Trapianto di cellule staminali allogeniche nella LMC con deplezione parziale delle cellule T

I pazienti sono stati condizionati con busulfano orale 12 mg/kg (giorni da -6 a -4), ciclofosfamide 120 mg/kg (giorni -3, -2), globulina antitimocitica di coniglio, (Fresenius, Bad Hamburg, Germania) 25 mg/kg (giorni -5 a -1) e fludarabina 200 mg/kg (giorni da -7 a -3). La dose finale di busulfan è stata determinata individualmente sulla base delle misurazioni dei livelli sierici di busulfan con una dose target di 850-1400 microM x minuto.

I trapianti sono stati eseguiti in stanze di isolamento inverso dotate di sistemi di filtrazione dell'aria particellare ad alta efficienza (HEPA). Non è stata somministrata alcuna profilassi GvHD post-trapianto. La profilassi dell'infezione post-trapianto consisteva in aciclovir, itraconazolo, trimetoprim-sulfametossazolo e penicillina VK. Lo stato del citomegalovirus (CMV) è stato determinato settimanalmente mediante PCR per CMV-DNA e antigenemia pp65 nei leucociti del sangue, seguita dalla somministrazione preventiva di ganciclovir quando positivo.

Donatori I donatori erano antigeni leucocitari umani (HLA) A, B, C abbinati sierologicamente e fratelli DR e DQ abbinati molecolarmente. Le cellule staminali del donatore sono state raccolte dopo la mobilizzazione con 10 µg/kg/die di G-CSF, somministrate per via sottocutanea per 5 giorni consecutivi. Le cellule CD34 sono state selezionate positivamente utilizzando anticorpi anti-CD34 coniugati a microsfere di ferro-destrano utilizzando il dispositivo CliniMACS (Miltenyi Biotech, Bergisch Gladbach, Germania) con l'obiettivo di raccogliere> 5,0 x 106 cellule CD34 / kg.

Monitoraggio della malattia Dopo il trapianto, tutti i pazienti erano sotto stretta sorveglianza per la presenza di malattia residua minima (MRD) mediante analisi citogenetiche e PCR per la rilevazione dei trascritti BCR/ABL. I campioni di midollo osseo e sangue periferico sono stati esaminati ogni 3 mesi nel primo anno post trapianto e ogni 3-6 mesi negli anni successivi.

Metodo PCR: la RQ-PCR è stata eseguita secondo il protocollo Europe Against Cancer (EAC).19 I numeri di copie BCR-ABL e ABL sono stati calcolati confrontandoli con la curva standard generata utilizzando gli standard IPSOGEN FusionQuant. I risultati della quantificazione delle trascrizioni BCR-ABL sono stati espressi come rapporti percentuali rispetto alle trascrizioni ABL totali.

Un numero minimo di 1x104 copie di ABL è il limite inferiore al di sotto del quale una RT-PCR negativa è stata considerata inaffidabile. Nel laboratorio di biologia molecolare del Rambam Health Care Campus la sensibilità per la Q-PCR quantitativa è (10-5).

Infusione di leucociti del donatore (DLI). Il DLI è stato somministrato in un regime di dosaggio crescente a partire da 3 x 106 cellule/kg seguito, se necessario, da 1 x 107 cellule/kg, 5 x 107 cellule/kg e 1 x 108 cellule/kg.

Il DLI è stato utilizzato in caso di persistenza/ricomparsa di trascritti BCR-ABL a partire da 6 mesi dopo il trapianto in poi. Nei casi in cui è stata somministrata più di 1 DLI, la successiva dose aumentata è stata somministrata a intervalli ≥ 3 mesi come dettato dal follow-up della MRD.