Role cytomorfometrie a imunocytochemie BRAFV600E s cytologickou diagnózou „podezřelá pro papilární karcinom štítné žlázy“ “

Uzly štítné žlázy jsou běžným klinickým nálezem v rutinní denní lékařské a chirurgické praxi. Ultrasonografie jsou objeveny u asi 70% klinicky zdravých jedinců. Uzly štítné žlázy jsou u žen čtyřikrát častější a až 90% případů je způsobeno benigními podmínkami.

Hlavním cílem klinického řízení uzlů štítné žlázy je vyloučení malignity (4-6,5% všech uzlů štítné žlázy), posouzení příznaků tlaku a hodnocení dysfunkce štítné žlázy.

Bylo identifikováno mnoho rizikových faktorů souvisejících s vývojem uzlů štítné žlázy, včetně pokročilého věku, pohlaví, zvýšeného nebo sníženého jódu, rodinné anamnézy rakoviny nebo polypózy a anamnézy záření hlavy a krku. Nejběžnějšími uzly štítné žlázy jsou koloidní uzly, Hashimotova tyreoiditida, subakutní tyreoiditida, cysty, folikulární adenom a rakoviny štítné žlázy.

Pokud jde o maligní nádory štítné žlázy, výskyt rakoviny štítné žlázy se v posledních desetiletích ve Spojených státech a na mezinárodní úrovni zvýšil. Je to 7. nejběžnější rakovina v běžné populaci a 5. nejběžnější u žen. Incidence rakoviny štítné žlázy je u žen asi 3krát vyšší než u mužů a zvyšuje se z dospívání do středního věku s vrcholem asi 55 let u žen a 65 let u mužů a poté klesá s starším věkem.

Zvýšení počtu případů rakoviny je způsobeno zvýšenou diagnózou vyplývající z rozsáhlého používání diagnostických nástrojů včetně zobrazování ultrasonografie, aspirační cytologie jemné jehly, počítačové tomografie, zobrazování magnetické rezonance a emisní tomografii fluorodeoxyglukózy. Kromě zvýšení expozice etiologickým faktorům jako ionizující záření během dětství a obezity.

Papilární karcinom štítné žlázy (PTC) je nejběžnějším histologickým typem rakoviny štítné žlázy představujících 90% případů. Zbývajících 10% zahrnuje folikulární karcinom štítné žlázy 4%, karcinom buněk hurtleů 2%, medulární karcinom štítné žlázy 2% a anaplastický karcinom štítné žlázy 1%.

Prognóza rakoviny štítné žlázy je vynikající, protože většina případů jsou papilární karcinomy štítné žlázy lokalizované na štítné žláze během diagnózy. 5letá míra přežití je celkově 98,6%, 99,9% pro lokalizované, 98,3% pro regionální a 54,9% pro vzdálené metastázy.

Cytologie aspirace s jemnou jehlou (FNAC) štítné žlázy je zlatý standard přesný diagnostický test běžně používaný při počátečním hodnocení uzlů štítné žlázy, protože je jednoduchý, bezpečný, nákladově efektivní a má příznivou přesnost. Citlivost a specificita štítné žlázy FNAC je 68-98% a 56-100% s mírou selhání je způsobeno technikou a zkušeností s výkonem.

Systém Bethesda pro hlášení cytopatologie štítné žlázy (TBSRTC) byl poprvé publikován v roce 2010 a mnohokrát aktualizován, aby standardizoval terminologii hlášení a pro lepší komunikaci mezi cytopatology a klinickými lékaři.

Systém Bethesda 2023 pro hlášení cytopatologie štítné žlázy je jednoduchý systém hlášení založeného na kategorii pro jemnou aspirační cytologii jehly (FNAC) štítné žlázy a stal se jednou z nejpoužívanějších hlášení a diagnostických metod a zahrnuje 6 kategorií.

Category (I) non diagnostic with 13%(5-20) risk of malignancy, Category (II) benign with 4%(2-7) risk of malignancy, Category (III) atypia of undetermined significance with 22%(13-30) risk of malignancy, Category (IV) follicular neoplasm with 30%(23-34) risk of malignancy, Category (V) suspicious for malignancy with 74%(67-83) Riziko malignity a kategorie (VI) maligní s 97%(97-100) rizikem malignity.

Kategorie podezřelé pro malignitu se používá, když jsou cytomorfologické rysy neprůkazné a zvyšují silné podezření z malignity, ale jsou kvantitativně nebo kvalitativně nedostatečné pro přesvědčivou diagnózu a obvyklým řízením v tomto případě je molekulární testování, lobektomie nebo téměř celkovou tyreoirektomii.

Podezření pro malignitu (SFM) podle kategorie systému Bethesda zahrnuje podezření pro karcinom papilární štítné žlázy (SPTC), který je nejběžnějším podtypem (více než 90%) a méně často podezřelý pro nepapilární karcinom, který je podezřelý pro karcinom, který má podezřelý pro carcinom, který má podezřelý pro carcinom, který je pro podezření, a suspendifikuje se s postižlivým carcinomem, a na suspendifikaci a suspendifikující se pro chudým carcinomem a suspendifikaci a podezřelým pro slabost se sezefem se sekční. pro malignitu, která není jinak specifikována.

