Roll av cytomorfometri och BRAFV600E immunocytokemi med en cytologisk diagnos "Misstänksam för papillär sköldkörtelcancer"

Sköldkörtelnodlar är vanligt kliniskt fynd i rutinmässig daglig medicinsk och kirurgisk praxis. De upptäcks genom ultrasonografi hos cirka 70% av kliniskt friska individer. Sköldkörtelnodlar är fyra gånger vanligare hos kvinnor och upp till 90% av fallen orsakas av godartade tillstånd.

Det huvudsakliga målet för klinisk hantering av sköldkörtelnodlar är uteslutning av malignitet (4-6,5% av alla sköldkörtelnodlar), bedömning av trycksymtom och utvärdering av dysfunktion i sköldkörteln.

Många riskfaktorer identifierades relaterade till utveckling av sköldkörtelnoduler inklusive avancerad ålder, kön, ökad eller minskad jod, familjehistoria med cancer eller polypos och historia av huvud- och nackstrålning. De vanligaste sköldkörtelnodlarna är kolloidknölar, Hashimotos sköldkörtel, subakut sköldkörtel, cyster, follikulärt adenom och sköldkörtelcancer.

När det gäller maligna tumörer i sköldkörteln ökade förekomsten av sköldkörtelcancer under de senaste decennierna i USA och internationellt. Det är den 7: e vanligaste cancer i den allmänna befolkningen och den femte vanligaste hos kvinnor. Förekomsten av sköldkörtelcancer är cirka 3 gånger högre hos kvinnor än män och det ökar från tonåren till medelåldern med toppen cirka 55 år hos kvinnor och 65 år hos män och sedan minskar med äldre ålder.

Ökningen av antalet cancerfall orsakas av ökad diagnos till följd av den utbredda användningen av diagnostiska verktyg inklusive ultrasonografiavbildning, fin nålaspiration cytologi, datortomografi, magnetisk resonansavbildning och fluorodeoxyglukospositronemissionstomografi. Förutom ökningen av exponeringen för de etiologiska faktorerna som joniserande strålning under barndom och fetma.

Papillär sköldkörtelcancer (PTC) är den vanligaste histologiska typen av sköldkörtelcancer som representerar 90% av fallen. De återstående 10% inkluderar follikulär sköldkörtelkarcinom 4%, Hurthle Cell -karcinom 2%, medullär sköldkörtelkarcinom 2% och anaplastisk sköldkörtelkarcinom 1%.

Prognosen för sköldkörtelcancer är utmärkt eftersom de flesta fall är papillära sköldkörtelkarcinom lokaliserade till sköldkörteln under diagnosen. Den 5-åriga överlevnadsgraden är totalt 98,6%, 99,9% för lokaliserade, 98,3% för regionala och 54,9% för avlägsen metastas.

Fin-Needle Aspiration Cytology (FNAC) i sköldkörteln är ett guldstandard exakt diagnostiskt test som rutinmässigt används i den första utvärderingen av sköldkörtelnodlar eftersom det är enkelt, säkert, kostnadseffektivt och har gynnsam noggrannhet. Känsligheten och specificiteten för sköldkörtel-FNAC är 68-98% respektive 56-100% med misslyckanden beror på tekniken och erfarenheten av prestanda.

Bethesda -systemet för att rapportera sköldkörtelcytopatologi (TBSRTC) publicerades först 2010 och uppdaterades många gånger för att standardisera rapporteringsterminologi och för bättre kommunikation mellan cytopatologer och kliniker.

2023 Bethesda-systemet för rapportering av cytopatologi för sköldkörteln är ett enkelt kategoribaserat rapporteringssystem för fin nålaspiration cytologi (FNAC) av sköldkörteln och blev en av de mest använda rapporterings- och diagnostiska metoderna och inkluderar 6 kategorier.

Category (I) non diagnostic with 13%(5-20) risk of malignancy, Category (II) benign with 4%(2-7) risk of malignancy, Category (III) atypia of undetermined significance with 22%(13-30) risk of malignancy, Category (IV) follicular neoplasm with 30%(23-34) risk of malignancy, Category (V) suspicious for malignancy with 74%(67-83) Risk för malignitet och kategori (VI) malignt med 97%(97-100) risk för malignitet.

Den misstänkta för malignitetskategori används när cytomorfologiska egenskaper är oöverträffande och höjer en stark misstanke om malignitet men är kvantitativt eller kvalitativt otillräckliga för en avgörande diagnos och den vanliga hanteringen i detta fall är molekyltest, lobektomi eller nära total tyroidektomi.

Den misstänkta för malignitet (SFM) enligt Bethesda-systemkategorin inkluderar misstänksam för papillär sköldkörtelcancer (SPTC) som är den vanligaste subtypen (mer än 90%) och mindre misstänkta för mal, misstänkta för maliska, misstänkta för misstänkta och misstänkta cifferiska för många misstänkta karcinom som består av misstänkta för medicinska tyska, för malignitet som inte på annat sätt anges.

