Rôle de la cytomorphométrie et de l'immunocytochimie BRAFV600E avec un diagnostic cytologique "suspect pour le carcinome thyroïdien papillaire"

Les nodules thyroïdiens sont des résultats cliniques courants dans la pratique médicale et chirurgicale quotidienne de routine. Ils sont découverts par échographie chez environ 70% des individus cliniquement en bonne santé. Les nodules thyroïdiens sont quatre fois plus répandus chez les femmes et jusqu'à 90% des cas sont causés par des conditions bénignes.

La principale cible de la gestion clinique des nodules thyroïdiens est l'exclusion de la malignité (4-6,5% de tous les nodules thyroïdiens), l'évaluation des symptômes de pression et l'évaluation du dysfonctionnement thyroïdien.

De nombreux facteurs de risque ont été identifiés liés au développement de nodules thyroïdiens, notamment l'âge avancé, le sexe, l'iode augmenté ou diminué, les antécédents familiaux de cancer ou la polypose et les antécédents de rayonnement de la tête et du cou. Les nodules thyroïdiens les plus courants sont les nodules colloïdes, la thyroïdite de Hashimoto, la thyroïdite subaiguë, les kystes, l'adénome folliculaire et les cancers thyroïdiens.

En ce qui concerne les tumeurs malignes thyroïdiennes, l'incidence du cancer de la thyroïde a augmenté au cours des dernières décennies aux États-Unis et à l'étranger. C'est le 7e cancer le plus courant dans la population générale et le 5e le plus courant chez les femmes. L'incidence du cancer de la thyroïde est environ 3 fois plus élevée chez les femmes que les hommes et augmente de l'adolescence à l'âge mûr avec le sommet d'environ 55 ans chez les femmes et 65 ans chez les hommes puis diminue avec l'âge plus avancé.

L'augmentation du nombre de cas de cancer est causée par une augmentation du diagnostic résultant de l'utilisation généralisée d'outils de diagnostic, notamment l'imagerie par ultrasonographie, la cytologie de l'aspiration à l'aiguille fine, la tomodensitométrie, l'imagerie par résonance magnétique et la tomodensitométrie à la positron fluorodéoxyglucose. En plus de l'augmentation de l'exposition aux facteurs étiologiques comme un rayonnement ionisant pendant l'enfance et l'obésité.

Le carcinome thyroïdien papillaire (PTC) est le type histologique le plus courant de cancers thyroïdiens représentant 90% des cas. Les 10% restants comprennent le carcinome thyroïdien folliculaire 4%, le carcinome à cellules à domicile 2%, le carcinome thyroïdien médullaire 2% et le carcinome thyroïdien anaplasique 1%.

Le pronostic du cancer de la thyroïde est excellent car la plupart des cas sont des carcinomes thyroïdiens papillaires localisés sur la glande thyroïde pendant le diagnostic. Le taux de survie à 5 ans est de 98,6% dans l'ensemble, 99,9% pour la localisation, 98,3% pour la région et 54,9% pour les métastases éloignées.

La cytologie de l'aspiration à l'aiguille fine (FNAC) de la glande thyroïde est un test de diagnostic précis des étalons en or utilisé régulièrement dans l'évaluation initiale des nodules thyroïdiens car il est simple, sûr, rentable et a une précision favorable. La sensibilité et la spécificité du FNAC thyroïdien sont respectivement de 68 à 98% et 56-100% avec les taux d'échec en raison de la technique et de l'expérience de la performance.

Le système Bethesda pour la déclaration de la cytopathologie thyroïdienne (TBSRTC) a été publié pour la première fois en 2010 et mis à jour à plusieurs reprises pour normaliser la terminologie des rapports et pour une meilleure communication entre les cytopathologues et les cliniciens.

Le système Bethesda 2023 pour la déclaration de la cytopathologie thyroïdienne est un système de rapports basé sur des catégories simples pour la cytologie de l'aspiration à l'aiguille fine (FNAC) de la thyroïde et est devenu l'une des méthodes de rapports et de diagnostic les plus utilisées et comprend 6 catégories.

