Rol van cytomorfometrie en BRAFV600E -immunocytochemie met een cytologische diagnose "verdacht voor papillair schildkliercarcinoom"

Schildklierknobbeltjes zijn veel voorkomende klinische bevinding in routinematige dagelijkse medische en chirurgische praktijk. Ze worden ontdekt door echografie bij ongeveer 70% van de klinisch gezonde personen. Schildklierknobbeltjes komen vier keer vaker voor bij vrouwen en tot 90% van de gevallen worden veroorzaakt door goedaardige omstandigheden.

Het belangrijkste doelwit van klinisch beheer van schildklierknobbeltjes is uitsluiting van maligniteit (4-6,5% van alle schildklierknobbeltjes), beoordeling van druksymptomen en evaluatie van schildklierdisfunctie.

Veel risicofactoren werden geïdentificeerd met betrekking tot de ontwikkeling van schildklierknobbeltjes, waaronder gevorderde leeftijd, geslacht, verhoogde of verminderde jodium, familiegeschiedenis van kanker of polypose en geschiedenis van hoofd- en nekstraling. De meest voorkomende schildklierknobbeltjes zijn colloïde knobbeltjes, hashimoto's thyroiditis, subacute thyroiditis, cysten, folliculair adenoom en schildklierkanker.

Wat betreft schildklier kwaadaardige tumoren, nam de incidentie van schildklierkanker de afgelopen decennia toe in de Verenigde Staten en internationaal. Het is de 7e meest voorkomende kanker in de algemene bevolking en de 5e meest voorkomende bij vrouwen. De incidentie van schildklierkanker is ongeveer 3 keer hoger bij vrouwen dan mannen en het neemt toe van de adolescentie tot middelbare leeftijd met de piek van ongeveer 55 jaar bij vrouwen en 65 jaar bij mannen die vervolgens afnemen met oudere leeftijd.

De toename van het aantal gevallen van kanker wordt veroorzaakt door verhoogde diagnose als gevolg van het wijdverbreide gebruik van diagnostische hulpmiddelen, waaronder ultrasonografie -beeldvorming, fijne naaldaspiratiecytologie, computertomografie, beeldvorming van magnetische resonantie en fluorodeoxyglucose positronemissietomografie. Naast de toename van de blootstelling aan de etiologische factoren als ioniserende straling tijdens de kindertijd en obesitas.

Papillair schildkliercarcinoom (PTC) is het meest voorkomende histologische type schildklierkanker dat 90% van de gevallen vertegenwoordigt. De resterende 10% omvat folliculair schildkliercarcinoom 4%, Hurthle -celcarcinoom 2%, medullaire schildkliercarcinoom 2% en anaplastisch schildkliercarcinoom 1%.

De prognose van schildklierkanker is uitstekend omdat de meeste gevallen tijdens de diagnose papillaire schildkliercarcinomen zijn gelokaliseerd op de schildklier. Het overlevingspercentage van 5 jaar is 98,6% in het algemeen, 99,9% voor gelokaliseerde, 98,3% voor regionale en 54,9% voor metastase op afstand.

Fine-Needle Aspiration Cytology (FNAC) van de schildklier is een gouden standaard nauwkeurige diagnostische test die routinematig wordt gebruikt bij de initiële evaluatie van schildklierknobbeltjes, omdat het eenvoudig, veilig, kosteneffectief is en een gunstige nauwkeurigheid heeft. De gevoeligheid en specificiteit van schildklier FNAC zijn respectievelijk 68-98% en 56-100% met faalpercentages te wijten aan de techniek en ervaring van de prestaties.

Het Bethesda -systeem voor het rapporteren van schildkliercytopathologie (TBSRTC) werd voor het eerst gepubliceerd in 2010 en vele malen bijgewerkt om de rapportageterminologie te standaardiseren en voor betere communicatie tussen cytopathologen en clinici.

Het 2023 Bethesda-systeem voor het melden van schildkliercytopathologie is een eenvoudig op categorie gebaseerd rapportagesysteem voor Fine Needle Aspiration Cytology (FNAC) van schildklier en werd een van de meest gebruikte rapportage- en diagnostische methoden en bevat 6 categorieën.

