Rollen af ​​cytomorfometri og BRAFV600E -immunocytokemi med en cytologisk diagnose "mistænksom for papillær skjoldbruskkirtelkarcinom"

Skjoldbruskkirtelknudler er almindelige kliniske fund i rutinemæssig daglig medicinsk og kirurgisk praksis. De opdages ved ultrasonografi hos ca. 70% af klinisk sunde individer. Skjoldbruskkirtelknudler er fire gange mere udbredt hos kvinder, og op til 90% af tilfældene er forårsaget af godartede forhold.

Hovedmålet for klinisk håndtering af skjoldbruskkirtelknudler er udelukkelse af malignitet (4-6,5% af alle skjoldbruskkirtelknuder), vurdering af tryksymptomer og evaluering af skjoldbruskkirteldysfunktion.

Mange risikofaktorer blev identificeret relateret til udvikling af skjoldbruskkirtelknudler, herunder avanceret alder, køn, øget eller nedsat jod, familiehistorie med kræft eller polypose og historie med hoved- og nakkestråling. De mest almindelige skjoldbruskkirtelknudler er kolloidknudler, Hashimotos thyroiditis, subakut thyroiditis, cyster, follikulær adenom og kræft i skjoldbruskkirtlen.

Med hensyn til thyroidea maligne tumorer steg forekomsten af ​​kræft i skjoldbruskkirtlen i de sidste årtier i USA og internationalt. Det er den 7. mest almindelige kræft i den generelle befolkning og den 5. mest almindelige hos kvinder. Forekomsten af ​​kræft i skjoldbruskkirtlen er ca. 3 gange højere hos kvinder end mænd, og den øges fra ungdom til middelalderen med toppen omkring 55 år hos kvinder og 65 år hos mænd og falder derefter med ældre alder.

Stigningen af ​​antallet af kræfttilfælde er forårsaget af øget diagnose, der er resultatet af den udbredte anvendelse af diagnostiske værktøjer, herunder ultrasonografiafbildning, fin nålaspirationcytologi, computertomografi, magnetisk resonansafbildning og fluorodeoxyglucose -positronemissionstomografi. Ud over stigningen i eksponeringen for de etiologiske faktorer som ioniserende stråling under barndom og fedme.

Papillær skjoldbruskkirtelkarcinom (PTC) er den mest almindelige histologiske type skjoldbruskkirtelkræft, der repræsenterer 90% af tilfældene. De resterende 10% inkluderer follikulær skjoldbruskkirtelkarcinom 4%, Hurthle -cellekarcinom 2%, medullær skjoldbruskkirtelkarcinom 2% og anaplastisk skjoldbruskkirtelkarcinom 1%.

Prognosen for kræft i skjoldbruskkirtlen er fremragende, fordi de fleste tilfælde er papillære skjoldbruskkirtelkarcinomer lokaliseret til skjoldbruskkirtlen under diagnosen. Den 5-årige overlevelsesrate er 98,6% samlet, 99,9% for lokaliseret, 98,3% for regionale og 54,9% for fjern metastase.

Fin-behovsaspirationscytologi (FNAC) i skjoldbruskkirtlen er en guldstandard nøjagtigt diagnostisk test, der rutinemæssigt anvendes i den indledende evaluering af skjoldbruskkirtelknuder, da den er enkel, sikker, omkostningseffektiv og har gunstig nøjagtighed. Følsomheden og specificiteten af ​​skjoldbruskkirtel FNAC er henholdsvis 68-98% og 56-100% med fejlhastigheder er på grund af ydelsens teknik og oplevelse.

Bethesda -systemet til rapportering af skjoldbruskkirtelcytopatologi (TBSRTC) blev først offentliggjort i 2010 og opdateret mange gange for at standardisere rapporteringsterminologi og for bedre kommunikation mellem cytopatologer og klinikere.

Bethesda-systemet i 2023 til rapportering af skjoldbruskkirtelcytopatologi er et simpelt kategoribaseret rapporteringssystem for fin nålaspirationscytologi (FNAC) af skjoldbruskkirtlen og blev en af ​​de mest anvendte rapporterings- og diagnostiske metoder og inkluderer 6 kategorier.

