Eine Studie zu biologischen, genetischen und konstitutionellen Faktoren sowie nicht-invasivem Monitoring zur Bewertung persönlicher Krebsrisiken (PRO-ACTIVE)

Die Beobachtungsstudie besteht aus einem retrospektiven und einem prospektiven Teil.

Für den retrospektiven Teil werden 400 Patientinnen mit Brusttumoren, die zwischen 2000 und 2015 operiert wurden, ausgewählt, davon 200 mit erblichen Brusttumoren und 200 mit nicht-erblichen Brusttumoren und mit den folgenden klinischen, morphologischen und molekularen Klassenmerkmalen (luminal A und B, triple negative) und vergleichbaren Stadien.

Das Tumorgewebe wird immunzytochemischen Untersuchungen unterzogen, um folgende Parameter zu untersuchen: Angiogenese (CD31), Fibroblasten (CD34 und Vimentin), Makrophagen (CD68) und tumorassoziierte Makrophagen (M1: CD11c; M2: CD163); Plasmazellen (CD138), T-Lymphozyten (CD8); Mastzellen (CD117).

Die Daten werden mit der Prognose und dem Risiko für die Entwicklung eines erblichen Brustkrebses korreliert.

Der prospektive Teil sieht hingegen die Rekrutierung verschiedener Kohorten von Patientinnen vor, die zunächst in WP1 gescreent werden.

600 Patientinnen, die für Brustkrebs (N=200), Eierstockkrebs (N=200) und Darmkrebs (N=200) bekannt sind und Kandidatinnen für eine Keimbahn-Gentestung im Rahmen einer onkogenetischen Beratung sind, werden bewertet. Die Patientinnen werden vor der Operation ausgewählt und, wenn sie der Teilnahme an der Studie zustimmen, werden sie die Einwilligungserklärung im Rahmen einer onkogenetischen Beratung unterzeichnen.

Die ausgewählten Patientinnen unterziehen sich einer Blutentnahme (5 ml in EDTA-Röhrchen) zur Extraktion von Nukleinsäuren (DNA und RNA).

Basierend auf dem Ergebnis der Keimbahn-Gentestung werden die Patientinnen in 3 Kohorten eingeteilt:

• KOHORTE 2A, Personen mit erblicher Veranlagung (Probanden): Es wird angenommen, dass etwa 10 % (N=60) der Probanden aus 600 untersuchten Personen (20 pro Pathologie) identifiziert werden.
• KOHORTE 2B, Personen, die durch genetische Beratung als Risikoträger für ein erbliches neoplastisches Syndrom identifiziert wurden, jedoch nicht durch Gentests bestätigt: eine Population von 60 Personen, 20 für jeden Tumortyp, mit ähnlichen klinischen Merkmalen wie Alter und Phänotyp im Vergleich zu Kohorte 2A.
• KOHORTE 2C, eine weitere Untergruppe von Patientinnen (N=150), 50 für jeden Tumortyp, mit negativen Ergebnissen in der diagnostischen genetischen Analyse. Bei ausgewählten Patientinnen in Kohorte 2C wird die DNA/RNA zur Identifizierung kausaler genetischer Varianten in Genen analysiert, die der routinemäßigen diagnostischen Untersuchung entgangen sind.

Darüber hinaus wird eine weitere Kohorte von Patientinnen ausgewählt, KOHORTE 3, die 250 Patientinnen umfasst, die sich einer radikalen chirurgischen Behandlung unterziehen und folgende Merkmale aufweisen:

• lokal fortgeschrittener Brustkrebs mit triple-negativem Phänotyp oder lobulärer Histologie (N=50);
• hochgradiges seröses Ovarialkarzinom (N=50);
• Melanom im Stadium III (N=50);
• nicht-kleinzelliger Lungenkrebs im Stadium IIB und IIIA (N=50);
• Darmkrebs mit Lymphknotenbefall und Gefäßinvasion (N=50).

Patientinnen, die in KOHORTEN 2A, 2B und 3 aufgenommen wurden, unterziehen sich den folgenden Blutentnahmen für WP2:

• 20 ml in Cell-Free DNA BCT® CE-Röhrchen (Streck) zur ctDNA-Analyse. Die Proben werden bei 1600 (±150) g für 10 Minuten bei Raumtemperatur zentrifugiert. Nach der Zentrifugation wird das Plasma einer weiteren Zentrifugation für 10 Minuten bei 3000 (±150) g unterzogen.
• 20 ml in Cell Save-Röhrchen zur Isolierung von CTCs.
• 30 ml für die Untersuchung zirkulierender Immunpopulationen (WP3). Darüber hinaus wird das während der chirurgischen Phase entnommene Tumorgewebe gesammelt und in WP4 sowie für die Untersuchung des Mikroumfelds mit "Next Generation Sequencing"-Techniken analysiert, die auf den Tumor als Ganzes und auf Einzelzellebene sowie auf die Immunpopulationen (TILs) angewendet werden.