Alogenní transplantace kmenových buněk u CML s částečnou deplecí T buněk

Pacienti byli kondiciováni perorálním busulfanem 12 mg/kg (dny -6 až -4), cyklofosfamidem 120 mg/kg (dny -3,-2), králičím antithymocytárním globulinem (Fresenius, Bad Hamburg, Německo) 25 mg/kg (dny -5 až -1) a fludarabin 200 mg/kg (dny -7 až -3). Konečná dávka busulfanu byla individuálně stanovena na základě měření hladin busulfanu v séru s cílovou dávkou 850-1400 mikroM x minutu.

Transplantace byly prováděny v reverzních izolačních místnostech vybavených vysoce účinnými systémy filtrace vzduchu částic (HEPA). Nebyla podána žádná potransplantační profylaxe GvHD. Potransplantační profylaxe infekce sestávala z acykloviru, itrakonazolu, trimethoprim-sulfamethoxazolu a penicilinu VK. Stav cytomegaloviru (CMV) byl stanovován týdně pomocí PCR pro CMV-DNA a antigenémii pp65 v krevních leukocytech, s následným preemptivním podáním gancikloviru, když byl pozitivní.

Dárci Dárci byli lidský leukocytární antigen (HLA) A,B,C sérologicky odpovídající a DR a DQ molekulárně shodní sourozenci. Dárcovské kmenové buňky byly odebrány po mobilizaci s 10 ug/kg/den G-CSF, podávaným subkutánně po dobu 5 po sobě jdoucích dnů. Buňky CD34 byly pozitivně selektovány pomocí protilátky anti-CD34 konjugované s mikrokuličkami železo-dextran za použití zařízení CliniMACS (Miltenyi Biotech, Bergisch Gladbach, Německo) s cílem shromáždit > 5,0 x 106 buněk CD34/kg.

Monitorování onemocnění Po transplantaci byli všichni pacienti pod pečlivým dohledem na přítomnost minimální reziduální choroby (MRD) pomocí cytogenetické analýzy a PCR pro detekci transkriptů BCR/ABL. Vzorky kostní dřeně a periferní krve byly vyšetřovány každé 3 měsíce v prvním roce po transplantaci a každé 3-6 měsíců v následujících letech.

Metoda PCR: RQ-PCR byla provedena podle protokolu Europe Against Cancer (EAC).19 Počty kopií BCR-ABL a ABL byly vypočteny porovnáním se standardní křivkou vytvořenou pomocí standardů IPSOGEN FusionQuant Standards. Výsledky kvantifikace BCR-ABL transkriptů byly vyjádřeny jako procentuální poměry vzhledem k celkovým ABL transkriptům.

Minimální počet 1x104 kopií ABL je spodní hranice, pod kterou byla negativní RT-PCR považována za nespolehlivou. V molekulárně biologické laboratoři Rambam Health Care Campus je citlivost pro kvantitativní Q-PCR (10-5).

Infuze dárcovských leukocytů (DLI). DLI byl podáván v režimu eskalujících dávek počínaje 3 x 106 buněk/kg a následně podle potřeby 1 x 107 buněk/kg, 5 x 107 buněk/kg a 1 x 108 buněk/kg.

DLI bylo použito v případě přetrvávání/znovuobjevení BCR-ABL transkriptů počínaje 6 měsíci po transplantaci. V případech, kdy bylo podáváno více než 1 DLI, byla postupně zvyšovaná dávka podávána v intervalech ≥ 3 měsíců, jak bylo diktováno sledováním MRD.