Rola cytomorfometrii i immunocytochemii BRAFV600E z diagnozą cytologiczną „podejrzaną w przypadku brodawkowego raka tarczycy”

Guzki tarczycy są powszechnym odkryciem klinicznym w codziennej codziennej praktyce medycznej i chirurgicznej. Odkrywają je przez ultrasonografię u około 70% klinicznie zdrowych osób. Guzki tarczycy są czterokrotnie bardziej powszechne u kobiet, a do 90% przypadków jest spowodowane łagodnymi warunkami.

Głównym celem klinicznego leczenia guzków tarczycy jest wykluczenie nowotworów złośliwych (4-6,5% wszystkich guzków tarczycy), ocena objawów ciśnienia i ocena dysfunkcji tarczycy.

Zidentyfikowano wiele czynników ryzyka związanych z rozwojem guzków tarczycy, w tym zaawansowany wiek, płeć, zwiększony lub zmniejszony jod, rodzinną historię raka lub polipowatą oraz historią promieniowania głowy i szyi. Najczęstszymi guzkami tarczycy są guzki koloidalne, zapalenie tarczycy Hashimoto, podostłe zapalenie tarczycy, torbiele, gruczolak pęcherzykowy i raki tarczycy.

Jeśli chodzi o złośliwe guzy tarczycy, częstość występowania raka tarczycy wzrosła w ciągu ostatnich dziesięcioleci w Stanach Zjednoczonych i na arenie międzynarodowej. Jest to 7. najczęściej rak w populacji ogólnej i 5. najczęściej najczęściej u kobiet. Częstość występowania raka tarczycy jest około 3 razy wyższa u kobiet niż mężczyzn i wzrasta z okresu dojrzewania do wieku średniego z szczytem około 55 lat u kobiet i 65 lat u mężczyzn, a następnie zmniejsza się w starszym wieku.

Wzrost liczby przypadków raka jest spowodowany zwiększoną diagnozą wynikającą z powszechnego stosowania narzędzi diagnostycznych, w tym obrazowania ultrasonograficznego, cytologii aspiracji igłowej, tomografii komputerowej, obrazowania rezonansu magnetycznego i tomografii emisyjnej pozytronowej fluorodeoksyglukozy. Oprócz wzrostu narażenia na czynniki etiologiczne jako promieniowanie jonizujące w dzieciństwie i otyłości.

Brodawkowy rak tarczycy (PTC) jest najczęstszym typem raku tarczycy reprezentujących 90% przypadków. Pozostałe 10% obejmuje pęcherzykowe raka tarczycy 4%, rak komórek Hurthle 2%, rdzeń rdzeniący 2% i anaplastyczne rak tarczycy 1%.

Prognozy raka tarczycy są doskonałe, ponieważ większość przypadków to brodawkowe raki tarczycy zlokalizowane na tarczycy podczas diagnozy. 5-letni wskaźnik przeżycia wynosi 98,6% ogólnie, 99,9% dla zlokalizowanych, 98,3% dla regionalnych i 54,9% dla odległych przerzutów.

Cytologia aspiracyjna o drobiazgach (FNAC) tarczycy jest złotym standardowym testem diagnostycznym rutynowo stosowanym w początkowej ocenie guzków tarczycy, ponieważ jest to proste, bezpieczne, opłacalne i ma korzystną dokładność. Czułość i swoistość FNAC tarczycy wynoszą odpowiednio 68-98% i 56-100%, a wskaźniki awarii wynikają z techniki i doświadczenia wydajności.

System Bethesda do zgłaszania cytopatologii tarczycy (TBSRTC) został po raz pierwszy opublikowany w 2010 r. I wiele razy aktualizowany w celu standaryzacji terminologii raportowania i lepszej komunikacji między cytopatologami i klinicystami.

System Bethesda 2023 do zgłaszania cytopatologii tarczycy jest prostym systemem raportowania opartym na kategorii cytologii aspiracji igłowych (FNAC) i stał się jedną z najczęściej stosowanych metod raportowania i diagnostycznych i obejmuje 6 kategorii.