Catégorie (i) non diagnostique avec un risque de tume maligne de 13% (5-20), catégorie (ii) bénin avec 4% (2-7) risque de tumeur maligne, catégorie (iii) atypie de signification sans détermination avec 22% (13-30) risque de maligne, catégorie (IV) Néoplasme folliculaire avec un risque de maligne (VE) avec un malligneny (23-34) Risque de talent, catégorie (VE) pour un mallignement (23-34) Risque de talent, catégorie (VE) pour un malligneny pour un mallignement (23-34) Male 74% (67-83) Risque de malignité et de catégorie (VI) maligne avec un risque de tumeur maligne de 97% (97-100).

La catégorie suspecte de la malignité est utilisée lorsque les caractéristiques cytomorphologiques ne sont pas concluantes et ne soulèvent pas une forte suspicion de malignité, mais sont quantitativement ou qualitativement insuffisantes pour un diagnostic concluant et la gestion habituelle dans ce cas est un test moléculaire, une lobectomie ou une thyroïdectomie totale.

The suspicious for malignancy (SFM) according to Bethesda system category includes suspicious for papillary thyroid carcinoma (SPTC) which is the most common subtype (more than 90%) and less frequently suspicious for non-papillary carcinoma which consists of suspicious for medullary thyroid carcinoma, suspicious for malignant lymphoma, suspicious for poorly differentiated carcinoma and suspicious for malignité non spécifiée autrement.

Sède pour le carcinome de thyroïde papillaire est diagnostiqué en raison de changements nucléaires inégaux (cellules folliculaires sans particularité adjumises avec des cellules présentant une augmentation nucléaire, une pâleur, des rainures et une chromatine fine, une architecture papillaire peu ou absente, des changements nucléaires incomplets (grain de nucléaire généralisé, des étendues nucléaires généralisées, des pâtisseries, des rainures nucléaires et des étendues nucléaires généralisées, une palette et des rainures nucléaires (nucléaires généralisés, un nucléaire généralisé, une palette et des rainures nucléaires, un nucléaire intergulaire généralisé, une palette et des rainures nucléaires étendues ou un nucléaire intergulaire généralisé, une palette et des ruisseaux, un nucléaire préalable (un nucléaire généralisé. pseudoinclusions membranaires et intranucléaires et corps architecture papillaire absents), spécimen de spécimen cellulaire peu cellulaire ou dégénérescence kystique (contexte des débris cystiques et des macrophages, une agrandissement nucléaire et une pâleur, des cellules d'histocytoïdes atypiques avec des victimes papillaire et des psammomaes absentes.

SUSPICIEMENT pour le carcinome de thyroïde papillaire est diagnostiqué dans 2,4 à 8% des résultats de l'aspiration à l'aiguille fine et 60 à 80% d'entre eux sont confirmés dans des spécimens réséqués comme un carcinome thyroïdien papillaire et le reste des cas ont montré des conditions bénignes sous forme de thyroïdite lymphocytique chronique (hymoto thyroïdite) et d'hyperplasie chronique. La thyroïdite de la hashimoto est l'un des facteurs les plus courants dans le diagnostic de carcinome papillaire de la thyroïde faussement positif en raison du fort chevauchement des caractéristiques morphologiques entre eux.

SUSPICANT pour le diagnostic de carcinome thyroïdien papillaire est déroutant pour les chirurgiens et les patients et rend la décision chirurgicale optimale difficile car la prévalence de la malignité dans cette catégorie de diagnostic est élevée. Certains chirurgiens procèdent à la thyroïdectomie totale et cela fait qu'environ 25% des patients (cas de faux positifs) peuvent souffrir de sursurgation et ont besoin d'une hormonothérapie de remplacement pour la vie. De nombreux essais ont été effectués pour augmenter la précision de la détection de la malignité dans cette catégorie et diminuer la possibilité de sureservation. Certains auteurs ont appliqué des critères d'échographie détaillés pour les cas diagnostiqués cytologiquement comme suspects pour le carcinome de thyroïde papillaire et ont signalé une augmentation de la précision de 86% à 94% tandis que d'autres ont effectué une section congelée peropératoire et des tests auxiliaires comme marqueurs moléculaires.