Suspicious for papillary thyroid carcinoma is diagnosed due to patchy nuclear changes (unremarkable follicular cells admixed with cells showing nuclear enlargement, pallor, grooves and fine chromatin, scant or absent intranuclear pseudoinclusions and absent papillary architecture) , incomplete nuclear changes (generalized nuclear enlargement, pallor and grooves, scant or absent irregular nuclear membrane och intranukleära pseudoinclusions och frånvarande papillära arkitektur och pammomkroppar), gles cellulärt prov eller cystisk degeneration (bakgrund av cystiska avfall och makrofager, kärnkraftsförstoring och blek, atypiska histocytoidceller med cytoplasmiska vakuoler och frånvaro papillärkararkitektur.

Misstänksam för papillär sköldkörtelkarcinom diagnostiseras i 2,4-8% av fina nålens aspiration och 60-80% av dem bekräftas i resekterade prover (hashimoto-karcinom och resten av fallen visade godartade tillstånd som kroniska lymfocytisk tyroidit (hashimoto sköldkörtel) och nodulära. Hashimoto sköldkörtel är en av de vanligaste faktorerna i falska positiva papillära sköldkörtelkarcinomdiagnos på grund av den starka överlappningen av morfologiska drag mellan dem.

Misstänksam för papillär sköldkörtelcancerdiagnos är förvirrande för kirurger och patienter och gör det optimala kirurgiska beslutet svårt eftersom förekomsten av malignitet i denna diagnostiska kategori är hög. Vissa kirurger fortsätter för total sköldkörtelektomi och detta gör att cirka 25% av patienterna (falska positiva fall) kan drabbas av överskörning och i behov av hormonersättningsterapi för livet. Många försök gjordes för att öka noggrannheten för upptäckt av malignitet i denna kategori och minska möjligheten till överkyrkeri. Vissa författare använde detaljerade ultrasonografiska kriterier för fall diagnostiserade cytologiskt som misstänkta för papillär sköldkörtelcancer och rapporterade ökning av noggrannhet från 86% till 94% medan andra utförde intraoperativ fryst sektion och tillhörande tester som molekylära markörer.

Cytomorfometrisk analys har använts som ett kliniskt diagnostiskt verktyg och diskuterats i litteraturen i över 30 år. Det har använts i många organ som nasopharynx, hud, urinblåsan, kolon, bröst och sköldkörtel. Morfometri är datoriserad procedur utförd genom den kvantitativa analysen av geometriska egenskaper hos strukturer med någon dimension. Kärnkraftsmorfometri för maligna kärnor inklusive storlek, form och kromatinmönster skiljer sig från de hos icke -maligna cellkärnor, vilket gör att kärnmorfometri kan skilja mellan godartade och maligna fall. Med hjälp av kärnmorfometri kan vi kvantifiera ett antal parametrar såsom de som är relaterade till kärnkraftsstorlek och form.

Morfometri kan hjälpa till som ett komplement till morfologiska egenskaper i sköldkörtelskador vid korrekt applicerad med lämpliga avgränsningar. Hittills har majoriteten av bildanalysstudier utförts på histopatologiska sektioner och endast få studier utförda på cytologiska utstryk. Det har föreslagits att kärnkraftsmorfometriska parametrar såsom kärnkraftsområde och omkrets- och formfaktorer kan möjliggöra differentiering mellan sköldkörtelskador. Att tillämpa morfometri på cytologi skulle vara användbart för automatiserad morfometrisk screening samt exakt diagnos av sköldkörteltumörer.

Den datoriserade morfometriska studien av sköldkörtelhistologiska objektglas identifierade effektiva morfometriska parametrar som skiljer skillnaderna mellan godartade och maligna epitelceller och de mest pålitliga parametrarna är område, omkrets, längd, bredd, graden av rundhet och oegentlighet i kärnmembranen.

En studie avslöjade att den cytomorfometriska bildanalysen med cytomorfologi har potentialen att skilja inte bara det godartade, follikulära neoplasma/misstänksamma för en follikulär neoplasma, malig sköldkörtelskyldar av Bethesda -system utan också kan skilja knölar med follikulära mönster som follikulära varant av papillargolik, och follikulära follikulära karcinbilar.

Många molekylbaserade analytiska studier har visat att de flesta papillära sköldkörtelkarcinom orsakas av två distinkta signalmekanismer för MAPK (mitogenaktiverad proteinkinas) väg, antingen BRAF-liknande eller RAS-liknande.

Den vanligaste genmutationen i papillär sköldkörtelkarcinom (60%) är en missense-mutation i BRAF-onkogen, valin (V) som ersätter glutaminsyra (E) vid aminosyras position 600, som slutligen driver mitogenaktiverat proteinkinasvägssignal.

