Un estudio de factores biológicos, genéticos y constitucionales y monitorización no invasiva para evaluar riesgos personales de cáncer (PRO-ACTIVE)

El estudio observacional consta de una parte retrospectiva y una prospectiva.

Para la parte retrospectiva, se seleccionarán 400 pacientes con tumores mamarios operados entre 2000 y 2015, de los cuales 200 con tumores mamarios hereditarios y 200 con tumores mamarios no hereditarios y con las siguientes características clínicas, morfológicas y de clase molecular (luminal A y B, triple negativos) y estadificación comparable.

El tejido tumoral se someterá a investigaciones inmunocitoquímicas para estudiar los siguientes parámetros: angiogénesis (CD31), fibroblastos (CD34 y vimentina), macrófagos (CD68) y macrófagos asociados a tumores (M1: CD11c; M2: CD163); células plasmáticas (CD138), linfocitos T (CD8); mastocitos (CD117).

Los datos se correlacionarán con el pronóstico y con el riesgo de desarrollar cáncer de mama hereditario.

La parte prospectiva, por otro lado, prevé la inscripción de diferentes cohortes de pacientes que son inicialmente evaluados en el WP1.

Se evaluarán 600 pacientes conocidos por cáncer de mama (N=200), cáncer de ovario (N=200) y cáncer colorrectal (N=200) candidatos a pruebas genéticas de línea germinal en el contexto de una consulta oncológica. Los pacientes serán seleccionados antes de la cirugía y, si aceptan participar en el estudio, firmarán el consentimiento informado en un contexto de consulta de oncogenética.

Los pacientes seleccionados se someterán a una extracción de sangre (5 ml en tubos EDTA) para la extracción de ácidos nucleicos (ADN y ARN).

Según el resultado de las pruebas genéticas de línea germinal, los pacientes se clasificarán en 3 cohortes:

• COHORTE 2A, sujetos con herencia hereditaria (probandos): se asume la identificación de aproximadamente el 10% (N=60) de probandos de los 600 sujetos examinados (20 por patología).
• COHORTE 2B, sujetos identificados por asesoramiento genético como en riesgo de ser portadores de un síndrome neoplásico hereditario, no probado por pruebas genéticas: una población de 60 sujetos, 20 por cada tipo de tumor, con características clínicas similares de edad y fenotipo en comparación con la cohorte 2A.
• COHORTE 2C, un subgrupo adicional de pacientes (N=150), 50 por cada tipo de tumor, con resultados negativos en el análisis genético diagnóstico. En los pacientes seleccionados de la cohorte 2C, se analizará el ADN/ARN para la identificación de variantes genéticas causales en genes que hayan escapado a la investigación diagnóstica rutinaria.

Además, se seleccionará una cohorte adicional de pacientes, COHORTE 3, que incluye 250 pacientes sometidos a tratamiento quirúrgico radical y con las siguientes características:

• cáncer de mama localmente avanzado con fenotipo triple negativo o con histología lobular (N=50);
• carcinoma seroso de alto grado de ovario (N=50);
• melanoma en estadio III (N=50);
• cáncer de pulmón no microcítico en estadio IIB y IIIA (N=50);
• cáncer de colon con afectación ganglionar e invasión vascular (N=50).

Los pacientes inscritos en las COHORTES 2A, 2B y 3 se someterán a las siguientes extracciones de sangre para el WP2:

• 20 ml en tubos Cell-Free DNA BCT® CE (Streck) para análisis de ctDNA. Las muestras se centrifugan a 1600 (±150) g durante 10 minutos a temperatura ambiente. Después de la centrifugación, el plasma se somete a una centrifugación adicional durante 10 minutos a 3000 (±150) g.
• 20 ml en tubos Cell Save para el aislamiento de CTCs.
• 30 ml para el estudio de poblaciones inmunes circulantes (WP3). Además, se recogerá y analizará el tejido tumoral tomado durante la fase quirúrgica en el WP4 y para el estudio del microambiente con técnicas de "Secuenciación de Nueva Generación" aplicadas al tumor en su conjunto y a nivel de célula única y a las poblaciones inmunes (TILs).