Ruolo della citomorfometria e dell'immunocitochimica BRAFV600E con una diagnosi citologica "sospettosa per il carcinoma tiroideo papillare"

I noduli tiroidei sono una scoperta clinica comune nella pratica medica e chirurgica quotidiana di routine. Sono scoperti mediante ecografia in circa il 70% degli individui clinicamente sani. I noduli tiroidei sono quattro volte più diffusi nelle donne e fino al 90% dei casi sono causati da condizioni benigne.

L'obiettivo principale della gestione clinica dei noduli tiroidei è l'esclusione della malignità (4-6,5% di tutti i noduli tiroidei), la valutazione dei sintomi di pressione e la valutazione della disfunzione tiroidea.

Molti fattori di rischio sono stati identificati correlati allo sviluppo di noduli tiroidei tra cui età avanzata, sesso, aumento o riduzione dello iodio, storia familiare di cancro o poliposi e storia delle radiazioni della testa e del collo. I noduli tiroidei più comuni sono i noduli colloidi, la tiroidite di Hashimoto, la tiroidite subacuta, le cisti, l'adenoma follicolare e i tumori della tiroide.

Per quanto riguarda i tumori maligni tiroidei, l'incidenza del cancro alla tiroide è aumentata negli ultimi decenni negli Stati Uniti e a livello internazionale. È il settimo tumore più comune nella popolazione generale e il 5 ° più comune nelle donne. L'incidenza del cancro alla tiroide è circa 3 volte superiore nelle donne rispetto agli uomini e aumenta dall'adolescenza alla mezza età con il picco di circa 55 anni nelle donne e 65 anni negli uomini, quindi diminuendo con l'età avanzata.

L'aumento del numero di casi di cancro è causato da una maggiore diagnosi derivante dall'uso diffuso di strumenti diagnostici tra cui imaging ecografico, citologia di aspirazione a aghi sottili, tomografia computerizzata, imaging a risonanza magnetica e tomografia a emissione di positroni di fluorodeossiglucosio. Oltre all'aumento dell'esposizione ai fattori eziologici come radiazioni ionizzanti durante l'infanzia e l'obesità.

Il carcinoma tiroideo papillare (PTC) è il tipo istologico più comune di tumori tiroidei che rappresentano il 90% dei casi. Il restante 10% include carcinoma tiroideo follicolare 4%, carcinoma a cellule Hurthle 2%, carcinoma tiroideo midollare 2% e carcinoma tiroideo anaplastico 1%.

La prognosi del carcinoma tiroideo è eccellente perché la maggior parte dei casi sono carcinomi tiroidei papillari localizzati nella ghiandola tiroidea durante la diagnosi. Il tasso di sopravvivenza a 5 anni è complessivo del 98,6%, 99,9% per localizzato, 98,3% per regionale e 54,9% per metastasi distanti.

La citologia di aspirazione a netto fine (FNAC) della ghiandola tiroidea è un test diagnostico accurato di gold standard abitualmente utilizzato nella valutazione iniziale dei noduli tiroidei in quanto è semplice, sicuro, conveniente e ha una precisione favorevole. La sensibilità e la specificità del FNAC tiroideo sono rispettivamente del 68-98% e del 56-100% con i tassi di fallimento sono dovuti alla tecnica e all'esperienza delle prestazioni.

Il sistema Bethesda per la segnalazione della citopatologia della tiroide (TBSRTC) è stato pubblicato per la prima volta nel 2010 e aggiornato molte volte per standardizzare la terminologia dei rapporti e per una migliore comunicazione tra citopatologi e clinici.

Il sistema Bethesda 2023 per la segnalazione della citopatologia della tiroide è un semplice sistema di reporting basato su categorie per la citologia di aspirazione di aghi sottili (FNAC) della tiroide e divenne uno dei metodi di reporting e diagnostici più utilizzati e include 6 categorie.

Categoria (i) non diagnostica con rischio 13%(5-20) di malignità, categoria (ii) benigna con rischio del 4%(2-7) di malignità, categoria (iii) atipia di significato indeterminato con il 22%(13-30) rischio di malignità, categoria (IV) della categoria (IV) della categoria (IV) della categoria (IV) della categoria (IU) 74%(67-83) Rischio di malignità e categoria (VI) maligno con rischio di malignità del 97%(97-100).

La categoria sospettosa per la malignità viene utilizzata quando le caratteristiche citomorfologiche sono inconcludenti e aumentano un forte sospetto di malignità, ma sono insufficienti quantitativamente o qualitativamente per una diagnosi conclusiva e la solita gestione in questo caso è il test molecolare, la lobectomia o la tiroidectomia quasi totale.

The suspicious for malignancy (SFM) according to Bethesda system category includes suspicious for papillary thyroid carcinoma (SPTC) which is the most common subtype (more than 90%) and less frequently suspicious for non-papillary carcinoma which consists of suspicious for medullary thyroid carcinoma, suspicious for malignant lymphoma, suspicious for poorly differentiated carcinoma and suspicious per malignità non altrimenti specificata.