L'analyse cytomorphométrique est utilisée comme outil de diagnostic clinique et discutée dans la littérature depuis plus de 30 ans. Il a été utilisé dans de nombreux organes comme le nasopharynx, la peau, la vessie, le côlon, le sein et la thyroïde. La morphométrie est une procédure informatisée effectuée par l'analyse quantitative des caractéristiques géométriques des structures avec n'importe quelle dimension. La morphométrie nucléaire des noyaux malins, y compris la taille, la forme et le modèle de chromatine, est différente de celle des noyaux cellulaires non malignes, ce qui permet à la morphométrie nucléaire de distinguer les cas bénins et malins. En utilisant la morphométrie nucléaire, nous pouvons quantifier un certain nombre de paramètres tels que ceux liés à la taille et à la forme nucléaires.

La morphométrie peut aider en tant que caractéristiques morphologiques complémentaires dans les lésions thyroïdiennes lorsqu'elles sont correctement appliquées avec des coupures appropriées. Jusqu'à présent, la majorité des études d'analyse d'images ont été réalisées sur des sections histopathologiques et seules quelques études réalisées sur les frottis cytologiques. Il a été suggéré que les paramètres morphométriques nucléaires tels que la surface nucléaire et le périmètre et les facteurs de forme peuvent permettre la différenciation entre les lésions thyroïdiennes. L'application de la morphométrie à la cytologie serait utile à des fins de dépistage morphométrique automatisé ainsi que un diagnostic précis des tumeurs thyroïdiennes.

L'étude morphométrique informatisée des lames histologiques thyroïdiennes a identifié des paramètres morphométriques efficaces qui distinguent les différences entre les cellules épithéliales bénignes et malignes et les paramètres les plus fiables sont la zone, le périmètre, la longueur, la largeur, le degré de rondeur et d'irrégularité des membranes nucléaires.

Une étude a révélé que l'analyse d'image cytomorphométrique avec cytomorphologie a le potentiel de distinguer non seulement le néoplasme folliculaire bénin / suspect pour un néoplasme folliculaire, des lésions thyroïdiennes maligne Carcinome folliculaire.

De nombreuses études analytiques moléculaires ont prouvé que la plupart des carcinomes thyroïdiens papillaires sont causés par deux mécanismes de signalisation distincts de la voie MAPK (protéine kinase activée par un mitogène), de type BRAF ou de Ras.

La mutation génétique la plus courante dans le carcinome thyroïdien papillaire (60%) est une mutation faux-sens dans le BRAF Oncogène, la valine (V) substituant l'acide glutamique (E) en position d'acide aminé 600, qui entraîne enfin la signalisation de la voie de la protéine kinase activée par un mitogène.

Une revue systématique et une méta-analyse ont montré que le taux de récidive dans les carcinomes thyroïdiens papillaires mutés BRAFV600E (24,9%) était deux fois élevé en tant que carcinomes thyroïdiens papillaires de type sauvage (12,6%). Les PTC mutés BRAFV600E présentent plus de risque de métastase ganglionnaire, d'extension extrathyroïdienne et associée à un stade avancé AJCC III / IV.

L'accès aux tests moléculaires a facilité l'utilisation d'agents thérapeutiques ciblant des mutations spécifiques comme BRAFV600E.

La mutation BRAFV600E est très courante dans le carcinome thyroïdien papillaire (38-90% d'incidence) et rarement présente dans les lésions thyroïdiennes bénignes afin que sa spécificité diagnostique soit élevée. Il conduit à une activation anormale de la voie de la protéine kinase activée par le mitogène qui joue un rôle important dans le développement du carcinome thyroïdien papillaire. Il a été signalé que la cytologie de l'aspiration à l'aiguille fine combinée à la détection préopératoire de mutation BRAFV600E peut améliorer les performances diagnostiques des nodules thyroïdiens par rapport à la cytologie de l'aspiration à l'aiguille fine seule.