Suspicious for papillary thyroid carcinoma is diagnosed due to patchy nuclear changes (unremarkable follicular cells admixed with cells showing nuclear enlargement, pallor, grooves and fine chromatin, scant or absent intranuclear pseudoinclusions and absent papillary architecture) , incomplete nuclear changes (generalized nuclear enlargement, pallor and grooves, scant or absent irregular Jaderná membrána a intranukleární pseudoinclusions a nepřítomná papilární architektura a těla psammomu), řídce buněčný vzorek nebo cystická degenerace (pozadí cystických degenerů a makrofágů, jaderné zvětšení a bledorky, buňky cytoplasmické architektury a body pdammomu.

Podezřelé pro karcinom papilární štítné žlázy je diagnostikováno u 2,4–8% výsledků aspirace jemných jehličí a 60-80% z nich je potvrzeno v resekovaných vzorcích jako papilární karcinom štítné žlázy a zbytek případů vykazoval benigní podmínky jako chronická lymfocytární tyreoiditida (hashimoto Thyroiditida) a hyperplasitida na nodular. Hashimoto tyreoiditida je jedním z nejčastějších faktorů falešně pozitivní diagnózy karcinomu karcinomu štítné žlázy kvůli silnému překrývání morfologických rysů mezi nimi.

Podezření na diagnózu papilárního karcinomu štítné žlázy je pro chirurgy a pacienty matoucí a ztěžuje optimální chirurgické rozhodnutí, protože prevalence malignity v této diagnostické kategorii je vysoká. Někteří chirurgové probíhají pro celkovou tyreoidektomii, což způsobuje, že asi 25% pacientů (falešně pozitivních případů) může trpět nadměrnourgií a potřebuje hormonální substituční terapii po celý život. Bylo provedeno mnoho pokusů za účelem zvýšení přesnosti detekce malignity v této kategorii a snížení možnosti nadměrné látky. Někteří autoři použili podrobná ultrasonografická kritéria pro případy diagnostikované cytologicky jako podezřelé pro papilární karcinom štítné žlázy a vykázaly zvýšení přesnosti z 86% na 94%, zatímco jiné prováděly intraoperační zmrazené řez a pomocné testy jako molekulární markery.

Cytomorfometrická analýza byla použita jako klinický diagnostický nástroj a diskutována v literatuře více než 30 let. Používá se v mnoha orgánech, jako je nosopharynx, kůže, močový měchýř, tlusté střevo, prsa a štítná žláza. Morfometrie je počítačový postup prováděný kvantitativní analýzou geometrických rysů struktur s jakoukoli dimenzí. Jaderná morfometrie maligních jádra včetně velikosti, tvaru a chromatinového vzoru se liší od jader nealignantních buněk, která umožňuje rozlišení jaderné morfometrie mezi benigními a maligními případy. Pomocí jaderné morfometrie můžeme kvantifikovat řadu parametrů, jako jsou ty související s velikostí a tvarem jaderné.

Morfometrie může pomoci jako doplněk k morfologickým rysům v lézích štítné žlázy, když je správně aplikováno s vhodnými mezními hodnotami. Doposud byla provedena většina studií analýzy obrazu na histopatologických řezech a pouze jen málo studií na cytologických nátěrech. Bylo navrženo, že jaderné morfometrické parametry, jako je jaderná oblast a faktory obvodu a tvaru, mohou umožnit diferenciaci mezi lézemi štítné žlázy. Použití morfometrie na cytologii by bylo užitečné pro účely automatizovaného morfometrického screeningu a přesné diagnózy nádorů štítné žlázy.

Počítačová morfometrická studie histologických sklíčka štítné žlázy identifikovala účinné morfometrické parametry, které rozlišují rozdíly mezi benigními a maligními epiteliálními buňkami a nejspolehlivějšími parametry, je oblast, obvod, délka, šířka, šířka, šířka, šířka, šířka, šířka, šířka, šířka, šířka, šířka, šířka, šířka, šířka, šířka, šířka, šířka, šířka, šířka, šířka, šířka, šířka, šířka, stupeň kulaté a nepravidelnosti jaderných membrán.

A study revealed that the cytomorphometric image analysis with cytomorphology has the potential for distinguishing not only the benign, follicular neoplasm/suspicious for a follicular neoplasm, malignant thyroid lesions of Bethesda system but also can distinguish nodules with follicular patterns as follicular variant of papillary carcinoma, follicular adenoma and follicular Karcinom.

Mnoho analytických studií na bázi molekulárních prokázalo, že většina papilárních karcinomů štítné žlázy je způsobena dvěma odlišnými signálními mechanismy dráhy MAPK (mitogen aktivovaná proteinová kináza), buď podobná BRAF nebo RAS.

Nejběžnější genovou mutací v papilárním karcinomu štítné žlázy (60%) je missense mutace v BRAF onkogenu, valin (V) nahrazující kyselinu glutamovou (E) v aminokyselinové poloze 600, která konečně řídí mitogen aktivovanou proteinovou kinázovou dráhu.

