Paper de la citomorfometría y la inmunocitoquímica BRAFV600E con un diagnóstico citológico "sospechoso por el carcinoma de tiroides papilar"

Los nódulos tiroideos son hallazgo clínico común en la práctica médica y quirúrgica diaria de rutina. Son descubiertos por la ecografía en aproximadamente el 70% de las personas clínicamente sanas. Los nódulos tiroideos son cuatro veces más frecuentes en las mujeres y hasta el 90% de los casos son causados ​​por condiciones benignas.

El objetivo principal del manejo clínico de los nódulos tiroideos es la exclusión de la malignidad (4-6.5% de todos los nódulos tiroideos), la evaluación de los síntomas de presión y la evaluación de la disfunción tiroidea.

Se identificaron muchos factores de riesgo relacionados con el desarrollo de nódulos tiroideos que incluyen edad avanzada, género, aumento o disminución del yodo, antecedentes familiares de cáncer o poliposis y antecedentes de radiación de la cabeza y el cuello. Los nódulos tiroideos más comunes son los nódulos coloides, la tiroiditis de Hashimoto, la tiroiditis subaguda, los quistes, el adenoma folicular y los cánceres de tiroides.

Con respecto a los tumores malignos tiroideos, la incidencia de cáncer de tiroides aumentó en las últimas décadas en los Estados Unidos e internacionalmente. Es el séptimo cáncer más común en la población general y el quinto más común en las mujeres. La incidencia de cáncer de tiroides es aproximadamente 3 veces mayor en mujeres que en hombres y aumenta desde la adolescencia hasta la mediana edad, con el pico de alrededor de 55 años en mujeres y 65 años en hombres y luego disminuyendo con la edad avanzada.

El aumento del número de casos de cáncer es causado por un mayor diagnóstico resultante del uso generalizado de herramientas de diagnóstico que incluyen imágenes de ultrasonografía, citología de aspiración con aguja fina, tomografía computarizada, resonancia magnética y tomografía por emisión de positrones de fluorodoglucosa. Además del aumento en la exposición a los factores etiológicos como radiación ionizante durante la infancia y la obesidad.

El carcinoma de tiroides papilar (PTC) es el tipo histológico más común de cánceres de tiroides que representan el 90% de los casos. El 10% restante incluye carcinoma de tiroides folicular al 4%, carcinoma de células de obstáculos al 2%, carcinoma de tiroides medular al 2% y carcinoma de tiroides anaplásico al 1%.

El pronóstico del cáncer de tiroides es excelente porque la mayoría de los casos son carcinomas de tiroides papilar localizados en la glándula tiroides durante el diagnóstico. La tasa de supervivencia a 5 años es del 98.6% en general, 99.9% para localizado, 98.3% para regional y 54.9% para metástasis a distancia.

La citología de aspiración con aguja fina (FNAC) de la glándula tiroides es una prueba de diagnóstico precisa estándar de oro que se usa de manera rutinaria en la evaluación inicial de los nódulos tiroideos, ya que es simple, seguro, rentable y tiene una precisión favorable. La sensibilidad y la especificidad de la FNAC tiroidea son 68-98% y 56-100% respectivamente con las tasas de falla se deben a la técnica y la experiencia del rendimiento.

El sistema Bethesda para informar la citopatología tiroidea (TBSRTC) se publicó por primera vez en 2010 y se actualizó muchas veces para estandarizar la terminología de los informes y para una mejor comunicación entre citopatólogos y médicos.

El sistema Bethesda 2023 para informar la citopatología de la tiroides es un sistema de informes simple basado en categorías para la citología de aspiración con aguja fina (FNAC) de tiroides y se convirtió en uno de los métodos de diagnóstico y informes más utilizados e incluye 6 categorías.

Category (I) non diagnostic with 13%(5-20) risk of malignancy, Category (II) benign with 4%(2-7) risk of malignancy, Category (III) atypia of undetermined significance with 22%(13-30) risk of malignancy, Category (IV) follicular neoplasm with 30%(23-34) risk of malignancy, Category (V) suspicious for malignancy with 74%(67-83) Riesgo de malignidad y categoría (vi) maligno con 97%(97-100) riesgo de malignidad.

La categoría sospechosa de malignidad se usa cuando las características citomorfológicas no son concluyentes y plantean una fuerte sospecha de malignidad, pero son insuficientes cuantitativa o cualitativamente para un diagnóstico concluyente y el manejo habitual en este caso es la prueba molecular, la lobectomía o la tiroidectomía total casi total.

The suspicious for malignancy (SFM) according to Bethesda system category includes suspicious for papillary thyroid carcinoma (SPTC) which is the most common subtype (more than 90%) and less frequently suspicious for non-papillary carcinoma which consists of suspicious for medullary thyroid carcinoma, suspicious for malignant lymphoma, suspicious for poorly differentiated carcinoma and suspicious for malignidad no especificada de otra manera.