La sensibilité et la spécificité des tests de mutation BRAFV600E seules pour le carcinome thyroïdien papillaire étaient respectivement de 76,71% et 100% et ont augmenté à 96,62% et 88,03% respectivement lorsqu'ils sont combinés avec la cytologie. Ainsi, la combinaison entre les tests de mutation de l'aspiration à l'aiguille fine et les tests de mutation BRAFV600E a diminué les faux négatifs du diagnostic de carcinome thyroïdien papillaire.

Objectif de l'étude:

• Évaluer le risque de malignité dans le TNS diagnostiqué comme SPTC par FNAC.
• Pour caractériser les différents paramètres morphométriques dans les cas diagnostiqués cytologiquement sous forme de SPTC.
• Évaluer l'expression immunocytochimique de BRAFV600E dans les cas diagnostiqués cytologiquement sous forme de SPTC.
• Évaluer l'utilité de l'analyse cytomorphométrique et de la colmunie immunitaire BRAFV600E seule ou en combinaison dans la mise à niveau de la précision diagnostique des cas de SPTC.

Matériel et méthodes:

Une étude descriptive rétrospective sera réalisée sur les frottis FNA des nodules thyroïdiens reçus au Département de pathologie de l'hôpital universitaire Assiut sur une période de six ans (2018-2025). L'étude examinera le papanicolaou (PAP) et l'hématoxyline et l'éosine (H&E) tachées de frottis de 45 patients atteints de nodules thyroïdiens diagnostiqués comme suspects pour le carcinome thyroïdien papillaire (Bethesda V), combiné avec les données histopathologiques de leurs spécimens thyroïdiens réséqués.

Critères d'inclusion:

Seuls Papanicolaou (PAP) et l'hématoxyline et l'éosine (H&E) ont coloré les frottis FNAC avec une morphologie nucléaire bien conservée diagnostiquée comme suspecte pour le carcinome thyroïdien papillaire seront incluses dans l'étude.

Critères d'exclusion:

• Les frottis FNAC dépourvus de confirmation histopathologique.
• Fracture avec un chevauchement nucléaire étendu et une mauvaise morphologie.
• Frache des étalages par l'inflammation, le sang ou les matières mucoïdes.
• Frottis présentant des changements dégénératifs cellulaires ou des artefacts de séchage.
• Tout patient avec des données manquantes. Toutes les données cliniques, radiologiques et pathologiques seront collectées dans les dossiers médicaux.

Des données personnelles, notamment l'âge et le sexe, les données cliniques en tant que nombre de nodules thyroïdiens et leur taille et la présence ou l'absence d'agrandissement des ganglions lymphatiques cervicaux et les symptômes de pression et les données radiologiques en tant que rapport d'imagerie thyroïdienne et de données de données (TI-RADS) qui incluent la composition, l'échogénicité, la forme, la marge et les foyers d'échogène ponctués seront collectés.

Étude morphométrique:

Pour chaque cas, 50 noyaux des cellules folliculaires dans le groupe cellulaire suspect, avec une morphologie bien conservée, seront sélectionnés. Les noyaux qui présenteront un chevauchement, seront masqués par l'inflammation, le sang ou la mucine, ou afficheront des changements dégénératifs seront exclus. La préférence sera donnée à des noyaux isolés ou à ceux qui se touchent simplement sans chevaucher avec un fond propre. Chaque noyau sélectionné axé sur l'utilisation d'une lentille d'objectif d'immersion d'huile 1000x sera imaginé à l'aide d'un appareil photo numérique et sera analysé avec un logiciel d'analyse d'image. Le logiciel attribuera un nombre spécifique à chaque noyau de l'image et quantifiera ses paramètres morphométriques.

Étude immunocytochimique:

L'immunocytochimie BRAFV600E sera appliquée sur les frottis après les avoir détruits.

Les frottis seront colorés avec des anticorps BRAFV600E avec coloration à l'immunoperoxydase comme méthode de visualisation.

La dilution des anticorps et le temps d'incubation seront effectués conformément aux instructions du fabricant.

La corrélation entre les résultats des études cytomorphométriques, les résultats des tests de mutation BRAFV600E et les résultats des lames histopathologiques seront effectués.