Systematický přehled a metaanalýza ukázaly, že míra recidivy v papilárních karcinomech štítné žlázy (24,9%) mutovaných BRAFV600E (24,9%) byla dvakrát vysoká jako papilární karcinomy štítné žlázy divokého typu (12,6%). Brafv600E mutované PTC má větší riziko pro metastázy lymfatických uzlin, extrathyroidální prodloužení a spojené s pokročilým stádiem AJCC III/IV.

Přístup k molekulárnímu testování usnadnil použití terapeutických látek zaměřených na specifické mutace jako BRAFV600E.

Mutace BRAFV600E je velmi běžná u papilárního karcinomu štítné žlázy (incidence 38-90%) a zřídka je přítomna v benigních lézích štítné žlázy, takže jeho diagnostická specificita je vysoká. Vede to k abnormální aktivaci dráhy proteinové kinázy aktivované mitogenem, která hraje důležitou roli ve vývoji papilárního karcinomu štítné žlázy. Bylo hlášeno, že cytologie aspirace jemné jehly kombinované s předoperační detekcí mutace BRAFV600E může zlepšit diagnostický výkon u uzlů štítné žlázy ve srovnání s aspirační cytologií jemné jehly.

Citlivost a specificita testování mutací BRAFV600E samotná pro papilární karcinom štítné žlázy byla 76,71% a 100% a zvýšila se na 96,62% a 88,03% v kombinaci s cytologií. Kombinace mezi aspirační cytologií jemné jehly a testy mutací BRAFV600E tedy snížila falešné negativy v diagnostice papilárního karcinomu štítné žlázy.

Cíl studie:

• Vyhodnotit riziko malignity v TNS diagnostikované jako SPTC pomocí FNAC.
• K charakterizaci různých morfometrických parametrů v případech diagnostikovaných cytologicky jako SPTC.
• Pro vyhodnocení imunocytochemické exprese BRAFV600E v případech diagnostikovaných cytologicky jako SPTC.
• Pro vyhodnocení užitečnosti cytomorfometrické analýzy a imunitního zbarvení BRAFV600E samotného nebo v kombinaci při upgradu diagnostické přesnosti případů SPTC.

Materiál a metody:

Retrospektivní popisná studie bude provedena na nátěru FNA uzlů štítné žlázy přijaté na patologickém ministerstvu v Assiut Fakultní nemocnici po dobu šesti let (2018–2025). Studie přezkoumá papanicolaou (PAP) a hematoxylin a eosin (H&E) obarvené nátěry od 45 pacientů s uzly štítné žlázy diagnostikované jako podezřelé pro papilární karcinom štítné žlázy (Bethesda V), kombinované s histopatologickými údaji jejich resekovaných vzorků.

Kritéria pro zařazení:

Do studie budou do studie zahrnuty pouze Papanicolaou (PAP) a hematoxylin a eosin (H&E) obarvené nátěry s dobře zachovanou jadernou morfologií diagnostikované jako podezřelé pro papilární karcinom štítné žlázy.

Kritéria pro vyloučení:

• FNAC nátěry postrádají histopatologické potvrzení.
• Roztěru s rozsáhlým jaderným překrýváním a špatnou morfologií.
• Štěpaly se zakryté zánětem, krví nebo mukoidním materiálem.
• Nátěry vykazující buněčné degenerativní změny nebo sušení artefaktů.
• Každý pacient s chybějícími údaji. Všechny klinické, radiologické a patologické údaje budou shromažďovány z lékařských záznamů.

Osobní údaje včetně věku a pohlaví, klinických údajů jako počtu uzlů štítné žlázy a jejich velikosti a přítomnosti nebo nepřítomnosti zvětšení lymfatických uzlin a příznaků tlaku a radiologické údaje, které zahrnují složení echogenity, tvar, okraj a destičky echogenického ohniska.

Morfometrická studie:

Pro každý případ bude vybráno 50 jádra z folikulárních buněk v podezřelé buněčné skupině s dobře zachovanou morfologií. Jádra, která budou vykazovat překrývání, budou zakryta zánětem, krví nebo mucinem, nebo budou vykazovat degenerativní změny, budou vyloučena. Preference budou dána izolovaným jádrům nebo jádrům, které se dotýkají navzájem bez překrývání s čistým pozadím. Každé vybrané jádro zaměřené na použití objektivu objektivu ponoření oleje 1000x bude zobrazeno pomocí digitálního fotoaparátu a bude analyzováno pomocí softwaru pro analýzu obrazu. Software přiřadí každému jádru konkrétní číslo v obrázku a kvantifikuje jeho morfometrické parametry.

Imunocytochemická studie:

Imunocytochemie BRAFV600E bude po odchodu aplikována na nátěry.

Smary budou obarveny protilátkami BRAFV600E s imunoperoxidázou jako vizualizační metoda.

Ředění protilátek a doba inkubace budou provedena podle pokynů výrobce.

Korelace mezi výsledky cytomorfometrických studií, výsledky mutačních testů BRAFV600E a výsledky histopatologických sklíčků budou provedena.