En systematisk granskning och metaanalys visade att återfallshastigheten i BRAFV600E-muterade papillära sköldkörtelkarcinom (24,9%) var två gånger hög som papillär av sköldkörtel av vildtyp (12,6%). BRAFV600E -muterade PTC: er har mer risk för lymfkörtelmetastas, extratyreoidalförlängning och associerad med avancerat AJCC III/IV -steg.

Tillgången till molekyltestning har underlättat användningen av terapeutiska medel som riktar sig till specifika mutationer som BRAFV600E.

BRAFV600E-mutationen är mycket vanlig vid papillär sköldkörtelkarcinom (38-90% förekomst) och sällan närvarande i godartade sköldkörtelskador så att dess diagnostiska specificitet är hög. Det leder till onormal aktivering av den mitogenaktiverade proteinkinasvägen som spelar en viktig roll i utvecklingen av papillär sköldkörtelcancer. Det rapporterades att cytologi för fin nålaspiration i kombination med den preoperativa BRAFV600E -mutationsdetekteringen kan förbättra diagnostisk prestanda för sköldkörtelnodlar jämfört med fin nålaspiration cytologi ensam.

Känsligheten och specificiteten för BRAFV600E -mutationstesten enbart för papillär sköldkörtelcancer var 76,71% respektive 100% och ökade till 96,62% respektive 88,03% när de kombinerades med cytologi. Så kombinationen mellan fin nålaspiration cytologi och BRAFV600E -mutationstester har minskat de falska negativerna i papillär sköldkörtelkarcinomdiagnos.

Syftet med studien:

• För att utvärdera risken för malignitet i TNS som diagnostiserats som SPTC av FNAC.
• För att karakterisera de olika morfometriska parametrarna i fall diagnostiserade cytologiskt som SPTC.
• För att utvärdera det immunocytokemiska uttrycket av BRAFV600E i fall diagnostiserade cytologiskt som SPTC.
• För att utvärdera användbarheten av cytomorfometrisk analys och BRAFV600E immunfärgning ensam eller i kombination vid uppgradering av diagnostisk noggrannhet för SPTC-fall.

Material och metoder:

En retrospektiv beskrivande studie kommer att utföras på FNA-uteslutning av sköldkörtelnodlar som erhållits vid institutionen för patologi vid Assiut University Hospital under en sexårsperiod (2018-2025). Studien kommer att granska Papanicolaou (PAP) och Hematoxylin & Eosin (H&E) färgade utstryk från 45 patienter med sköldkörtelnodlar som diagnostiserats som misstänkta för papillär sköldkörtelcarcinom (Bethesda V), kombinerat med histopatiska data från deras resekterade sköldkörtelprov.

Inkluderingskriterier:

Endast Papanicolaou (PAP) och Hematoxylin & Eosin (H&E) färgade FNAC-utstryk med välbevarad kärnmorfologi som diagnostiserats som misstänksam för papillär sköldkörtelcancer kommer att inkluderas i studien.

Uteslutningskriterier:

• FNAC -utstryk som saknar histopatologisk bekräftelse.
• Utstryk med omfattande kärnkraftsöverlappning och dålig morfologi.
• Smetar dold av inflammation, blod eller mucoidmaterial.
• Utstryk som uppvisar cellulära degenerativa förändringar eller torkande artefakter.
• Alla patient med saknade data. Alla kliniska, radiologiska och patologiska data kommer att samlas in från medicinska journaler.

Personuppgifter inklusive ålder och kön, kliniska data som antal sköldkörtelnodlar och deras storlek och närvaro eller frånvaro av livmoderhalslymfkörtelförstoring och trycksymtom och radiologiska data som sköldkörtelavbildningsrapportering och datasystem (TI-RADS) som inkluderar sammansättning, ekogenicitet, form, margin och puncTAT-ekogensystem kommer att vara kollektiva.

Morfometrisk studie:

För varje fall kommer 50 kärnor från follikulära celler i den misstänkta cellulära gruppen, med välbevarad morfologi, att väljas. Kärnor som kommer att uppvisa överlappning, kommer att döljas av inflammation, blod eller mucin, eller kommer att visa degenerativa förändringar kommer att uteslutas. Företräde kommer att ges till isolerade kärnor eller de som bara berör varandra utan överlappning med en ren bakgrund. Varje vald kärna som är inriktad på att använda en objektivlins på 1000x olja nedsänkning kommer att avbildas med en digital kamera och kommer att analyseras med bildanalysprogramvara. Programvaran tilldelar ett specifikt nummer till varje kärna i bilden och kvantifierar dess morfometriska parametrar.

Immunocytokemisk studie:

BRAFV600E Immunocytochemistry kommer att appliceras på utstrykningen efter att ha degat dem.

Utstryk kommer att färgas med BRAFV600E -antikroppar med immunoperoxidasfärgning som en visualiseringsmetod.

Antikroppsutspädning och inkubationstid kommer att genomföras enligt tillverkarens instruktioner.

Korrelation mellan resultat från cytomorfometriska studier, resultat från BRAFV600E -mutationstester och resultaten från histopatologiska bilder kommer att göras.