Tutkimus biologisista, geneettisistä ja perustuslaillisista tekijöistä sekä ei-invasiivisesta seurannasta henkilökohtaisten syöpäriskien arvioimiseksi (PRO-ACTIVE)

Havainnointitutkimus koostuu retrospektiivisestä ja prospektiivisesta osiosta.

Retrospektiiviseen osioon valitaan 400 potilasta, joilla on rintakasvaimia ja jotka on leikattu vuosien 2000 ja 2015 välisenä aikana. Näistä 200 on perinnöllisiä rintakasvaimia ja 200 ei-perinnöllisiä rintakasvaimia, joilla on seuraavat kliiniset, morfologiset ja molekyyliluokkaominaisuudet (luminaali A ja B, kolmoisnegatiiviset) sekä vertailukelpoiset vaikeusasteet.

Kasvainkudosta tutkitaan immunosytokemiallisilla menetelmillä seuraavien parametrien osalta: angiogeneesi (CD31), fibroblastit (CD34 ja vimentiini), makrofagit (CD68) ja kasvainiin liittyvät makrofagit (M1: CD11c; M2: CD163); plasmasolut (CD138), T-lymfosyytit (CD8); mastosyytit (CD117).

Tiedot korreloidaan ennusteen ja perinnöllisen rintasyövän kehittymisriskin kanssa.

Prospektiivinen osio puolestaan käsittää erilaisten potilasryhmien rekrytoinnin, jotka ensisijaisesti seulotaan WP1:ssä.

Arvioidaan 600 potilasta, joilla tiedetään olevan rintasyöpä (N=200), munasarjasyöpä (N=200) ja paksusuolen syöpä (N=200), jotka ovat ehdokkaita siittiösukusolujen geneettiseen testaukseen onkogeenisessä neuvottelussa. Potilaat valitaan ennen leikkausta, ja jos he suostuvat osallistumaan tutkimukseen, he allekirjoittavat tietoon perustuvan suostumuksen onkogeneettisessä neuvontaympäristössä.

Valitut potilaat käyvät verinäytteenoton läpi (5 ml EDTA-putkissa) nukleiinihappojen (DNA ja RNA) eristämiseksi.

Siittiösukusolujen geneettisen testauksen tuloksen perusteella potilaat luokitellaan kolmeen ryhmään:

• RYHMÄ 2A, perinnöllistä periytymistä omaavat henkilöt (probandit): oletetaan noin 10 %:n (N=60) probandien tunnistaminen 600 tutkitun henkilön joukosta (20 kullekin patologialle).
• RYHMÄ 2B, geneettisen neuvonnan perusteella tunnistetut henkilöt, joilla on riski olla perinnöllisen kasvainoireyhtymän kantajia, mutta joita geneettiset testit eivät ole osoittaneet: 60 henkilön populaatio, 20 kullekin kasvaintyypille, joilla on samanlaiset kliiniset ikä- ja fenotyyppiominaisuudet verrattuna ryhmään 2A.
• RYHMÄ 2C, edelleen alaryhmä potilaita (N=150), 50 kullekin kasvaintyypille, joilla on negatiiviset tulokset diagnoosigeneettisessä analyysissä. Valituissa potilaissa ryhmässä 2C DNA/RNA analysoidaan syypäisten geneettisten varianttien tunnistamiseksi geeneissä, jotka ovat jääneet rutiinidiagnoositutkimuksen ulkopuolelle.

Lisäksi valitaan toinen potilasryhmä, RYHMÄ 3, joka sisältää 250 potilasta, jotka käyvät radikaalin kirurgisen hoidon läpi ja joilla on seuraavat ominaisuudet:

• paikallisesti edistynyt rintasyöpä kolmoisnegatiivisella fenotyypillä tai lobulaarisella histologialla (N=50);
• korkea-asteinen seroosinen munasarjasyöpä (N=50);
• vaihe III melanoma (N=50);
• vaihe IIB ja IIIA ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (N=50);
• paksusuolen syöpä, jossa on imusolmukkeiden ja verisuonten tunkeutuminen (N=50).

RYHMIIN 2A, 2B ja 3 rekrytoidut potilaat käyvät seuraavien verinäytteiden ottojen läpi WP2:lle:

• 20 ml Cell-Free DNA BCT® CE -putkissa (Streck) ctDNA-analyysiä varten. Näytteet sentrifugoidaan 1600 (±150) g:n voimalla 10 minuuttia huoneenlämmössä. Sentrifugoinnin jälkeen plasmaa sentrifugoidaan edelleen 10 minuuttia 3000 (±150) g:n voimalla.
• 20 ml Cell Save -putkissa CTC:iden eristämiseksi.
• 30 ml kiertävien immuunipopulaatioiden tutkimusta varten (WP3). Lisäksi kirurgisen vaiheen aikana otettu kasvainkudos kerätään ja analysoidaan WP4:ssä sekä mikroympäristön tutkimuksessa "Next Generation Sequencing" -tekniikoilla, joita sovelletaan kasvainiin kokonaisuutena ja yksittäisten solujen tasolla sekä immuunipopulaatioihin (TILs).