Transplantation allogénique de cellules souches dans la LMC avec déplétion partielle des lymphocytes T

Les patients ont été conditionnés avec du busulfan oral 12 mg/kg (jours -6 à -4), du cyclophosphamide 120 mg/kg (jours -3, -2), de la globuline antithymocytaire de lapin (Fresenius, Bad Hamburg, Allemagne) 25 mg/kg (jours -5 à -1) et fludarabine 200 mg/kg (jours -7 à -3). La dose finale de busulfan a été déterminée individuellement sur la base des mesures des taux sériques de busulfan avec une dose cible de 850-1400 microM x minute.

Les greffes ont été réalisées dans des chambres d'isolement inversées équipées de systèmes de filtration d'air particulaire à haute efficacité (HEPA). Aucune prophylaxie post-transplantation GvHD n'a été administrée. La prophylaxie de l'infection post-greffe consistait en acyclovir, itraconazole, triméthoprime-sulfaméthoxazole et pénicilline VK. Le statut du cytomégalovirus (CMV) a été déterminé chaque semaine par PCR pour l'ADN du CMV et l'antigénémie pp65 dans les leucocytes sanguins, suivi d'une administration préventive de ganciclovir en cas de résultat positif.

Donneurs Les donneurs étaient des frères et sœurs compatibles sérologiquement avec l'antigène leucocytaire humain (HLA) A, B, C et les frères et sœurs moléculairement compatibles DR et DQ. Les cellules souches du donneur ont été recueillies après mobilisation avec 10 µg/kg/jour de G-CSF, administrés par voie sous-cutanée pendant 5 jours consécutifs. Les cellules CD34 ont été sélectionnées positivement à l'aide d'un anticorps anti-CD34 conjugué à des microbilles de fer-dextrane à l'aide du dispositif CliniMACS (Miltenyi Biotech, Bergisch Gladbach, Allemagne) dans le but de collecter > 5,0 x 106 cellules CD34/kg.

Surveillance de la maladie Après la greffe, tous les patients étaient sous surveillance étroite pour la présence d'une maladie résiduelle minimale (MRM) en utilisant l'analyse cytogénétique et la PCR pour la détection des transcrits BCR/ABL. Des échantillons de moelle osseuse et de sang périphérique ont été examinés tous les 3 mois la première année après la greffe et tous les 3 à 6 mois les années suivantes.

Méthode PCR : la RQ-PCR a été réalisée conformément au protocole Europe Against Cancer (EAC).19 Les nombres de copies BCR-ABL et ABL ont été calculés par comparaison avec la courbe standard générée à l'aide des standards IPSOGEN FusionQuant. Les résultats de la quantification des transcrits BCR-ABL ont été exprimés en pourcentages par rapport aux transcrits ABL totaux.

Un nombre minimum de 1x104 copies d'ABL est la limite inférieure en dessous de laquelle une RT-PCR négative était considérée comme non fiable. Dans le laboratoire de biologie moléculaire du Rambam Health Care Campus, la sensibilité pour la Q-PCR quantitative est de (10-5).

Perfusion de leucocytes du donneur (DLI). Le DLI a été administré selon un schéma posologique croissant à partir de 3 x 106 cellules/kg suivi si nécessaire de 1 x 107 cellules/kg, 5 x 107 cellules/kg et 1 x 108 cellules/kg.

Le DLI a été utilisé en cas de persistance/réapparition des transcrits BCR-ABL à partir de 6 mois après la greffe. Dans les cas où plus d'un DLI a été administré, la dose croissante successive a été administrée à des intervalles ≥ 3 mois, comme dicté par le suivi du MRD.