Kategoria (i) nie diagnostyka z 13%(5-20) ryzykiem nowotworów złośliwych, kategoria (ii) łagodna z 4%(2-7) ryzyko złośliwości, kategorii (iii) atypia nieokreślonego znaczenia z 22%(13-30) ryzyko złośliwości, kategorii (IV) nowotworu czyszczonowego z 30%(23-34) złośliwości, kategorii (v) dla złośliwości złośliwości (IV). 74%(67–83) ryzyko złośliwości nowotworu i kategorii (VI) z 97%(97-100) ryzyka nowotworów złośliwych.

Kategoria podejrzana w przypadku nowotworów jest stosowana, gdy cechy cytomorfologiczne są niejednoznaczne i budzą silne podejrzenie złośliwości, ale są ilościowo lub jakościowo niewystarczające do rozstrzygającej diagnozy, a zwykłym postępowaniem w tym przypadku jest badanie molekularne, lobektomię lub prawie całkowitą tyroidektomię.

Podejrzanie z powodu nowotworów złośliwych (SFM) zgodnie z kategorią systemu Bethesda obejmuje podejrzane w przypadku brodawkowego raka tarczycy (SPTC), który jest najczęstszym podtypem (ponad 90%) i rzadziej podejrzliwego dla raka niepapilnego, który składa się z podejrzania o podejrzanie o podejrzanym raku i podejrzanym i podejrzanym i podejrzewającym zróżnicowanego raka i podejrzanego i wystawionego na raka i podejrzanego. dla złośliwości nie określono inaczej.

Podejrzany w przypadku brodawkowatego raka tarczycy jest diagnozowany z powodu niejednolitych zmian jądrowych (nietypowe komórki pęcherzykowe pomieszane z komórkami wykazującymi powiększenie jądrową, bladę, rowki i drobną chromatynę, skąpe lub nieobecne wewnątrzjądrowe pseudoincluuzje i nieobecne architektura bękawowe), nieobowiązkowe architektura baskórka) nieto Błona jądrową i pseudoinkluzy wewnątrzjądrowe oraz nieobecne architektura brodawkową i ciała psammoma), rzadko komórkowe próbki lub zwyrodnienie torbielowate (tło gruzu torbielowatego i makrofagów, nuklearne i blorowe, atypowe komórki histocytoidalne z cytoplazmatyczną wakuurą.

Podejrzane w przypadku brodawkowatego raka tarczycy diagnozuje się w 2,4-8% wyników aspiracji igły, a 60-80% z nich potwierdza się w wyciętych próbkach jako brodawkowatego raka tarczycy, a reszta przypadków wykazywała łagodne warunki jako przewlekłe zapalenie tarczycy limfocytowej (Hashimoto Tychoriarza). Hashimoto zapalenie tarczycy jest jednym z najczęstszych czynników w diagnozie raka tarczycy fałszywie dodatnich brodawkowatego z powodu silnego nakładania się między nimi cech morfologicznych.

Podejrzane w przypadku diagnozy raka tarczycy brodawkowej jest mylące dla chirurgów i pacjentów i utrudnia optymalną decyzję chirurgiczną, ponieważ rozpowszechnienie złośliwości w tej kategorii diagnostycznej jest wysokie. Niektórzy chirurdzy przystępują do całkowitej tarczycy, co sprawia, że ​​około 25% pacjentów (przypadki fałszywie pozytywnych) może cierpieć na granicę i potrzebującą hormonalnej terapii zastępczej na całe życie. Przeprowadzono wiele prób zwiększenia dokładności wykrywania nowotworów złośliwych w tej kategorii i zmniejszenia możliwości przekażenia. Niektórzy autorzy zastosowali szczegółowe kryteria ultrasonograficzne dla przypadków zdiagnozowanych cytologicznie jako podejrzanych w przypadku brodawkowatego raka tarczycy i zgłosili wzrost dokładności z 86% do 94%, podczas gdy inne wykonywali śródoperacyjne zamrożone przekrój i testy dodatkowe jako markery molekularne.