Kategori (i) Non Diagnostic med 13%(5-20) Risiko for malignitet, kategori (ii) godartet med 4%(2-7) risiko for malignitet, kategori (iii) atypi af ubestemt betydning med 22%(13-30) risiko for malignitet, kategori (IV) Follicular Neoplasm med 30%(23-34) Risiko for malignitet, kategori (V) mistænksom 74%(67-83) risiko for malignitet og kategori (VI) malign med 97%(97-100) risiko for malignitet.

Den mistænkelige for kategorien malignitet bruges, når cytomorfologiske træk er uomgængelig og rejser en stærk mistanke om malignitet, men er kvantitativt eller kvalitativt utilstrækkelig til en endelig diagnose, og den sædvanlige håndtering i dette tilfælde er molekylær test, lobektomi eller i nærheden af ​​total thyroidektomi.

Den mistænkelige for malignitet (SFM) i henhold til Bethesda-systemkategorien inkluderer mistænksom for papillær skjoldbruskkirtelkarcinom (SPTC), som er den mest almindelige undertype (mere end 90%) og mindre hyppigt mistænksom for ikke-papillær karcinom, som består af mistænksom for medularisk thyreoidkarcinom, mistænksom for maligne lymfom, suspension af dårligt differentier for malignitet, der ikke er angivet på anden måde.

Mistænksom for papillær skjoldbruskkirtelkarcinom diagnosticeres på grund af ujævn nukleare ændringer (ikke -bemærkelsesværdige follikulære celler blandet med celler, der viser nuklearforstørrelse, blekhed, riller og fine kromatin, snavs eller fraværende intranuklear pseudoinclusioner og fraværende papillær arkitektur), ufuldete nukleære ændringer (generel nuklear udvidelse, pallor- og riller, rammer, scants arkitektur Fraværende uregelmæssig nuklear membran og intranukleære pseudoinclusioner og fraværende papillær arkitektur og psammoma -legemer), tyndt cellulært prøve eller cystisk degeneration (baggrund af cystisk affald og makrofager, nuklear forstørrelsesarkitik og pallor, atypiske histocytoidceller med cytiskroplasmiske vakuoler og fraværende papillaration og psammoma.

Mistænksom for papillær skjoldbruskkirtelkarcinom diagnosticeres i 2,4-8% af fine nålaspirationsresultater, og 60-80% af dem bekræftes i resekterede prøver for at være papillær thyroidekarcinom og resten af ​​tilfælde viste godartede tilstande asisk lymfocytisk thyroiditis (hashimoto thyroidis) og nodulære hyperplasia. Hashimoto thyroiditis er en af ​​de mest almindelige faktorer i falske positive papillære skjoldbruskkirteldiagnose på grund af den stærke overlapning af morfologiske træk mellem dem.

Mistænksom for papillær thyroidea -karcinomdiagnose er forvirrende for kirurger og patienter og gør den optimale kirurgiske beslutning vanskelig, da forekomsten af ​​malignitet i denne diagnostiske kategori er høj. Nogle kirurger fortsætter med total thyroidektomi, og dette gør ca. 25% af patienterne (falske positive tilfælde) kan lide af overskridelse og i behov for hormonudskiftningsterapi for livet. Der blev foretaget mange forsøg for at øge nøjagtigheden af ​​detektion af malignitet i denne kategori og mindske muligheden for overskridelse. Nogle forfattere anvendte detaljerede ultrasonografiske kriterier for tilfælde, der blev diagnosticeret cytologisk som mistænkelige for papillær skjoldbruskkirtelkarcinom og rapporterede stigning i nøjagtighed fra 86% til 94%, mens andre udførte intraoperativ frosset sektion og tilknyttede tests som molekylære markører.