Il sospetto per il carcinoma tiroideo papillare viene diagnosticato a causa di cambiamenti nucleari irregolari (cellule follicolari irrilevanti miscelate con cellule che mostrano ingrandite nucleari, pallore, scanalature e cromatina fine, scarse o fullei assenti di calibri, calibri, calibri nucleari, pallo -palro, pallo -palro, pallo -palro, pallo -palro, paloincosta o assente membrana nucleare irregolare e pseudoinclusioni intranucleari e assente architettura papillare e corpi di psammoma), campione scarsamente cellulare o degenerazione cistica (sfondo di detriti cistici e macrofagi di pazzo e pazzo di pazzo di pazzo, alta di pazzo di pazzo e macrofagi di pazzo di pazzo di pazzo e macrofagi di pazzo di pazzo di pazzo e macrofagi di pazzo di pazzo di pazzo e paleofagi di pazzo.

Il sospetto per il carcinoma tiroideo papillare viene diagnosticato nel 2,4-8% dei risultati di aspirazione dell'ago fine e il 60-80% di essi è confermato nei campioni resecati come carcinoma tiroideo papillare e il resto dei casi ha mostrato condizioni benigne come linfocitite cronica (Hashimoto Iperplasia. La tiroidite Hashimoto è uno dei fattori più comuni nella diagnosi di carcinoma tiroideo papillare falso positivo a causa della forte sovrapposizione delle caratteristiche morfologiche tra loro.

Sospetto per la diagnosi papillare del carcinoma tiroideo è confuso per i chirurghi e i pazienti e rende difficile la decisione chirurgica ottimale poiché la prevalenza della malignità in questa categoria diagnostica è elevata. Alcuni chirurghi procedono per la tiroidectomia totale e questo fa sì che circa il 25% dei pazienti (casi falsi positivi) possa soffrire di chirurgia eccessiva e bisognosa di terapia ormonale sostitutiva per la vita. Sono stati fatti molti studi per aumentare l'accuratezza del rilevamento della malignità in questa categoria e ridurre la possibilità di chirurgia eccessiva. Alcuni autori hanno applicato criteri ecografici dettagliati per i casi diagnosticati citologicamente come sospetti per il carcinoma tiroideo papillare e hanno riportato un aumento dell'accuratezza dall'86% al 94%, mentre altri hanno eseguito sezione congelata intraoperatoria e test ausiliari come marcatori molecolari.

L'analisi citomorfometrica è stata utilizzata come strumento diagnostico clinico e discussa in letteratura da oltre 30 anni. È stato usato in molti organi come nasofaringe, pelle, vescica urinaria, colon, seno e tiroide. La morfometria è una procedura computerizzata eseguita attraverso l'analisi quantitativa delle caratteristiche geometriche delle strutture con qualsiasi dimensione. La morfometria nucleare dei nuclei maligni, compresa la dimensione, la forma e il modello di cromatina, sono diverse da quelle dei nuclei cellulari non maligni, che consente alla morfometria nucleare di distinguere tra casi benigni e maligni. Usando la morfometria nucleare, possiamo quantificare una serie di parametri come quelli relativi alla dimensione e alla forma nucleare.

La morfometria può aiutare in aggiunta alle caratteristiche morfologiche nelle lesioni tiroidee quando applicato correttamente con tagli appropriati. Fino ad ora, la maggior parte degli studi di analisi dell'immagine sono stati condotti su sezioni istopatologiche e solo pochi studi condotti su strisci citologici. È stato suggerito che i parametri morfometrici nucleari come l'area nucleare e i fattori perimetrali e di forma possano consentire la differenziazione tra lesioni tiroidee. L'applicazione della morfometria alla citologia sarebbe utile ai fini dello screening morfometrico automatizzato, nonché una diagnosi accurata dei tumori tiroidei.

Lo studio morfometrico computerizzato delle diapositive istologiche tiroidee ha identificato parametri morfometrici efficienti che distinguono le differenze tra cellule epiteliali benigne e maligne e i parametri più affidabili sono l'area, il perimetro, la lunghezza, la larghezza, il grado di rotondità e irregolarità delle membrane nucleari.

Uno studio ha rivelato che l'analisi dell'immagine citomorfometrica con citomorfologia ha il potenziale per distinguere non solo il neoplasia benigno e follicolare/sospettoso per una neoplasia follicolare, lesioni della tiroide maligna di adenoma, ma anche di follicola carcinoma.

Molti studi analitici a base molecolare hanno dimostrato che la maggior parte dei carcinomi tiroidei papillari sono causati da due meccanismi di segnalazione distinti della via MAPK (proteina chinasi attivata dal mitogeno), sia BRAF che simile a RAS.

La mutazione genica più comune nel carcinoma tiroideo papillare (60%) è una mutazione missenso nell'oncogene BRAF, la valina (V) che sostituisce l'acido glutammico (E) alla posizione di aminoacido 600, che alla fine guida la segnalazione della percorso della proteina chinasi attivata dal mitogeno.