Category (I) non diagnostic with 13%(5-20) risk of malignancy, Category (II) benign with 4%(2-7) risk of malignancy, Category (III) atypia of undetermined significance with 22%(13-30) risk of malignancy, Category (IV) follicular neoplasm with 30%(23-34) risk of malignancy, Category (V) suspicious for malignancy with 74%(67-83) Risico op maligniteit en categorie (VI) kwaadaardig met 97%(97-100) risico op maligniteit.

De verdachte voor maligniteitscategorie wordt gebruikt wanneer cytomorfologische kenmerken niet doorslaggevend zijn en een sterk vermoeden van maligniteit verhogen, maar kwantitatief of kwalitatief onvoldoende zijn voor een overtuigende diagnose en het gebruikelijke beheer in dit geval is moleculaire testen, lobectomie of bijna totale thyroidectomie.

De verdachte voor maligniteit (SFM) volgens de Bethesda-systeemcategorie omvat verdacht voor papillair schildkliercarcinoom (SPTC), het meest voorkomende subtype (meer dan 90%) en minder vaak verdacht voor niet-pillair carcinoom voor niet-papicaledische lymfoom, verdachte voor slecht gedifferentieerd. maligniteit niet anders gespecificeerd.

Verdacht voor papillair schildkliercarcinoom wordt gediagnosticeerd vanwege fragmentarische nucleaire veranderingen (onopvallende folliculaire cellen die worden vermengd met cellen die nucleaire vergroting, bleekheid, grooves en fijne chromatine, Scant of afwezige intranucleaire pseudoinclusies en afwezige papillaire architectuur), onvoldoende nucleaire veranderingen, scant- of skroherende, scant- en geleiderveranderingen, scant of skroheren (algemene nucleaire veranderingen (algemene nucleaire veranderingen (algemene nucleaire veranderingen, scant- en griezelverandering, scant- en geleiderverandering, met cellen, met cellen, met cellen en afwezige papillaire architectuur), met cellen, laten zien, en een afwezige papillaire architectuur). absent irregular nuclear membrane and intranuclear pseudoinclusions and absent papillary architecture and psammoma bodies), sparsely cellular specimen or cystic degeneration (background of cystic debris and macrophages, nuclear enlargement and pallor, atypical histocytoid cells with cytoplasmic vacuoles and absent papillary architecture and psammoma bodies.

Verdacht voor papillair schildkliercarcinoom wordt gediagnosticeerd in 2,4-8% van de fijne naaldaspiratieresultaten en 60-80% van hen wordt bevestigd in geresecteerde monsters als papillair schildkliercarcinoma en de rest van de gevallen vertoonden goedaardige omstandigheden als chronische lymfocytische thyroiditis (hashimoto thyroiditis) en nodulaire hyperplasie. Hashimoto thyroiditis is een van de meest voorkomende factoren in vals positieve papillaire schildkliercarcinoomdiagnose vanwege de sterke overlap van morfologische kenmerken daartussen.

Verdacht voor papillaire schildkliercarcinoomdiagnose is verwarrend voor chirurgen en patiënten en maakt de optimale chirurgische beslissing moeilijk omdat de prevalentie van maligniteit in deze diagnostische categorie hoog is. Sommige chirurgen gaan door voor totale thyroidectomie en dit maakt ongeveer 25% van de patiënten (vals -positieve gevallen) kan lijden aan overchirurgie en nodig hebben voor hormoonvervangingstherapie voor het leven. Er werden veel proeven gedaan om de nauwkeurigheid van de detectie van maligniteit in deze categorie te vergroten en de mogelijkheid van overchirurgie te verminderen. Sommige auteurs hebben gedetailleerde ultrasonografische criteria toegepast voor gevallen die cytologisch werden gediagnosticeerd als achterdochtig voor papillair schildkliercarcinoom en rapporteerden een toename van de nauwkeurigheid van 86% tot 94%, terwijl anderen intraoperatieve bevroren sectie en ondersteunende tests als moleculaire markers uitvoerden.

