Papel da citomorfometria e da imunocitoquímica BRAFV600E com um diagnóstico citológico "suspeito do carcinoma papilar da tireóide"

Os nódulos da tireóide são achados clínicos comuns na prática médica e cirúrgica diária de rotina. Eles são descobertos por ultrassonografia em cerca de 70% dos indivíduos clinicamente saudáveis. Os nódulos da tireóide são quatro vezes mais prevalentes em mulheres e até 90% dos casos são causados ​​por condições benignas.

O principal alvo do manejo clínico dos nódulos da tireóide é a exclusão de malignidade (4-6,5% de todos os nódulos da tireóide), avaliação dos sintomas de pressão e avaliação da disfunção da tireóide.

Muitos fatores de risco foram identificados relacionados ao desenvolvimento de nódulos da tireóide, incluindo idade avançada, sexo, aumento ou diminuição do iodo, histórico familiar de câncer ou polipose e histórico de radiação de cabeça e pescoço. Os nódulos da tireóide mais comuns são nódulos colóides, tireoidite de Hashimoto, tireoidite subaguda, cistos, adenoma folicular e câncer de tireóide.

Em relação aos tumores malignos da tireóide, a incidência de câncer de tireóide aumentou nas últimas décadas nos Estados Unidos e internacionalmente. É o 7º câncer mais comum na população em geral e o 5º mais comum em mulheres. A incidência de câncer de tireóide é cerca de três vezes maior em mulheres que os homens e aumenta da adolescência para a meia -idade, com o pico em torno de 55 anos em mulheres e 65 anos em homens diminuindo com a idade avançada.

O aumento do número de casos de câncer é causado pelo aumento do diagnóstico resultante do uso generalizado de ferramentas de diagnóstico, incluindo imagens por ultrassonografia, citologia de aspiração por agulha fina, tomografia computadorizada, ressonância magnética e tomografia por emissão de pósitrons de fluorodeoxiglucose. Além do aumento da exposição aos fatores etiológicos como radiação ionizante durante a infância e obesidade.

O carcinoma papilar da tireóide (PTC) é o tipo histológico mais comum de câncer de tireóide que representa 90% dos casos. Os 10% restantes incluem carcinoma folicular da tireóide 4%, carcinoma de células Hurthle 2%, carcinoma medular da tireóide 2% e carcinoma anaplásico da tireóide 1%.

O prognóstico do câncer de tireóide é excelente porque a maioria dos casos são carcinomas papilares da tireóide localizados na glândula tireoidiana durante o diagnóstico. A taxa de sobrevida em 5 anos é de 98,6% no total, 99,9% para localização, 98,3% para regional e 54,9% para metástases distantes.

A citologia de aspiração de agulha fina (FNAC) da glândula tireoidiana é um teste de diagnóstico preciso padrão de ouro rotineiramente usado na avaliação inicial dos nódulos da tireóide, pois é simples, segura, econômica e tem precisão favorável. A sensibilidade e a especificidade do FNAC da tireóide são 68-98% e 56-100%, respectivamente, com as taxas de falha são devido à técnica e experiência do desempenho.

O sistema Bethesda para relatar a citopatologia da tireóide (TBSRTC) foi publicado pela primeira vez em 2010 e atualizado muitas vezes para padronizar a terminologia de relatórios e para uma melhor comunicação entre citopatologistas e médicos.

O sistema Bethesda 2023 para relatar citopatologia da tireóide é um sistema de relatórios simples baseado em categoria para citologia de aspiração por agulha fina (FNAC) da tireóide e se tornou um dos métodos de relatórios e diagnóstico mais utilizados e inclui 6 categorias.

Category (I) non diagnostic with 13%(5-20) risk of malignancy, Category (II) benign with 4%(2-7) risk of malignancy, Category (III) atypia of undetermined significance with 22%(13-30) risk of malignancy, Category (IV) follicular neoplasm with 30%(23-34) risk of malignancy, Category (V) suspicious for malignancy with 74%(67-83) risco de malignidade e categoria (VI) maligna com 97%(97-100) de risco de malignidade.

O suspeito para a categoria de malignidade é usado quando as características citomorfológicas são inconclusivas e aumentam uma forte suspeita de malignidade, mas são quantitativas ou qualitativamente insuficientes para um diagnóstico conclusivo e a gestão usual nesse caso é um teste molecular, lobectomia ou tireoidectomia total.

The suspicious for malignancy (SFM) according to Bethesda system category includes suspicious for papillary thyroid carcinoma (SPTC) which is the most common subtype (more than 90%) and less frequently suspicious for non-papillary carcinoma which consists of suspicious for medullary thyroid carcinoma, suspicious for malignant lymphoma, suspicious for poorly differentiated carcinoma and suspicious para malignidade não especificada de outra forma.