Una revisione sistematica e una meta-analisi hanno mostrato che il tasso di ricorrenza nei carcinomi tiroidei papillari mutati BRAFV600E (24,9%) era alto due volte come carcinomi tiroidei papillari di tipo selvaggio (12,6%). I PTC mutati BRAFV600E hanno maggiori rischi per la metastasi linfonodica, l'estensione extratiroidea e associata allo stadio avanzato AJCC III/IV.

L'accesso ai test molecolari ha facilitato l'uso di agenti terapeutici che mirano a mutazioni specifiche come BRAFV600E.

La mutazione BRAFV600E è molto comune nel carcinoma tiroideo papillare (incidenza del 38-90%) e raramente presente nelle lesioni tiroidei benigno, quindi la sua specificità diagnostica è alta. Porta all'attivazione anormale della via della proteina chinasi attivata dal mitogeno che svolge un ruolo importante nello sviluppo del carcinoma tiroideo papillare. È stato riferito che la citologia di aspirazione con aghi sottili combinata con il rilevamento preoperatorio di mutazione BRAFV600E può migliorare le prestazioni diagnostiche per i noduli tiroidei rispetto alla sola citologia di aspirazione con aghi sottili.

La sensibilità e la specificità dei test di mutazione BRAFV600E da soli per il carcinoma tiroideo papillare erano rispettivamente del 76,71% e del 100% e aumentati rispettivamente al 96,62% e all'88,03% se combinati con la citologia. Pertanto, la combinazione tra citologia di aspirazione con aghi sottili e test di mutazione BRAFV600E ha ridotto i falsi negativi nella diagnosi papillare del carcinoma tiroideo.

Obiettivo dello studio:

• Valutare il rischio di malignità in TNS diagnosticato come SPTC da FNAC.
• Per caratterizzare i diversi parametri morfometrici nei casi diagnosticati citologicamente come SPTC.
• Per valutare l'espressione immunocitochimica di BRAFV600E nei casi diagnosticati citologicamente come SPTC.
• Per valutare l'utilità dell'analisi citomorfometrica e la macchia immunitaria BRAFV600E da solo o in combinazione nell'aggiornamento dell'accuratezza diagnostica dei casi SPTC.

Materiale e metodi:

Uno studio descrittivo retrospettivo verrà condotto sugli strisci FNA di noduli tiroidei ricevuti nel Dipartimento di Patologia presso l'ospedale universitario Assiut per un periodo di sei anni (2018-2025). Lo studio esaminerà papanicolaou (PAP) ed ematossilina ed eosina (H&E) strisciate colorate da 45 pazienti con noduli tiroidei diagnosticati come sospetti per il carcinoma tiroideo papillare (Bethesda V), combinati con i dati istopatologici dei loro specifici tiroidei reincosti.

Criteri di inclusione:

Solo papanicolaou (PAP) ed ematossilina ed eosina (H&E) hanno colorato gli strisce FNAC con morfologia nucleare ben conservata diagnosticata come sospetto per il carcinoma tiroideo papillare.

Criteri di esclusione:

• Sungors FNAC privo di conferma istopatologica.
• Stringi con estesa sovrapposizione nucleare e scarsa morfologia.
• Smears oscurati da infiammazione, sangue o materiale mucoide.
• Smears che esibiscono cambiamenti degenerativi cellulari o artefatti di essiccazione.
• Qualsiasi paziente con dati mancanti. Tutti i dati clinici, radiologici e patologici saranno raccolti dalle cartelle cliniche.

Dati personali tra cui età e sesso, dati clinici come numero di noduli tiroidei e loro dimensioni e la presenza o l'assenza di ingrandimento del linfonodo cervicale e sintomi di pressione e dati radiologici come imaging tiroideo e sistema di dati (TI-RADS) che include la composizione, la composizione, la composizione, che si sono coltizzate la focalizzazione ecogenica.

Studio morfometrico:

Per ogni caso, saranno selezionati 50 nuclei da cellule follicolari all'interno del gruppo cellulare sospetto, con morfologia ben conservata. I nuclei che mostreranno sovrapposti, saranno oscurati da infiammazione, sangue o mucina o mostreranno cambiamenti degenerativi. La preferenza verrà data ai nuclei isolati o a quelli che si toccano a vicenda senza sovrapposizioni con uno sfondo pulito. Ogni nucleo selezionato incentrato sull'uso di una lente obiettivo di immersione di petrolio da 1000x verrà ripreso utilizzando una fotocamera digitale e verrà analizzato con il software di analisi delle immagini. Il software assegnerà un numero specifico a ciascun nucleo nell'immagine e quantificherà i suoi parametri morfometrici.

Studio immunocitochimico:

L'immunocitochimica BRAFV600E verrà applicata sugli strisci dopo averli destinati.

Le strisce saranno colorate con anticorpi BRAFV600E con colorazione immunoperossidasi come metodo di visualizzazione.

La diluizione degli anticorpi e il tempo di incubazione saranno condotti secondo le istruzioni del produttore.

Verranno eseguiti la correlazione tra i risultati degli studi citomorfometrici, i risultati dei test di mutazione BRAFV600E e i risultati delle diapositive istopatologiche.