Rollen av cytomorfometri og BRAFV600E immunocytokjemi med en cytologisk diagnose "mistenkelig for papillær skjoldbruskkjertelkarsinom"

Skjoldbruskkjertelknuter er vanlige kliniske funn i rutinemessig daglig medisinsk og kirurgisk praksis. De blir oppdaget ved ultrasonografi hos omtrent 70% av klinisk sunne individer. Skjoldbruskkjertelen er fire ganger mer utbredt hos kvinner, og opptil 90% av tilfellene er forårsaket av godartede forhold.

Hovedmålet for klinisk behandling av skjoldbruskkjertelknuter er ekskludering av malignitet (4-6,5% av alle skjoldbruskkjertelknuter), vurdering av trykksymptomer og evaluering av dysfunksjon i skjoldbruskkjertelen.

Mange risikofaktorer ble identifisert relatert til utvikling av skjoldbruskkjertelknuter inkludert avansert alder, kjønn, økt eller redusert jod, familiehistorie med kreft eller polypose og historie med hode- og nakkestråling. De vanligste skjoldbruskkjertelknutene er kolloidknuter, Hashimotos skjoldbruskkjertel, subakutt tyreoiditt, cyster, follikulær adenom og kreft i skjoldbruskkjertelen.

Når det gjelder ondartede svulster i skjoldbruskkjertelen, økte forekomsten av kreft i skjoldbruskkjertelen de siste tiårene i USA og internasjonalt. Det er den 7. vanligste kreft i befolkningen generelt og den 5. vanligste hos kvinner. Forekomsten av kreft i skjoldbruskkjertelen er omtrent 3 ganger høyere hos kvinner enn menn, og den øker fra ungdomstiden til middelalder med toppen rundt 55 år hos kvinner og 65 år hos menn som deretter avtar med eldre alder.

Økningen av antall krefttilfeller er forårsaket av økt diagnose som følge av den utbredte bruken av diagnostiske verktøy inkludert ultrasonografiskimaging, fin nålaspirasjonscytologi, computertomografi, magnetisk resonansavbildning og fluorodeoxyglucose positron emisjonstomografi. I tillegg til økningen i eksponeringen for de etiologiske faktorene som ioniserende stråling under barndom og overvekt.

Papillær skjoldbruskkjertelkarsinom (PTC) er den vanligste histologiske typen kreft i skjoldbruskkjertelen som representerer 90% av tilfellene. De resterende 10% inkluderer follikulær skjoldbruskkjertelkarsinom 4%, hastighetscellekarsinom 2%, medullær skjoldbruskkjertelkarsinom 2% og anaplastisk skjoldbruskkjertelkarsinom 1%.

Prognosen for kreft i skjoldbruskkjertelen er utmerket fordi de fleste tilfeller er papillær skjoldbruskkjertelkarsinomer lokalisert til skjoldbruskkjertelen under diagnosen. 5-års overlevelsesraten er 98,6% totalt, 99,9% for lokalisert, 98,3% for regionale og 54,9% for fjern metastase.

Fine nålespirasjonscytologi (FNAC) av skjoldbruskkjertelen er en gullstandard nøyaktig diagnostisk test rutinemessig brukt i den første evalueringen av skjoldbruskkjertelen knuter, da det er enkelt, trygt, kostnadseffektivt og har gunstig nøyaktighet. Følsomheten og spesifisiteten til skjoldbrusk-FNAC er henholdsvis 68-98% og 56-100% med feilhastigheter på grunn av teknikken og opplevelsen av ytelsen.

Bethesda -systemet for rapportering av skjoldbruskkjertelcytopatologi (TBSRTC) ble først publisert i 2010 og oppdatert mange ganger for å standardisere rapporteringsterminologi og for bedre kommunikasjon mellom cytopatologer og klinikere.

2023 Bethesda-systemet for rapportering av skjoldbruskkjertelcytopatologi er et enkelt kategoribasert rapporteringssystem for fin nålaspirasjonscytologi (FNAC) av skjoldbruskkjertel og ble en av de mest brukte rapportering og diagnostiske metoder og inkluderer 6 kategorier.