Suspicious for papillary thyroid carcinoma is diagnosed due to patchy nuclear changes (unremarkable follicular cells admixed with cells showing nuclear enlargement, pallor, grooves and fine chromatin, scant or absent intranuclear pseudoinclusions and absent papillary architecture) , incomplete nuclear changes (generalized nuclear enlargement, pallor and grooves, scant or absent irregular nuclear Pseudoinclusões de membrana e intranucleares e arquitetura papilar ausente e corpos de psammoma), amostras escassas celulares ou degeneração cística (fundo de detritos císticos e macrófagos, aumento nuclear e alidez e palidez atipmica e pálido por citoplasmática.

Suspeito para o carcinoma papilar da tireóide é diagnosticado em 2,4-8% dos resultados da aspiração por agulha fina e 60-80% deles são confirmados em amostras ressecadas como carcinoma papilar da tireóide e o restante dos casos mostrou condições benignas de linfocítico crônico (hi-limotão-linitítrico) e hi-linficotite (hasimostofififâssite) e hi-linficotite (hasimotificotite) e hi-linficotite (hasimostofififânite. A tireoidite de Hashimoto é um dos fatores mais comuns no diagnóstico de carcinoma papilar da tireóide falso positivo devido à forte sobreposição de características morfológicas entre eles.

Suspeito para o diagnóstico de carcinoma da tireóide papilar está confuso para cirurgiões e pacientes e dificulta a decisão cirúrgica ideal, pois a prevalência de malignidade nessa categoria de diagnóstico é alta. Alguns cirurgiões prosseguem para a tireoidectomia total e isso faz com que cerca de 25% dos pacientes (casos falsos positivos) podem sofrer de cirurgia e necessidade de terapia de reposição hormonal para a vida. Muitos ensaios foram feitos para aumentar a precisão da detecção de malignidade nessa categoria e diminuir a possibilidade de cirurgia. Alguns autores aplicaram critérios ultrassonográficos detalhados para casos diagnosticados citologicamente como suspeitos para o carcinoma papilar da tireóide e relataram aumento de precisão de 86% para 94%, enquanto outros realizaram seção congelada intraoperatória e testes auxiliares como marcadores moleculares.

A análise citomorfométrica tem sido usada como uma ferramenta de diagnóstico clínica e discutida na literatura por mais de 30 anos. Foi usado em muitos órgãos como nasofaringe, pele, bexiga urinária, cólon, mama e tireóide. A morfometria é o procedimento computadorizado realizado através da análise quantitativa de características geométricas de estruturas com qualquer dimensão. A morfometria nuclear dos núcleos malignos, incluindo o tamanho, a forma e o padrão de cromatina, são diferentes dos de núcleos celulares não malignos, que permitem que a morfometria nuclear distingua entre casos benignos e malignos. Usando morfometria nuclear, podemos quantificar vários parâmetros, como os relacionados ao tamanho e forma nucleares.

A morfometria pode ajudar como um complemento às características morfológicas nas lesões da tireóide quando aplicado corretamente com os pontos de corte apropriados. Até agora, a maioria dos estudos de análise de imagem foi realizada em seções histopatológicas e apenas poucos estudos realizados em esfregaços citológicos. Foi sugerido que parâmetros morfométricos nucleares, como área nuclear e perímetro e fatores de forma, podem permitir a diferenciação entre as lesões da tireóide. A aplicação da morfometria à citologia seria útil para fins de triagem morfométrica automatizada, bem como diagnóstico preciso de tumores da tireóide.

O estudo morfométrico computadorizado de lâminas histológicas da tireóide identificou parâmetros morfométricos eficientes que distinguem as diferenças entre células epiteliais benignas e malignas e os parâmetros mais confiáveis ​​são a área, perímetro, comprimento, largura, grau de redondeza e irregularidade das membranas nucleares.

Um estudo revelou que a análise de imagem citomorfométrica com citomorfologia tem o potencial de distinguir não apenas o neoplasma folicular benigno/suspeito para um neoplasia folicular, lesões tireóides malignas.

Muitos estudos analíticos de base molecular provaram que a maioria dos carcinomas papilares da tireóide é causada por dois mecanismos de sinalização distintos da via MAPK (proteína quinase ativada por mitogênio), tipo BRAF ou tipo RAS.

A mutação gênica mais comum no carcinoma papilar da tireóide (60%) é uma mutação missense no oncogene BRAF, valina (V) que substitui o ácido glutâmico (E) na posição 600 de aminoácidos, que finalmente impulsiona a sinalização da via proteína quinase ativada por mitogênio.

Uma revisão sistemática e meta-análise mostraram que a taxa de recorrência nos carcinomas da tireóide papilar mutada BRAFV600E (24,9%) era duas vezes de altura como carcinomas de tireoidiais papilares do tipo selvagem (12,6%). Os PTCs mutados com BRAFV600E têm mais risco de metástase linfonodal, extensão extratireoidiana e associada ao estágio avançado de AJCC III/IV.