Cytomorfometrische analyse wordt gebruikt als een klinisch diagnostisch hulpmiddel en al meer dan 30 jaar in de literatuur besproken. Het is gebruikt in veel organen zoals nasopharynx, huid, urineblaas, dikke darm, borst en schildklier. Morfometrie is geautomatiseerde procedure uitgevoerd door de kwantitatieve analyse van geometrische kenmerken van structuren met elke dimensie. De nucleaire morfometrie van kwaadaardige kernen inclusief de grootte, vorm en chromatinepatroon, verschillen van die van niet -maligne celkernen, die nucleaire morfometrie mogelijk maakt om onderscheid te maken tussen goedaardige en kwaadaardige gevallen. Met behulp van nucleaire morfometrie kunnen we een aantal parameters kwantificeren, zoals die gerelateerd aan nucleaire grootte en vorm.

Morfometrie kan helpen als een aanvulling op morfologische kenmerken in schildklierlaesies wanneer correct wordt toegepast met geschikte cutoffs. Tot nu toe is de meerderheid van de beeldanalysestudies uitgevoerd op histopathologische secties en slechts enkele studies uitgevoerd op cytologische uitstrijkjes. Er is gesuggereerd dat nucleaire morfometrische parameters zoals nucleair gebied en perimeter- en vormfactoren differentiatie tussen schildklierlaesies mogelijk kunnen maken. Het toepassen van morfometrie op cytologie zou nuttig zijn voor geautomatiseerde morfometrische screening en een nauwkeurige diagnose van schildkliertumoren.

De geautomatiseerde morfometrische studie van schildklierhistologische dia's identificeerde efficiënte morfometrische parameters die de verschillen onderscheiden tussen goedaardige en kwaadaardige epitheelcellen en de meest betrouwbare parameters zijn oppervlakte, perimeter, lengte, breedte, de mate van rondheid en onregelmatigheid van de nucleaire membranen.

Uit een onderzoek bleek dat de cytomorfometrische beeldanalyse met cytomorfologie het potentieel heeft om niet alleen het goedaardige, folliculaire neoplasma/verdacht te onderscheiden voor een folliculair neoplasma, kwaadaardig schildklierletsels van Bethesda -systeem maar ook onderscheid kan maken

Veel analytische studies op basis van moleculaire hebben bewezen dat de meeste papillaire schildkliercarcinomen worden veroorzaakt door twee verschillende signaalmechanismen van de MAPK (mitogeen-geactiveerde eiwitkinase) route, hetzij BRAF-achtig of RAS-achtig.

De meest voorkomende genmutatie in papillair schildkliercarcinoom (60%) is een miss mutatie in het BRAF-oncogeen, valine (V) die glutaminezuur (E) vervangt op aminozuurpositie 600, die uiteindelijk drijft met mitogeen-geactiveerde eiwitkinase-route-signalering.

Een systematische review en meta-analyse toonden aan dat het recidiefpercentage in BRAFV600E gemuteerde papillaire schildkliercarcinomen (24,9%) twee keer hoog was als wildtype papillaire schildkliercarcinoma's (12,6%). De BRAFV600E -gemuteerde PTC's hebben meer risico op lymfekliermetastase, extrathyroidale extensie en geassocieerd met geavanceerde AJCC III/IV -fase.

De toegang tot moleculaire testen heeft het gebruik van therapeutische middelen gericht op specifieke mutaties als BRAFV600E vergemakkelijkt.

De BRAFV600E-mutatie is heel gebruikelijk bij papillair schildkliercarcinoom (incidentie van 38-90%) en zelden aanwezig in goedaardige schildklierlaesies, dus de diagnostische specificiteit is hoog. Het leidt tot abnormale activering van de mitogeen-geactiveerde eiwitkinase-route die een belangrijke rol speelt bij de ontwikkeling van papillair schildkliercarcinoom. Er werd gemeld dat fijne naaldaspiratiecytologie in combinatie met de preoperatieve BRAFV600E -mutatiedetectie de diagnostische prestaties voor schildklierknobbeltjes kan verbeteren in vergelijking met cytologie van de fijne naald.

