Studie biologických, genetických a konstitučních faktorů a neinvazivního monitorování k posouzení osobních rizik rakoviny (PRO-ACTIVE)

Observační studie se skládá z retrospektivní a prospektivní části.

Pro retrospektivní část bude vybráno 400 pacientů s nádory prsu operovaných v letech 2000 až 2015, z toho 200 s hereditárními nádory prsu a 200 s nehereditárními nádory prsu a s následujícími klinickými, morfologickými a molekulárními třídními charakteristikami (luminální A a B, triple negativní) a porovnatelným stádiem.

Nádorová tkáň bude podrobena imunocytochemickým vyšetřením ke studiu následujících parametrů: angiogeneze (CD31), fibroblasty (CD34 a vimentin), makrofágy (CD68) a nádorem asociované makrofágy (M1: CD11c; M2: CD163); plazmatické buňky (CD138), T lymfocyty (CD8); žírné buňky (CD117).

Data budou korelována s prognózou a s rizikem vzniku hereditárního karcinomu prsu.

Prospektivní část naopak předpokládá zařazení různých kohort pacientů, kteří jsou nejprve vyšetřeni v WP1.

Bude vyhodnoceno 600 pacientů známých pro karcinom prsu (N=200), ovariální karcinom (N=200) a kolorektální karcinom (N=200) kandidátů na germinální genetické testování v rámci onkogenetické konzultace. Pacienti budou vybráni před operací a pokud souhlasí s účastí ve studii, podepíší informovaný souhlas v kontextu onkogenetické konzultace.

Vybraní pacienti podstoupí odběr krve (5 ml do zkumavek s EDTA) pro extrakci nukleových kyselin (DNA a RNA).

Na základě výsledku germinálního genetického testování budou pacienti zařazeni do 3 kohort:

• KOHORTA 2A, subjekty s hereditární dědičností (probandi): předpokládá se identifikace přibližně 10 % (N=60) probandů z 600 vyšetřených subjektů (20 pro každou patologii).
• KOHORTA 2B, subjekty identifikované genetickým poradenstvím jako rizikové pro přenašečství hereditárního neoplastického syndromu, neprokázané genetickými testy: populace 60 subjektů, 20 pro každý typ nádoru, s podobnými klinickými charakteristikami věku a fenotypu ve srovnání s kohortou 2A.
• KOHORTA 2C, další podskupina pacientů (N=150), 50 pro každý typ nádoru, s negativními výsledky v diagnostické genetické analýze. U vybraných pacientů v kohortě 2C bude DNA/RNA analyzována pro identifikaci kauzálních genetických variant v genech, které unikly rutinní diagnostické investigaci.

Dále bude vybrána další kohorta pacientů, KOHORTA 3, která zahrnuje 250 pacientů podstupujících radikální chirurgickou léčbu a s následujícími charakteristikami:

• lokalně pokročilý karcinom prsu s triple negativním fenotypem nebo s lobulární histologií (N=50);
• vysoce maligní serózní ovariální karcinom (N=50);
• melanom stádia III (N=50);
• nemalobuněčný karcinom plic stádia IIB a IIIA (N=50);
• kolorektální karcinom s postižením lymfatických uzlin a vaskulární invazí (N=50).

Pacienti zařazení do KOHORT 2A, 2B a 3 podstoupí následující odběry krve pro WP2:

• 20 ml do zkumavek Cell-Free DNA BCT® CE (Streck) pro analýzu ctDNA. Vzorky jsou centrifugovány při 1600 (±150) g po dobu 10 minut při pokojové teplotě. Po centrifugaci je plazma podrobena další centrifugaci po dobu 10 minut při 3000 (±150) g.
• 20 ml do zkumavek Cell Save pro izolaci CTC.
• 30 ml pro studium cirkulujících imunitních populací (WP3). Dále bude sbírána a analyzována nádorová tkáň odebraná během chirurgické fáze v WP4 a pro studium mikroprostředí s technikami "Next Generation Sequencing" aplikovanými na nádor jako celek a na úrovni jednotlivých buněk a na imunitní populace (TILs).