Kategori (i) ikke-diagnostisk med 13%(5-20) risiko for malignitet, kategori (ii) godartet med 4%(2-7) risiko for malignitet, kategori (iii) atypi av ubestemt betydning med 22%(13-----) risiko for malignitet, kategori (IV) kategori Foll-neoplasm med 30%(234) risiko for (IV) -kategori Follical neoplasm med 30%(23-34) risiko (IV). 74%(67-83) risiko for malignitet og kategori (VI) ondartet med 97%(97-100) risiko for malignitet.

Den mistenkelige for malignitetskategori brukes når cytomorfologiske trekk er uoverensstemmende og reiser en sterk mistanke om malignitet, men er kvantitativt eller kvalitativt utilstrekkelig for en avgjørende diagnose, og den vanlige behandlingen i dette tilfellet er molekylær testing, lobektomi eller nær total skjoldbruskkjertel.

The suspicious for malignancy (SFM) according to Bethesda system category includes suspicious for papillary thyroid carcinoma (SPTC) which is the most common subtype (more than 90%) and less frequently suspicious for non-papillary carcinoma which consists of suspicious for medullary thyroid carcinoma, suspicious for malignant lymphoma, suspicious for poorly differentiated carcinoma and suspicious for malignitet ikke på annen måte spesifisert.

Mistenkelig for papillært skjoldbruskkjertelkarsinom diagnostiseres på grunn av ujevn kjernefysiske forandringer (umerkelige follikulære celler som er blandet med celler som viser kjernefys Uregelmessig kjernefysisk membran og intranukleære pseudoinklusjoner og fraværende papillær arkitektur og psammoma), spredt cellulært prøve eller cystisk degenerasjon (bakgrunn av bakgrunn av makrofager, kjernefysiske bodier og pallor, og pallor og pallystoffer.

Mistenkelig for papillært skjoldbruskkjertelkarsinom er diagnostisert i 2,4-8% av resultatene av fine nålaspirasjon, og 60-80% av dem er bekreftet i resekterte prøver for å være papillær skjoldbruskkjertel og resten av tilfellene viste godhet som kronisk lymfocytisk tyroiditis (hashhimoTo-hy-tyroiditis. Hashimoto skjoldbruskkjertel er en av de vanligste faktorene i falsk positiv papillær skjoldbruskkjertelkarsinomdiagnose på grunn av den sterke overlappingen av morfologiske trekk mellom dem.

Mistenkelig for papillær diagnose av skjoldbruskkjertelkarsinom er forvirrende for kirurger og pasienter og gjør den optimale kirurgiske beslutningen vanskelig ettersom utbredelsen av malignitet i denne diagnostiske kategorien er høy. Noen kirurger fortsetter for total skjoldbruskkjertelektomi, og dette gjør at omtrent 25% av pasientene (falske positive tilfeller) kan lide av overvåking og i nød for hormonerstatningsterapi for livet. Mange forsøk ble gjort for å øke nøyaktigheten av deteksjon av malignitet i denne kategorien og redusere muligheten for overskuft. Noen forfattere anvendte detaljerte ultrasonografiske kriterier for tilfeller diagnostisert cytologisk som mistenkelig for papillær skjoldbruskkjertelkarsinom og rapporterte økning av nøyaktighet fra 86% til 94% mens andre utførte intraoperative frosne seksjoner og tilleggstester som molekylære markører.

Cytomorfometrisk analyse har blitt brukt som et klinisk diagnostisk verktøy og diskutert i litteraturen i over 30 år. Det har blitt brukt i mange organer som nasopharynx, hud, urinblære, tykktarm, bryst og skjoldbruskkjertel. Morfometri er datastyrt prosedyre utført gjennom den kvantitative analysen av geometriske trekk ved strukturer med enhver dimensjon. Den nukleære morfometrien til ondartede kjerner inkludert størrelse, form og kromatinmønster, er forskjellig fra de av ikke -maligne cellekjerner, som gjør at nukleær morfometri kan skille mellom godartede og ondartede tilfeller. Ved hjelp av nukleær morfometri kan vi kvantifisere et antall parametere som de som er relatert til kjernefysisk størrelse og form.