De gevoeligheid en specificiteit van de BRAFV600E -mutatietest alleen voor papillair schildkliercarcinoom waren respectievelijk 76,71% en 100% en toegenomen tot respectievelijk 96,62% en 88,03% in combinatie met cytologie. Dus de combinatie tussen fijne naaldaspiratiecytologie en BRAFV600E -mutatietests heeft de valse negatieven bij papillaire schildkliercarcinoomdiagnose verminderd.

Doel van de studie:

• Om het risico op maligniteit te evalueren bij TNS gediagnosticeerd als SPTC door FNAC.
• Om de verschillende morfometrische parameters te karakteriseren in gevallen die cytologisch zijn gediagnosticeerd als SPTC.
• Om de immunocytochemische expressie van BRAFV600E te evalueren in gevallen die cytologisch zijn gediagnosticeerd als SPTC.
• Om het nut van cytomorfometrische analyse en BRAFV600E immuunkleuring alleen of in combinatie te evalueren bij het upgraden van de diagnostische nauwkeurigheid van SPTC-gevallen.

Materiaal en methoden:

Een retrospectieve beschrijvende studie zal worden uitgevoerd op FNA-uitstrijkjes van schildklierknobbeltjes die gedurende een periode van zes jaar (2018-2025) zijn ontvangen in het Department of Pathology in Assiut University Hospital (2018-2025). De studie zal Papanicolaou (PAP) en hematoxyline en eosine (H&E) bekleurde uitstrijkjes beoordelen van 45 patiënten met schildklierknobbeltjes die als verdacht worden gediagnosticeerd voor papillair schildkliercarcinoom (Bethesda V), gecombineerd met de histopathologische gegevens van hun geresecteerde schildkliermonsters.

Inclusiecriteria:

Alleen Papanicolaou (PAP) en hematoxyline en eosine (H&E) gekleurd FNAC-uitstrijkjes met goed bewaarde nucleaire morfologie gediagnosticeerd als achterdochtig voor papillair schildkliercarcinoom zullen in de studie worden opgenomen.

Uitsluitingscriteria:

• FNAC -uitstrijkjes zonder histopathologische bevestiging.
• Smeren met uitgebreide nucleaire overlap en slechte morfologie.
• Smeren verdoezeld door ontsteking, bloed of mucoïd materiaal.
• Smeren met cellulaire degeneratieve veranderingen of droogartefacten.
• Elke patiënt met ontbrekende gegevens. Alle klinische, radiologische en pathologische gegevens zullen worden verzameld uit medische dossiers.

Persoonlijke gegevens inclusief leeftijd en geslacht, klinische gegevens als aantal schildklierknobbeltjes en hun grootte en de aanwezigheid of afwezigheid van cervicale lymfekliervergroting en druksymptomen en radiologische gegevens als schildklierbeeldvorming en datasysteem (TI-RADS) dat samenstelling, echogeniciteit, vorm, vorm, vorm, vorm en punctaat-echogeen-foci zal zijn.

Morfometrische studie:

Voor elk geval zullen 50 kernen uit folliculaire cellen in de verdachte cellulaire groep, met goed bewaarde morfologie, worden geselecteerd. Kernen die overlappende overlappen, zullen worden verdoezeld door ontsteking, bloed of mucin, of zullen degeneratieve veranderingen vertonen worden uitgesloten. De voorkeur wordt gegeven aan geïsoleerde kernen of die elkaar gewoon aanraken zonder elkaar te overlappen met een schone achtergrond. Elke geselecteerde kern gericht op het gebruik van een 1000x olie -immersie objectieve lens wordt afgebeeld met behulp van een digitale camera en wordt geanalyseerd met beeldanalysesoftware. De software geeft een specifiek nummer toe aan elke kern in de afbeelding en kwantificeert de morfometrische parameters.

Immunocytochemisch onderzoek:

BRAFV600E Immunocytochemie zal op de uitstrijkjes worden toegepast nadat ze ze zijn ontbloot.

Smeren zullen worden gekleurd met BRAFV600E -antilichamen met immunoperoxidasekleuring als een visualisatiemethode.

Antilichaamverdunning en incubatietijd zullen worden uitgevoerd volgens de instructies van de fabrikant.

Correlatie tussen resultaten van cytomorfometrische studies, resultaten van BRAFV600E -mutatietests en de resultaten van histopathologische dia's zullen worden uitgevoerd.