Uno studio sui fattori biologici, genetici e costituzionali e sul monitoraggio non invasivo per valutare i rischi personali di cancro (PRO-ACTIVE)

Lo studio osservazionale è composto da una parte retrospettiva e una prospettiva.

Per la parte retrospettiva verranno selezionati 400 pazienti con tumori al seno operati tra il 2000 e il 2015, di cui 200 con tumori al seno ereditari e 200 con tumori al seno non ereditari e con le seguenti caratteristiche cliniche, morfologiche e di classe molecolare (luminale A e B, tripli negativi) e stadiazione comparabile.

Il tessuto tumorale sarà sottoposto a indagini immunocitochimiche per studiare i seguenti parametri: angiogenesi (CD31), fibroblasti (CD34 e vimentina), macrofagi (CD68) e macrofagi associati al tumore (M1: CD11c; M2: CD163); plasmacellule (CD138), linfociti T (CD8); mastociti (CD117).

I dati saranno correlati con la prognosi e con il rischio di sviluppare cancro al seno ereditario.

La parte prospettica, invece, prevede l'arruolamento di diverse coorti di pazienti inizialmente sottoposti a screening nel WP1.

Verranno valutati 600 pazienti noti per cancro al seno (N=200), cancro ovarico (N=200) e cancro del colon-retto (N=200) candidati a test genetici germinali nel contesto di una consulenza oncogenetica. I pazienti saranno selezionati prima dell'intervento chirurgico e, se accettano di partecipare allo studio, firmeranno il consenso informato in un contesto di consulenza oncogenetica.

I pazienti selezionati saranno sottoposti a prelievo di sangue (5 ml in provette EDTA) per l'estrazione di acidi nucleici (DNA e RNA).

Sulla base del risultato del test genetico germinale, i pazienti saranno classificati in 3 coorti:

• COORTE 2A, soggetti con eredità ereditaria (probandi): si prevede l'identificazione di circa il 10% (N=60) di probandi su 600 soggetti esaminati (20 per patologia).
• COORTE 2B, soggetti identificati dalla consulenza genetica come a rischio di essere portatori di una sindrome neoplastica ereditaria, non dimostrata da test genetici: una popolazione di 60 soggetti, 20 per ciascun tipo di tumore, con caratteristiche cliniche simili di età e fenotipo rispetto alla coorte 2A.
• COORTE 2C, un ulteriore sottogruppo di pazienti (N=150), 50 per ciascun tipo di tumore, con risultati negativi nell'analisi genetica diagnostica. Nei pazienti selezionati della coorte 2C, il DNA/RNA sarà analizzato per l'identificazione di varianti genetiche causali in geni sfuggiti all'indagine diagnostica di routine.

Inoltre, sarà selezionata un'ulteriore coorte di pazienti, COORTE 3, che include 250 pazienti sottoposti a trattamento chirurgico radicale e con le seguenti caratteristiche:

• cancro al seno localmente avanzato con fenotipo triplo negativo o con istologia lobulare (N=50);
• carcinoma ovarico sieroso di alto grado (N=50);
• melanoma di stadio III (N=50);
• cancro polmonare non a piccole cellule di stadio IIB e IIIA (N=50);
• cancro del colon con coinvolgimento linfonodale e invasione vascolare (N=50).

I pazienti arruolati nelle COORTI 2A, 2B e 3 saranno sottoposti ai seguenti prelievi di sangue per il WP2:

• 20 ml in provette Cell-Free DNA BCT® CE (Streck) per l'analisi del ctDNA. I campioni vengono centrifugati a 1600 (±150) g per 10 minuti a temperatura ambiente. Dopo la centrifugazione, il plasma viene sottoposto a un'ulteriore centrifugazione per 10 minuti a 3000 (±150) g.
• 20 ml in provette Cell Save per l'isolamento delle CTC.
• 30 ml per lo studio delle popolazioni immunitarie circolanti (WP3). Inoltre, il tessuto tumorale prelevato durante la fase chirurgica sarà raccolto e analizzato nel WP4 e per lo studio del microambiente con tecniche di "Next Generation Sequencing" applicate al tumore nel suo insieme e a livello di singola cellula e alle popolazioni immunitarie (TIL).