Analiza cytomorfometryczna była stosowana jako kliniczne narzędzie diagnostyczne i omawiana w literaturze od ponad 30 lat. Został stosowany w wielu narządach, takich jak nosogardzień, skóra, pęcherz moczowy, okrężnica, piersi i tarczyca. Morfometria jest skomputeryzowaną procedurą wykonywaną poprzez analizę ilościową cech geometrycznych struktur o dowolnym wymiarze. Morfometria jądrowa jąder złośliwych, w tym rozmiar, kształt i wzór chromatyny, różni się od niemiłosłych jąder komórkowych, co pozwala morfometrii jądrowej rozróżnić przypadki łagodne i złośliwe. Korzystając z morfometrii jądrowej, możemy określić ilościowo szereg parametrów, takich jak te związane z wielkością i kształtem jądrowym.

Morfometria może pomóc jako dodatek do cech morfologicznych w zmianach tarczycy, gdy jest prawidłowo stosowany z odpowiednimi odcięciami. Do tej pory przeprowadzono większość badań analizy obrazu na skrawkach histopatologicznych i tylko kilka badań przeprowadzonych na rozmazach cytologicznych. Sugerowano, że parametry morfometryczne jądrowe, takie jak obszar jądrowy oraz czynniki obwodu i kształtu, mogą umożliwić rozróżnienie między zmianami tarczycy. Zastosowanie morfometrii do cytologii byłoby przydatne w celu zautomatyzowanego badania przesiewowego morfometrycznego, a także dokładnej diagnozy guzów tarczycy.

Komputerowe badanie morfometryczne szkiełek histologicznych tarczycy zidentyfikowało wydajne parametry morfometryczne, które rozróżniają różnice między łagodnymi i złośliwymi komórkami nabłonkowymi, a najbardziej wiarygodnymi parametrami są obszar, obwód, długość, szerokość, stopień okrągłości i nieregularności błon jądrowych.

Badanie wykazało, że analiza obrazu cytomorfometrycznego z cytomorfologią może potencjalnie rozróżnić nie tylko łagodny nowotwór pęcherzykowy/podejrzany pod względem nowotworów pęcherzykowych, złośliwe zmiany tarczycy betesda, ale także mogą rozróżniać guzki płciowe pęcherzykowe. Rak.

Wiele badań analitycznych opartych na molekularnych udowodniło, że większość brodawkowatego raka tarczycy jest spowodowana dwoma wyraźnymi mechanizmami sygnałowymi szlaku MAPK (kinazy białkowej aktywowanej mitogenem), podobnymi do BRAF lub Ras.

Najczęstszą mutacją genów w brodawkowym raku tarczycy (60%) jest mutacja missense w brafie onkogenu, zastępującym sygnalizację kwasu glutaminowego (E) w pozycji aminokwasowej 600, która ostatecznie napędza aktywowaną mitogenową szlak kinazy białkowej.

Systematyczny przegląd i metaanaliza wykazały, że wskaźnik nawrotów zmutowanych brodawkowatego raka brodawkowatego BRAFV600E (24,9%) był dwa razy wysoki jak brodawkowe raka brodawkowate typu dzikiego (12,6%). Zmutowane PTCS BRAFV600E ma większe ryzyko przerzutów do węzłów chłonnych, rozszerzenia na zewnątrz i związanych z zaawansowanym stadium AJCC III/IV.

Dostęp do testów molekularnych ułatwił zastosowanie środków terapeutycznych ukierunkowanych na specyficzne mutacje jako BRAFV600E.

Mutacja BRAFV600E jest bardzo powszechna w brodawkowym raku tarczycy (38-90% zapadalności) i rzadko występują w łagodnych zmianach tarczycy, więc jego specyficzność diagnostyczna jest wysoka. Prowadzi to do nieprawidłowej aktywacji szlaku kinazy białkowej aktywowanej mitogenem, który odgrywa ważną rolę w rozwoju brodawkowego raka tarczycy. Doniesiono, że cytologia aspiracji drobnej igły w połączeniu z przedoperacyjnym wykrywaniem mutacji BRAFV600E może poprawić wydajność diagnostyczną guzków tarczycy w porównaniu z samą cytologią aspiracji igłowej.