Morfometri kan hjelpe som et supplement til morfologiske trekk i skjoldbruskkjertelbiler når de brukes riktig med passende avskjæringer. Til nå har flertallet av bildeanalysestudier blitt utført på histopatologiske seksjoner og bare få studier utført på cytologiske utstryk. Det har blitt antydet at kjernefysiske morfometriske parametere som kjernefysisk område og omkrets- og formfaktorer kan tillate differensiering mellom skjoldbruskkjertel -lesjoner. Å bruke morfometri på cytologi ville være nyttig for automatisert morfometrisk screening samt nøyaktig diagnose av skjoldbruskkjertelsvulster.

Den datastyrte morfometriske studien av histologiske lysbilder av skjoldbruskkjertelen identifiserte effektive morfometriske parametere som skiller forskjellene mellom godartede og ondartede epitelceller og de mest pålitelige parametrene er areal, omkrets, lengde, bredde, graden av rundhet og uregelmessighet av kjernemembranene.

En studie avdekket at den cytomorfometriske bildeanalysen med cytomorfologi har potensialet for å skille ikke bare den godartede, follikulære neoplasma/mistenkelig for en follikulær neoplasma, ondartet skjoldbrusk -lesjoner av Bethesda, men også kan skille papillær kar som folleres follerende follerfollerende follulær follerende follerfollerende follulær -lesjoner som Bethesda, men også kan skille papillærfolulær -lesjoner som foller med follulær -lesjoner som Bethesda, men også kan skille papillær -koksa, foller med follulær -lesjoner av Bethesda, men også kan skille papillær -paplær -lesjoner av Bethesda. og follikulært karsinom.

Mange molekylbaserte analytiske studier har bevist at de fleste papillære skjoldbruskkjertelkarsinomer er forårsaket av to distinkte signalmekanismer for MAPK (mitogenaktivert proteinkinase) -vei, enten BRAF-lignende eller Ras-lignende.

Den vanligste genmutasjonen i papillær skjoldbruskkjertelkarsinom (60%) er en missense-mutasjon i BRAF onkogen, valin (V) å erstatte glutaminsyre (E) ved aminosyreposisjon 600, som til slutt driver mitogenaktivert proteinkinase-banesignalering.

En systematisk gjennomgang og metaanalyse viste at tilbakefallshastigheten i BRAFV600E-muterte papillære skjoldbruskkjertelkarsinomer (24,9%) var to ganger høy som vill type papillær skjoldbruskkjertelkarsinomer (12,6%). BRAFV600E -muterte PTC -er har større risiko for lymfeknute -metastase, ekstratyreoidal forlengelse og assosiert med avansert AJCC III/IV -trinn.

Tilgangen til molekylær testing har lagt til rette for bruk av terapeutiske midler rettet mot spesifikke mutasjoner som BRAFV600E.

BRAFV600E-mutasjonen er veldig vanlig i papillær skjoldbruskkjertelkarsinom (38-90% forekomst) og er sjelden til stede i godartede skjoldbrusk-lesjoner, så dens diagnostiske spesifisitet er høy. Det fører til unormal aktivering av den mitogenaktiverte proteinkinase-banen som spiller en viktig rolle i utviklingen av papillær skjoldbruskkjertelkarsinom. Det ble rapportert at fine nålaspirasjonscytologi kombinert med den preoperative BRAFV600E -mutasjonsdeteksjonen kan forbedre den diagnostiske ytelsen for skjoldbruskkjertelknuter sammenlignet med fin nålaspirasjonscytologi alene.