El sospechoso por el carcinoma de tiroides papilar se diagnostica debido a cambios nucleares irregulares (células foliculares no notables mezcladas con células que muestran agrandamiento nuclear, palidez, surcos y cromatina fina, escasas o pseudoinclusiones intranucleares y ausentes y ausentes ausentes, cambios nucleares nucleares nucleares (engranario nuclear generalizado, ausentales, escuadrantes, escuadrantes, escuadrantes, escuadrantes, inhalados en ausentes, escuadrantes, inhalados, incumplementales, incumplentes, incumplentes, incumplentes o grozooves ausentales, escuadrantes, escuadrantes, inhalados en ausentes, incumplentes, inhalorizados o grozooves ausentales. Las pseudoinclusiones de membrana e intranucleares y los cuerpos de arquitectura papilar y psammoma), muestra escasamente celular o degeneración quística (antecedentes de los restos císticos y macrófagos, la agrandamiento nuclear y las células histocitoides atípicas con vacunas citoplásmicas y arquitectura de la arquitectura papilar y los acorios de PSammamoma.

El sospechoso por el carcinoma de tiroides papilar se diagnostica en el 2.4-8% de los resultados de aspiración de aguja fina y el 60-80% de ellos se confirman en muestras resecadas como carcinoma de tiroides papilar y el resto de los casos mostraron condiciones benignas como tiroiditis linfocítica crónica (tiroiditis hebimoto) y hiperplasia nodular. La tiroiditis de Hashimoto es uno de los factores más comunes en el diagnóstico de carcinoma de tiroides papilar falso positivo debido a la fuerte superposición de las características morfológicas entre ellas.

Sospechoso para el diagnóstico de carcinoma de tiroides papilar es confuso para cirujanos y pacientes y dificulta la decisión quirúrgica óptima ya que la prevalencia de malignidad en esta categoría de diagnóstico es alta. Algunos cirujanos proceden por la tiroidectomía total y esto hace que aproximadamente el 25% de los pacientes (casos falsos positivos) puedan sufrir una exceso de presentación y necesidad de terapia de reemplazo hormonal para la vida. Se hicieron muchos ensayos para aumentar la precisión de la detección de malignidad en esta categoría y disminuir la posibilidad de exceso de presentación. Algunos autores aplicaron criterios ecográficos detallados para los casos diagnosticados citológicamente como sospechosos para el carcinoma de tiroides papilar e informaron un aumento de la precisión del 86% al 94%, mientras que otros realizaron una sección congelada intraoperatoria y pruebas auxiliares como marcadores moleculares.

El análisis citomorfométrico se ha utilizado como una herramienta de diagnóstico clínico y se ha discutido en la literatura durante más de 30 años. Se ha utilizado en muchos órganos como la nasofaringe, la piel, la vejiga urinaria, el colon, el seno y la tiroides. La morfometría es un procedimiento computarizado realizado a través del análisis cuantitativo de las características geométricas de las estructuras con cualquier dimensión. La morfometría nuclear de los núcleos malignos, incluidos el tamaño, la forma y el patrón de cromatina, son diferentes de las de los núcleos celulares no malignos, lo que permite que la morfometría nuclear distinga entre casos benignos y malignos. Usando la morfometría nuclear, podemos cuantificar una serie de parámetros, como los relacionados con el tamaño y la forma nuclear.

La morfometría puede ayudar como un complemento de las características morfológicas en las lesiones tiroideas cuando se aplica correctamente con los límites apropiados. Hasta ahora, la mayoría de los estudios de análisis de imágenes se han realizado en secciones histopatológicas y solo unos pocos estudios realizados en frotis citológicos. Se ha sugerido que los parámetros morfométricos nucleares, como el área nuclear y los factores de perímetro y forma, pueden permitir la diferenciación entre las lesiones tiroideas. La aplicación de morfometría a la citología sería útil para el fin de detección morfométrica automatizada, así como un diagnóstico preciso de tumores tiroideos.

El estudio morfométrico computarizado de los portaobjetos histológicos tiroideos identificó parámetros morfométricos eficientes que distinguen las diferencias entre las células epiteliales benignas y malignas y los parámetros más confiables son el área, el perímetro, la longitud, el ancho, el grado de redondez y la irregularidad de las membranas nucleares.

A study revealed that the cytomorphometric image analysis with cytomorphology has the potential for distinguishing not only the benign, follicular neoplasm/suspicious for a follicular neoplasm, malignant thyroid lesions of Bethesda system but also can distinguish nodules with follicular patterns as follicular variant of papillary carcinoma, follicular adenoma and follicular Carcinoma.

Muchos estudios analíticos basados ​​en moleculares han demostrado que la mayoría de los carcinomas de tiroides papilares son causados ​​por dos mecanismos de señalización distintos de la vía MAPK (proteína quinasa activada por mitógeno), ya sea como BRAF o RAS.

La mutación genética más común en el carcinoma de tiroides papilar (60%) es una mutación sin sentido en el oncogén BRAF, valina (V) que sustituye el ácido glutámico (E) en la posición de aminoácido 600, que finalmente impulsa la señalización de la vía de la proteína quinasa activada por mitógeno.