Czułość i swoistość samego testu mutacji Brafv600E dla brodawkowatego raka tarczycy wyniosły odpowiednio 76,71% i 100% i wzrosły odpowiednio do 96,62% i 88,03% w połączeniu z cytologią. Tak więc połączenie cytologii aspiracji igłowych i testów mutacji BRAFV600E zmniejszyło fałszywe negatywy w diagnozowaniu brodawkowatego raka tarczycy.

Cel badania:

• Aby ocenić ryzyko nowotworu w TNS zdiagnozowanych jako SPTC przez FNAC.
• Aby scharakteryzować różne parametry morfometryczne w przypadkach zdiagnozowanych cytologicznie jako SPTC.
• Aby ocenić immunocytochemiczną ekspresję Brafv600E w przypadkach zdiagnozowanych cytologicznie jako SPTC.
• Aby ocenić użyteczność analizy cytomorfometrycznej i samego barwienia odpornościowego BRAFV600E lub w połączeniu w modernizacji dokładności diagnostycznej przypadków SPTC.

Materiał i metody:

Retrospektywne badanie opisowe zostanie przeprowadzone na rozmazach FNA guzków tarczycy otrzymanych na Wydziale Patologii w Szpitalu Uniwersyteckim Assiut w okresie sześciu lat (2018-2025). Badanie dokonuje przeglądu rozmazów zabarwionych Papanicolaou (PAP) i hematoksyliny i eozyny (H&E) od 45 pacjentów z guzkami tarczycy, zdiagnozowanymi jako podejrzane w przypadku brodawkowatego raka tarczycy (Bethesda V), w połączeniu z danymi histopatologicznymi ich wyciętych specjalizacji tylności.

Kryteria włączenia:

W badaniu zostaną uwzględnione tylko papanicolaou (PAP) oraz hematoksylinę i eozynę (H&E) z dobrze zachowaną morfologią jądrową, zdiagnozowaną jako podejrzane w przypadku brodawkowego raka tarczycy.

Kryteria wykluczenia:

• FNAC rozmazy bez potwierdzenia histopatologicznego.
• Rozmazu rozległym nakładaniem się nuklearnym i złej morfologii.
• Mazmy zasłonięte zapaleniem, krwi lub materiału śluzowym.
• Rozmary wykazujące komórkowe zmiany zwyrodnieniowe lub artefakty suszenia.
• Każdy pacjent z brakującymi danymi. Wszystkie dane kliniczne, radiologiczne i patologiczne zostaną zebrane z dokumentacji medycznej.

Dane osobowe, w tym wiek i płeć, dane kliniczne jako liczba guzków tarczycy oraz ich wielkość oraz obecność lub brak węzłów chłonnych szyjki macicy i objawy ciśnienia oraz dane radiologiczne, gdy zostaną zbierane zgłaszanie obrazowania tarczycy.

Badanie morfometryczne:

Dla każdego przypadku wybrano 50 jąder z komórek pęcherzykowych w podejrzanej grupie komórkowej z dobrze zachowaną morfologią. Jądra, które będą miały nakładanie się, zostaną zasłonięte przez zapalenie, krew lub mucynę, lub będą wykluczone zmiany zwyrodnieniowe, zostaną wykluczone. Preferowane będą izolowane jądra lub te po prostu dotykające się bez nakładania się na czyste tło. Każde wybrane jądro skupione na użyciu obiektywu zanurzenia oleju 1000x zostanie obrazowane przy użyciu aparatu cyfrowego i będzie analizowana za pomocą oprogramowania do analizy obrazu. Oprogramowanie przypisuje określoną liczbę do każdego jądra na obrazie i określi jego parametry morfometryczne.

Badanie immunocytochemiczne:

Immunocytochemia immunocytochemii BRAFV600E zostanie zastosowana na rozmazach po ich odroczeniu.

Rozmazu zostaną zabarwione przeciwciałami BRAFV600E z barwieniem immunoperoksydazy jako metodą wizualizacji.

Rozcieńczenie przeciwciał i czas inkubacji zostaną przeprowadzone zgodnie z instrukcjami producenta.

Korelacja między wynikami badań cytomorfometrycznych, wyniki testów mutacji Brafv600E a wynikiem szkiełek histopatologicznych.