O acesso a testes moleculares facilitou o uso de agentes terapêuticos direcionados a mutações específicas como BRAFV600E.

A mutação BRAFV600E é muito comum no carcinoma papilar da tireóide (incidência de 38-90%) e raramente presente nas lesões benignas da tireóide, de modo que sua especificidade diagnóstica é alta. Isso leva à ativação anormal da via da proteína quinase ativada por mitogênio, que desempenha um papel importante no desenvolvimento do carcinoma papilar da tireóide. Foi relatado que a citologia de aspiração por agulha fina combinada com a detecção de mutação BRAFV600E pré -operatória pode melhorar o desempenho diagnóstico dos nódulos da tireóide em comparação com a citologia de aspiração por agulha fina sozinha.

A sensibilidade e a especificidade dos testes de mutação BRAFV600E sozinhos para carcinoma papilar da tireóide foram 76,71% e 100%, respectivamente, e aumentavam para 96,62% e 88,03%, respectivamente, quando combinados com a citologia. Portanto, a combinação entre a citologia de aspiração por agulha fina e os testes de mutação BRAFV600E diminuiu os falsos negativos no diagnóstico de carcinoma da tireóide papilar.

Objetivo do estudo:

• Avaliar o risco de malignidade no TNS diagnosticado como SPTC pelo FNAC.
• Caracterizar os diferentes parâmetros morfométricos em casos diagnosticados citologicamente como SPTC.
• Avaliar a expressão imunocitoquímica do BRAFV600E em casos diagnosticados citologicamente como SPTC.
• Avaliar a utilidade da análise citomorfométrica e da mancha imune BRAFV600E sozinha ou em combinação na atualização da precisão diagnóstica dos casos de SPTC.

Material e métodos:

Um estudo descritivo retrospectivo será realizado em manchas de FNA de nódulos da tireóide recebidos no Departamento de Patologia do Hospital Universitário Assiut durante um período de seis anos (2018-2025). O estudo revisará papanicolaou (PAP) e hematoxilina e eosina (H&E) manchas manchadas de 45 pacientes com nódulos da tireóide diagnosticados como suspeitos de carcinoma papilar da tireóide (Bethesda V), combinados com os dados histopatológicos de seus amosacos de tireoides ressecados.

Critérios de inclusão:

Apenas papanicolaou (PAP) e hematoxilina e eosina (H&E) manchas de FNAC coradas com morfologia nuclear bem preservada diagnosticada como suspeita de carcinoma papilar da tireóide será incluída no estudo.

Critérios de exclusão:

• FNAC mancha sem confirmação histopatológica.
• Manchas com extensa sobreposição nuclear e baixa morfologia.
• Manchas obscurecidas pela inflamação, sangue ou material mucóide.
• Manchas exibindo alterações degenerativas celulares ou artefatos de secagem.
• Qualquer paciente com dados ausentes. Todos os dados clínicos, radiológicos e patológicos serão coletados de registros médicos.

Dados pessoais, incluindo idade e sexo, dados clínicos como número de nódulos da tireóide e seu tamanho e a presença ou ausência de aumento dos sintomas de aumento e pressão dos linfonodos cervicais e dados radiológicos como relatório de imagem da tireóide e sistema de dados (Ti-Rads), que inclui a composição, a composição, a forma, a forma, a margem e o pontuado de Ichogenics Foci), que incluem a composição, a formação, a forma, a forma, a margem e a pontuação de Ti-Rads Foci.

Estudo morfométrico:

Para cada caso, 50 núcleos de células foliculares dentro do grupo celular suspeito, com morfologia bem preservada, serão selecionados. Os núcleos que exibirão sobrepostos serão obscurecidos por inflamação, sangue ou mucina ou exibirão alterações degenerativas serão excluídas. A preferência será dada a núcleos isolados ou aqueles que apenas se tocam sem se sobrepor com um fundo limpo. Cada núcleo selecionado focado no uso de uma lente objetivo de imersão em óleo de 1000X será fotografado usando uma câmera digital e será analisado com o software de análise de imagem. O software atribuirá um número específico a cada núcleo na imagem e quantificará seus parâmetros morfométricos.

Estudo imunocitoquímico:

A imunocitoquímica BRAFV600E será aplicada nos manchas depois de destiná -los.

Os manchas serão corados com anticorpos BRAFV600E com coloração com imunoperoxidase como método de visualização.

A diluição de anticorpos e o tempo de incubação serão conduzidos de acordo com as instruções do fabricante.

Correlação entre os resultados dos estudos citomorfométricos, os resultados dos testes de mutação BRAFV600E e os resultados das lâminas histopatológicas serão feitas.