Cytomorphometrisk analyse er blevet anvendt som et klinisk diagnostisk værktøj og diskuteret i litteraturen i over 30 år. Det er blevet brugt i mange organer som nasopharynx, hud, urinblære, kolon, bryst og skjoldbruskkirtel. Morfometri er edb -procedure udført gennem den kvantitative analyse af geometriske træk ved strukturer med enhver dimension. Den nukleare morfometri af ondartede kerner inklusive størrelse, form og kromatinmønster er forskellige fra dem, der ikke er maligne cellekerner, som gør det muligt for nuklear morfometri at skelne mellem godartede og ondartede tilfælde. Ved hjælp af nuklear morfometri kan vi kvantificere et antal parametre, såsom dem, der er relateret til nuklear størrelse og form.

Morfometri kan hjælpe som et supplement til morfologiske træk i skjoldbruskkirtel -læsioner, når de er korrekt påført med passende cutoffs. Indtil nu er størstedelen af ​​billedanalyseundersøgelser blevet udført på histopatologiske sektioner, og kun få undersøgelser udført på cytologisk udstrygning. Det er blevet antydet, at nukleare morfometriske parametre såsom nuklear område og omkreds og formfaktorer kan muliggøre differentiering mellem skjoldbruskkirtel -læsioner. Anvendelse af morfometri til cytologi ville være nyttigt med henblik på automatiseret morfometrisk screening såvel som nøjagtig diagnose af skjoldbruskkirtel -tumorer.

Den edb -morfometriske undersøgelse af thyroidea -histologiske lysbilleder identificerede effektive morfometriske parametre, der adskiller forskellene mellem godartede og ondartede epitelceller og de mest pålidelige parametre er område, omkreds, længde, bredde, graden af ​​runde og uregelmæssighed af nukleare membraner.

En undersøgelse afslørede, at den cytomorfometriske billedanalyse med cytomorfologi har potentialet til ikke kun at skelne de godartede, follikulære neoplasma/mistænkelige for en follikulær neoplasma, ondartet skjoldbruskkirtel -læsioner af Bethesda -systemet, men også skelne knuder med follikulære mønstre som follikulære variant af papillary carcinoma, follicaLicular og follet addenoma og follikulære mønstre som follikulære variant af papillary carcinoma, foll, follic addenoma og follikulære mønstre Follicular carcinoma.

Mange molekylbaserede analytiske undersøgelser har vist, at de fleste papillære skjoldbruskkirtelkarcinomer er forårsaget af to forskellige signalmekanismer for MAPK (mitogen-aktiveret proteinkinase) -vej, enten BRAF-lignende eller RAS-lignende.

Den mest almindelige genmutation i papillær skjoldbruskkirtelkarcinom (60%) er en missense-mutation i BRAF-onkogen, valin (V), der substituerer glutaminsyre (E) ved aminosyreposition 600, som til sidst driver mitogen-aktiveret proteinkinase-sti-signalering.

En systematisk gennemgang og metaanalyse viste, at tilbagefaldshastigheden i BRAFV600E-muterede papillære skjoldbruskkirtelkarcinomer (24,9%) var to gange høj som vildtype papillær skjoldbruskkirtelkarcinomer (12,6%). BRAFV600E -muteret PTC'er har mere risiko for lymfeknude -metastase, ekstratyroidal udvidelse og forbundet med avanceret AJCC III/IV -trin.

Adgangen til molekylær testning har lettet brugen af ​​terapeutiske midler, der er målrettet mod specifikke mutationer som BRAFV600E.

BRAFV600E-mutationen er meget almindelig i papillær skjoldbruskkirtelkarcinom (38-90% forekomst) og sjældent til stede i godartede skjoldbruskkirtel-læsioner, så dens diagnostiske specificitet er høj. Det fører til unormal aktivering af den mitogen-aktiverede proteinkinasevej, der spiller en vigtig rolle i udviklingen af ​​papillær skjoldbruskkirtelkarcinom. Det blev rapporteret, at fine nålaspirationscytologi kombineret med den preoperative BRAFV600E -mutationsdetektion kan forbedre den diagnostiske ydelse for skjoldbruskkirtelknudler sammenlignet med fin nålaspirationscytologi alene.

