Bethesda, включает в себя подозрительные к папиллярной карциноме щитовидной железы (SPTC), которая является наиболее распространенным подтипом (более 90%) и менее часто подозрительным для не-перп-карциномы, который состоит из подозрений на медуллярную карциному, соблюдающую, яростную вакансию, приоритетно, для яркости, яркости для оборотной формы, связанная с приосвишечной формой, яростная для становядной формы для болезни, для яркости для приоритетно-яростной формы, связанная с приколистостью для приколистого формы, связанная с приколиливами, яркости для коптикости, яростная для копчасти. злокачественная опухоль не указана.

Подозрительно для папиллярной карциномы щитовидной железы диагностируется из -за пятнистых ядерных изменений (ничем не примечательные фолликулярные клетки, смешиваемые с клетками, показывающими увеличение ядра, бледность, канавки и тонкий хроматин, скудные или отсутствующие внутринуклеарные псевдоинсказии и отсутствующие папиллярные архитектуры), неверные ядерные изменения (обобщенные ядерные, нерегулированные, нерегулирующие ядерные изменения, нерегулированные, нерегулирующие ядерные изменения, нерегуляция, нерегуляция, нерегулированные, нерегулирующие ядерные изменения, нерегулирующие ядерные изменения. Ядерная мембрана и внутриядерная псевдоинклазии и отсутствующие папиллярную архитектуру и тела псаммомы), редко клеточный образец или цистозная дегенерация (фон цистозных мусора и макрофагов, ядерного увеличения и бледно -атипических гистоцитоидных клеток с цитоплазматическими вактули и отсутствующими папиллярными архитектурами и псмуммомой.

Подозрительно для папиллярной карциномы щитовидной железы диагностируется в 2,4-8% результатов аспирации тонкой иглы, а 60-80% из них подтверждаются в резецированных образцах папиллярной карциномой щитовидной железы, а остальные случаи показали доброкачественные состояния в качестве хронического лимфоцитарного тиреоидита (хешимото-тиуреоиг) и узловая гиперплазия. Хашимото тиреоидит является одним из наиболее распространенных факторов в ложноположительном диагнозе карциномы щитовидной железы из -за сильного перекрытия морфологических особенностей между ними.

Подозрительный для папиллярной диагностики карциномы щитовидной железы сбивает с толку хирургов и пациентов и затрудняет оптимальное хирургическое решение, поскольку распространенность злокачественных новообразований в этой диагностической категории высока. Некоторые хирурги приступают к общей тиреоидэктомии, и это заставляет около 25% пациентов (ложные положительные случаи) может страдать от переигрыши и нуждающейся в гормональной заместительной терапии на протяжении всей жизни. Было проведено много испытаний, чтобы повысить точность обнаружения злокачественных новообразований в этой категории и снизить возможность переиздания. Некоторые авторы применили подробные ультразвуковые критерии для случаев, диагностированных цитологически как подозрительные для папиллярной карциномы щитовидной железы и сообщили о повышении точности с 86% до 94%, в то время как другие выполняли интраоперационные замороженные секции и вспомогательные испытания в качестве молекулярных маркеров.

Цитоморфометрический анализ использовался в качестве клинического диагностического инструмента и обсуждается в литературе более 30 лет. Он использовался во многих органах, таких как носоглотка, кожа, мочевой пузырь, толстая кишка, грудь и щитовидная железа. Морфометрия - это компьютеризированная процедура, выполняемая с помощью количественного анализа геометрических особенностей структур с любым измерением. Ядерная морфометрия злокачественных ядер, включая размер, форму и паттерн хроматина, отличаются от незлокачественных клеточных ядер, что позволяет ядерной морфометрии различать доброкачественные и злокачественные случаи. Используя ядерную морфометрию, мы можем количественно оценить ряд параметров, таких как те, которые связаны с ядерными размерами и формой.

Морфометрия может помочь в качестве дополнения к морфологическим особенностям в поражениях щитовидной железы при правильном применении с соответствующими отсечками. До сих пор большинство исследований анализа изображений было проведено на гистопатологических срезах, и только несколько исследований, проведенных на цитологических мазках. Было высказано предположение, что ядерные морфометрические параметры, такие как ядерная площадь и периметр и факторы формы, могут позволить дифференцировку между поражениями щитовидной железы. Применение морфометрии к цитологии было бы полезно для автоматического морфометрического скрининга, а также точной диагностики опухолей щитовидной железы.

Компьютеризированное морфометрическое исследование гистологических слайдов щитовидной железы идентифицировало эффективные морфометрические параметры, которые различают различия между доброкачественными и злокачественными эпителиальными клетками и наиболее надежными параметрами - это область, периметр, длину, ширина, степень округлости и нерегулярность ядерных мембран.

Исследование показало, что анализ цитоморфометрического изображения с цитоморфологией имеет потенциал для различения не только доброкачественного, фолликулярного новообразования/подозрительного для фолликулярного новообразования, злокачественных поражений щитовидной железы системы Bethesda, но также может отличить узлы с фолликулярными паттернами в качестве фолликулярного варианта папиллярной карциномы, фолликулярной и фолликулярной карциномы.

Многие аналитические исследования на основе молекулярных оснований доказали, что большинство папиллярных карциномов щитовидной железы вызваны двумя различными сигнальными механизмами пути MAPK (митоген-активированная протеинкиназа), либо BRAF-подобные, либо Ras-подобные.

