Allogene Stammzelltransplantation bei CML mit partieller T-Zell-Depletion

Die Patienten wurden konditioniert mit oralem Busulfan 12 mg/kg (Tage –6 bis –4), Cyclophosphamid 120 mg/kg (Tage –3, –2), Kaninchen-Antithymozytikum-Globulin (Fresenius, Bad Hamburg, Deutschland) 25 mg/kg (Tage –5 bis -1) und Fludarabin 200 mg/kg (Tage -7 bis -3). Die endgültige Busulfan-Dosis wurde individuell basierend auf Messungen der Busulfan-Serumspiegel mit einer Zieldosis von 850-1400 Mikromol x Minute bestimmt.

Die Transplantationen wurden in umgekehrt isolierten Räumen durchgeführt, die mit hocheffizienten Partikel-Luftfiltersystemen (HEPA) ausgestattet waren. Es wurde keine GvHD-Prophylaxe nach der Transplantation gegeben. Die Infektionsprophylaxe nach der Transplantation bestand aus Aciclovir, Itraconazol, Trimethoprim-Sulfamethoxazol und Penicillin VK. Der Cytomegalovirus (CMV)-Status wurde wöchentlich mittels PCR auf CMV-DNA und pp65-Antigenämie in Blutleukozyten bestimmt, gefolgt von einer präventiven Gabe von Ganciclovir, wenn positiv.

Spender Spender waren humanes Leukozyten-Antigen (HLA) A, B, C, die serologisch übereinstimmen, und DR- und DQ-Geschwister, die molekular übereinstimmen. Spenderstammzellen wurden nach der Mobilisierung mit 10 &mgr;g/kg/Tag G-CSF gesammelt, das an 5 aufeinanderfolgenden Tagen subkutan verabreicht wurde. CD34-Zellen wurden unter Verwendung von Anti-CD34-Antikörpern, die an Eisen-Dextran-Mikroperlen konjugiert waren, unter Verwendung eines CliniMACS-Geräts (Miltenyi Biotech, Bergisch Gladbach, Deutschland) positiv selektiert, mit dem Ziel, > 5,0 x 106 CD34-Zellen/kg zu sammeln.

Krankheitsüberwachung Nach der Transplantation wurden alle Patienten mittels zytogenetischer Analyse und PCR zum Nachweis von BCR/ABL-Transkripten engmaschig auf das Vorhandensein einer minimalen Resterkrankung (MRD) überwacht. Knochenmark- und periphere Blutproben wurden im ersten Jahr nach der Transplantation alle 3 Monate und in den folgenden Jahren alle 3-6 Monate untersucht.

PCR-Methode: RQ-PCR wurde gemäß dem Protokoll von Europe Against Cancer (EAC) durchgeführt.19 Die BCR-ABL- und ABL-Kopienzahlen wurden durch Vergleich mit der unter Verwendung von IPSOGEN FusionQuant-Standards erstellten Standardkurve berechnet. Die Ergebnisse der Quantifizierung von BCR-ABL-Transkripten wurden als prozentuale Verhältnisse relativ zu den gesamten ABL-Transkripten ausgedrückt.

Eine Mindestanzahl von 1x104 ABL-Kopien ist die untere Grenze, unterhalb derer eine negative RT-PCR als unzuverlässig angesehen wurde. Im molekularbiologischen Labor des Rambam Health Care Campus beträgt die Sensitivität für quantitative Q-PCR (10-5).

Spenderleukozyteninfusion (DLI). DLI wurde in einem ansteigenden Dosierungsschema verabreicht, beginnend mit 3 x 106 Zellen/kg, nach Bedarf gefolgt von 1 x 107 Zellen/kg, 5 x 107 Zellen/kg und 1 x 108 Zellen/kg.

DLI wurde bei Persistenz/Wiederauftreten von BCR-ABL-Transkripten ab 6 Monaten nach der Transplantation verwendet. In Fällen, in denen mehr als 1 DLI verabreicht wurde, wurde die sukzessive eskalierte Dosis in ≥ 3-Monats-Intervallen gegeben, wie es die MRD-Nachsorge vorschrieb.