Følsomheden og specificiteten af ​​BRAFV600E -mutationstest alene for papillær skjoldbruskkirtelkarcinom var henholdsvis 76,71% og 100% og steg til henholdsvis 96,62% og 88,03%, når de kombineres med cytologi. Så kombinationen mellem fine nålaspirationscytologi og BRAFV600E -mutationstest har reduceret de falske negativer i papillær thyroidea -karcinomdiagnose.

Mål med undersøgelsen:

• At evaluere risikoen for malignitet i TNS, der er diagnosticeret som SPTC af FNAC.
• At karakterisere de forskellige morfometriske parametre i tilfælde, der er diagnosticeret cytologisk som SPTC.
• At evaluere den immunocytokemiske ekspression af BRAFV600E i tilfælde, der er diagnosticeret cytologisk som SPTC.
• At evaluere anvendeligheden af ​​cytomorphometrisk analyse og BRAFV600E-immunfarvning alene eller i kombination i opgradering af den diagnostiske nøjagtighed af SPTC-tilfælde.

Materiale og metoder:

En retrospektiv beskrivende undersøgelse vil blive udført på FNA-udstrygning af skjoldbruskkirtelknudler, der er modtaget i Department of Pathology på Assiut University Hospital over en seks-årig periode (2018-2025). Undersøgelsen vil gennemgå Papanicolaou (PAP) og hæmatoxylin & eosin (H&E) farvede udstrygning fra 45 patienter med skjoldbruskkirtelknudler, der blev diagnosticeret som mistænkelige for papillære skjoldbruskkirtelmagasin.

Inkluderingskriterier:

Kun Papanicolaou (PAP) og hæmatoxylin & eosin (H&E) farvet FNAC-udstrygning med velbevaret nuklear morfologi, der er diagnosticeret som mistænksom for papillær skjoldbruskkirtelkarcinom, vil blive inkluderet i undersøgelsen.

Ekskluderingskriterier:

• FNAC -udstrygning mangler histopatologisk bekræftelse.
• Udstrygning med omfattende nuklear overlapning og dårlig morfologi.
• Udstrygninger skjult af betændelse, blod eller mucoid materiale.
• Udstrygning, der udviser cellulære degenerative ændringer eller tørring af artefakter.
• Enhver patient med manglende data. Alle kliniske, radiologiske og patologiske data indsamles fra medicinske poster.

Personlige data inklusive alder og køn, kliniske data som antal skjoldbruskkirtelknoduler og deres størrelse og tilstedeværelsen eller fraværet af cervikale lymfeknudeforstørrelse og tryksymptomer og radiologiske data som thyroidea-billeddannelsesrapportering og datasystem (TI-RADs), der inkluderer sammensætning, ekkogenicitet, form, margin og punktat echogenisk foci vil være collected.

Morfometrisk undersøgelse:

For hvert tilfælde vælges 50 kerner fra follikulære celler inden for den mistænkelige cellulære gruppe med velbevaret morfologi. Kerner, der udviser overlappende, vil blive skjult af betændelse, blod eller mucin, eller vil vise degenerative ændringer, vil blive udelukket. Der vil blive givet præference til isolerede kerner eller dem, der bare berører hinanden uden overlapning med en ren baggrund. Hver valgt kerne med fokus på at bruge en 1000x olie -nedsænkningsmålobjektiv vil blive afbildet ved hjælp af et digitalt kamera og vil blive analyseret med billedanalysesoftware. Softwaren tildeler et specifikt tal til hver kerne på billedet og kvantificerer dets morfometriske parametre.

Immunocytokemisk undersøgelse:

BRAFV600E Immunocytokemi vil blive påført på udstrygningen efter at have destination af dem.

Udstrygninger er farvet med BRAFV600E -antistoffer med immunoperoxidasefarvning som en visualiseringsmetode.

Antistoffortynding og inkubationstid vil blive udført i henhold til producentens instruktioner.

Korrelation mellem resultaterne af cytomorfometriske undersøgelser, resultater af BRAFV600E -mutationstest og resultaterne af histopatologiske lysbilleder vil blive udført.