Наиболее распространенная мутация гена при папиллярной карциноме щитовидной железы (60%) представляет собой миссенс-мутация в онкогене BRAF, валиновой (V), заменяющей глутаминовую кислоту (E) в аминокислотной положении 600, что, наконец, стимулирует сигнализацию пути протеинкиназы протеинкиназы.

Систематический обзор и метаанализ показали, что частота рецидивов в мутированных папиллярных карциномах щитовидной железы BRAFV600E (24,9%) была в два раза высокой, так как папиллярные карциномы щитовидной железы дикого типа (12,6%). Мутированные PTCS BRAFV600E имеют больший риск для метастазирования лимфатических узлов, экстратиреоидного расширения и связанной с расширенной стадией AJCC III/IV.

Доступ к молекулярному тестированию способствовал использованию терапевтических агентов, нацеленных на конкретные мутации в качестве BRAFV600E.

Мутация BRAFV600E очень распространена при папиллярной карциноме щитовидной железы (частота 38-90%) и редко присутствует при доброкачественных поражениях щитовидной железы, поэтому его диагностическая специфичность высока. Это приводит к аномальной активации митоген-активированного пути протеинкиназы, который играет важную роль в развитии папиллярной карциномы щитовидной железы. Сообщалось, что цитология аспирации тонкой иглы в сочетании с предоперационным обнаружением мутаций BRAFV600E может улучшить диагностические характеристики для узлов щитовидной железы по сравнению с одной только цитологией тонкой иглы.

Чувствительность и специфичность тестирования мутаций BRAFV600E только для папиллярной карциномы щитовидной железы составляли 76,71% и 100% соответственно и увеличились до 96,62% и 88,03% соответственно в сочетании с цитологией. Таким образом, комбинация между цитологией аспирации тонкой иглы и тестами мутаций BRAFV600E снизила ложные негативы при диагностике карциномы папиллярной щитовидной железы.

Цель исследования:

• Оценить риск злокачественности в TNS, диагностируемых как SPTC с помощью FNAC.
• Охарактеризовать различные морфометрические параметры в случаях, диагностированных цитологически как SPTC.
• Оценить иммуноцитохимическую экспрессию BRAFV600E в случаях, диагностированных цитологически как SPTC.
• Чтобы оценить полезность цитоморфометрического анализа и иммумообразования BRAFV600E отдельно или в комбинации при обновлении диагностической точности случаев SPTC.

Материал и методы:

Ретроспективное описательное исследование будет проведено на мазках FNA узелков щитовидной железы, полученных на факультете патологии в университетской больнице Ассиута в течение шестилетнего периода (2018-2025). В исследовании будет рассмотрено папаниколау (PAP) и гематоксилин и эозин (H & E) окрашенные мазки от 45 пациентов с узелками щитовидной железы, диагностированными как подозрительные для папиллярной карциномы щитовидной железы (Bethesda V) в сочетании с гистопатологическими данными их резецированных образцов щитовидной железы.

Критерии включения:

Только папаниколау (PAP) и гематоксилин и эозин (H & E), окрашенные FNAC, с хорошо сохранившейся ядерной морфологией, диагностированной как подозрительные для папиллярной карциномы щитовидной железы, будут включены в исследование.

Критерии исключения:

• FNAC -мазки не хватает гистопатологического подтверждения.
• Мазки с обширным ядерным перекрытием и плохой морфологией.
• Мазки, скрытые воспалением, крови или слизистого материала.
• Мазки, демонстрирующие клеточные дегенеративные изменения или артефакты сушки.
• Любой пациент с отсутствующими данными. Все клинические, радиологические и патологические данные будут собираться из медицинских карт.

Персональные данные, включающие возраст и пол, клинические данные как количество узлов щитовидной железы, их размер, а также наличие или отсутствие расширения лимфатических узлов шейки матки и симптомов давления и радиологических данных, как сообщается о визуализации щитовидной железы и системе данных (TI-RAD), которые включают состав, эхогенность, форму, маржу и точковую эхогенную фокусировку.

Морфометрическое исследование:

Для каждого случая будут выбраны 50 ядер из фолликулярных клеток в подозрительной клеточной группе с хорошо сохранившейся морфологией. Ядра, которые будут демонстрировать перекрытие, будут скрыты воспалением, крови или муцином, или будут отображаться дегенеративные изменения. Предпочтение будет отдано изолированным ядрам или теми, кто просто касается друг друга, не перекрывая с чистым фоном. Каждое выбранное ядро, сфокусированное на использовании объектива 1000x нефтяного погружения, будет отображаться с использованием цифровой камеры и будет проанализировано с помощью программного обеспечения для анализа изображений. Программное обеспечение назначит определенное число каждому ядру в изображении и количественно определит его морфометрические параметры.

Иммуноцитохимическое исследование:

Иммуноцитохимия BRAFV600E будет применена на мазках после их пребывания.

Мазки будут окрашены антителами BRAFV600E с окрашиванием иммунопероксидазой в качестве метода визуализации.

Разведение антител и время инкубации будет проводиться в соответствии с инструкциями производителя.

Будут выполнены корреляция между результатами цитоморфометрических исследований, результатами тестов на мутацию BRAFV600E и результаты гистопатологических слайдов.