Una revisión sistemática y un metanálisis mostraron que la tasa de recurrencia en los carcinomas de tiroides papilares mutados BRAFV600E (24.9%) era dos veces alta como los carcinomas de tiroides papilares de tipo salvaje (12.6%). El PTC mutado BRAFV600E tiene más riesgo de metástasis de ganglios linfáticos, extensión extratiroidal y asociado con una etapa avanzada AJCC III/IV.

El acceso a las pruebas moleculares ha facilitado el uso de agentes terapéuticos dirigidos a mutaciones específicas como BRAFV600E.

La mutación BRAFV600E es muy común en el carcinoma de tiroides papilar (38-90% de incidencia) y rara vez presente en las lesiones tiroideas benignas, por lo que su especificidad diagnóstica es alta. Conduce a la activación anormal de la vía de la proteína quinasa activada por mitógeno que juega un papel importante en el desarrollo del carcinoma papilar de tiroides. Se informó que la citología de aspiración con aguja fina combinada con la detección de mutación BRAFV600E preoperatoria puede mejorar el rendimiento diagnóstico de los nódulos tiroideos en comparación con la citología de aspiración con aguja fina sola.

La sensibilidad y la especificidad de las pruebas de mutación BRAFV600E solas para el carcinoma de tiroides papilar fueron 76.71% y 100% respectivamente y aumentaron a 96.62% y 88.03% respectivamente cuando se combinaron con citología. Entonces, la combinación entre la citología de aspiración con aguja fina y las pruebas de mutación BRAFV600E ha disminuido los falsos negativos en el diagnóstico de carcinoma de tiroides papilar.

Objetivo del estudio:

• Evaluar el riesgo de malignidad en TNS diagnosticado como SPTC por FNAC.
• Para caracterizar los diferentes parámetros morfométricos en casos diagnosticados citológicamente como SPTC.
• Evaluar la expresión inmunocitoquímica de BRAFV600E en casos diagnosticados citológicamente como SPTC.
• Para evaluar la utilidad del análisis citomorfométrico y la tinción inmune BRAFV600E sola o en combinación para mejorar la precisión diagnóstica de los casos SPTC.

Material y métodos:

Se realizará un estudio descriptivo retrospectivo en frotis FNA de nódulos tiroideos recibidos en el Departamento de Patología del Hospital de la Universidad de Assiut durante un período de seis años (2018-2025). El estudio revisará Papanicolaou (PAP) y Hematoxylin & Eosin (H&E) manchados de 45 pacientes con nódulos de tiroides diagnosticados como sospechosos para el carcinoma de tiroides papilar (Bethesda V), combinados con los datos histopatológicos de sus muestras de tiroides resecadas.

Criterios de inclusión:

Solo se incluirán en el estudio se incluirán en el estudio se incluirá en el estudio los frotis de FNAC solo Papanicolaou (PAP) y Hematoxylin & Eosin (H&E) con morfología nuclear bien conservada como sospechoso para el carcinoma de tiroides papilares.

Criterios de exclusión:

• FNAC frotis que carecen de confirmación histopatológica.
• Frotis con extensa superposición nuclear y mala morfología.
• Frotis oscurecidos por inflamación, sangre o material mucoide.
• Frotis que exhiben cambios degenerativos celulares o artefactos de secado.
• Cualquier paciente con datos faltantes. Todos los datos clínicos, radiológicos y patológicos se recopilarán de los registros médicos.

Datos personales que incluyen edad y género, datos clínicos como número de nódulos de tiroides y su tamaño y la presencia o ausencia de agrandamiento de ganglios linfáticos cervicales y síntomas de presión y datos radiológicos a medida que se recopilan los informes de imágenes y datos de tiroides (TI-RAD).

Estudio morfométrico:

Para cada caso, se seleccionarán 50 núcleos de células foliculares dentro del grupo celular sospechoso, con morfología bien conservada. Los núcleos que exhibirán superposición, se oscurecerán por la inflamación, la sangre o la mucina, o mostrarán cambios degenerativos. Se dará preferencia a los núcleos aislados o aquellos que simplemente se tocan sin superposición con un fondo limpio. Cada núcleo seleccionado se centró en usar una lente objetivo de inmersión de aceite 1000X se tomará imágenes utilizando una cámara digital y se analizará con el software de análisis de imágenes. El software asignará un número específico a cada núcleo en la imagen y cuantificará sus parámetros morfométricos.

Estudio inmunocitoquímico:

La inmunocitoquímica BRAFV600E se aplicará en las manchas después de desestimarlos.

Las manchas se tiñeron con anticuerpos BRAFV600E con tinción con inmunoperoxidasa como método de visualización.

La dilución de anticuerpos y el tiempo de incubación se realizarán de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

La correlación entre los resultados de los estudios citomorfométricos, los resultados de las pruebas de mutación BRAFV600E y los resultados de los portaobjetos histopatológicos se realizarán.