Følsomheten og spesifisiteten til BRAFV600E -mutasjonstesting alene for papillær skjoldbruskkjertelkarsinom var henholdsvis 76,71% og 100% og økte til henholdsvis 96,62% og 88,03% når det ble kombinert med cytologi. Så kombinasjonen mellom fin nålaspirasjonscytologi og BRAFV600E -mutasjonstester har redusert de falske negativene i papillær skjoldbruskkjertelkarsinomdiagnose.

Målet med studien:

• For å evaluere risikoen for malignitet i TNS diagnostisert som SPTC av FNAC.
• For å karakterisere de forskjellige morfometriske parametrene i tilfeller diagnostisert cytologisk som SPTC.
• For å evaluere det immunocytokjemiske uttrykket av BRAFV600E i tilfeller diagnostisert cytologisk som SPTC.
• For å evaluere bruken av cytomorfometrisk analyse og BRAFV600E immunfarging alene eller i kombinasjon for å oppgradere diagnostisk nøyaktighet av SPTC-tilfeller.

Materiale og metoder:

En retrospektiv beskrivende studie vil bli utført på FNA-utstryk av skjoldbruskkjertelknuter mottatt i Institutt for patologi ved Assiut University Hospital over en seksårsperiode (2018-2025). Studien vil gjennomgå Papanicolaou (PAP) og hematoksylin og eosin (H&E) farget utstryk fra 45 pasienter med skjoldbruskkjertelknuter diagnostisert som mistenkelig for papillær skjoldbruskkjertelkarsinom (Bethesda V), kombinert med de histopatologiske dataene til deres resekterte thyroid -prøver.

Inkluderingskriterier:

Bare Papanicolaou (PAP) og Hematoxylin & Eosin (H&E) farget FNAC-utstryk med godt bevart kjernefysisk morfologi diagnostisert som mistenkelig for papillær skjoldbruskkjertelkarsinom vil bli inkludert i studien.

Eksklusjonskriterier:

• FNAC -utstryk mangler histopatologisk bekreftelse.
• Smør med omfattende kjernefysisk overlapping og dårlig morfologi.
• Smør tilslørt av betennelse, blod eller mucoidmateriale.
• Smør som viser cellulære degenerative forandringer eller tørkende gjenstander.
• Enhver pasient med manglende data. Alle kliniske, radiologiske og patologiske data vil bli samlet inn fra medisinske poster.

Personopplysninger inkludert alder og kjønn, kliniske data som antall skjoldbruskkjertelknuter og deres størrelse og tilstedeværelse eller fravær av utvidelse av livmorhalsen og trykksymptomer og radiologiske data som skjoldbruskkjertelrapportering og datasystem (Ti-Rads) som inkluderer sammensetning, echogenicity, form, margin og punkterte ekkogen i fokus i kokogen.

Morfometrisk studie:

For hvert tilfelle vil 50 kjerner fra follikulære celler i den mistenkelige cellulære gruppen, med godt bevart morfologi, bli valgt. Kjerner som vil utvise overlapping, vil bli tilslørt av betennelse, blod eller mucin, eller vil vise degenerative endringer vil bli ekskludert. Det vil bli gitt til isolerte kjerner eller de som bare berører hverandre uten overlapping med ren bakgrunn. Hver valgte kjerne fokusert på å bruke et objektiv objektiv på 1000x olje nedsenking vil bli avbildet ved hjelp av et digitalt kamera og vil bli analysert med programvare for bildeanalyse. Programvaren vil tilordne et spesifikt nummer til hver kjerne i bildet og kvantifisere morfometriske parametere.

Immunocytokjemisk studie:

BRAFV600E Immunocytochemistry vil bli brukt på utstrykningene etter å ha destainet dem.

Smører vil bli farget med BRAFV600E -antistoffer med immunoperoksidasefarging som en visualiseringsmetode.

Antistofffortynning og inkubasjonstid vil bli utført i henhold til produsentens instruksjoner.

Korrelasjon mellom resultatene av cytomorfometriske studier, resultater av BRAFV600E -mutasjonstester og resultatene av histopatologiske lysbilder vil bli gjort.