Allogeniczny przeszczep komórek macierzystych w CML z częściowym wyczerpaniem limfocytów T

Pacjenci byli kondycjonowani doustnie busulfanem 12 mg/kg (dni -6 do -4), cyklofosfamidem 120 mg/kg (dni -3, -2), króliczą globuliną antytymocytarną (Fresenius, Bad Hamburg, Niemcy) 25 mg/kg (dni -5 do -1) i fludarabiny 200 mg/kg (dni -7 do -3). Końcową dawkę busulfanu ustalano indywidualnie na podstawie pomiarów stężeń busulfanu w surowicy z dawką docelową 850-1400 mikroM x minutę.

Przeszczepy wykonywano w pomieszczeniach z odwróconą izolacją, wyposażonych w wysokowydajne systemy filtracji cząstek stałych (HEPA). Nie podano profilaktyki GvHD po przeszczepie. Profilaktyka zakażeń po przeszczepie obejmowała acyklowir, itrakonazol, trimetoprim-sulfametoksazol i penicylinę VK. Status wirusa cytomegalii (CMV) określano co tydzień, stosując PCR dla CMV-DNA i antygenu pp65 w leukocytach krwi, a następnie prewencyjne podawanie gancyklowiru, gdy wynik był dodatni.

Dawcy Dawcami byli ludzki antygen leukocytarny (HLA) A, B, C dopasowany serologicznie oraz rodzeństwo dopasowane molekularnie DR i DQ. Komórki macierzyste dawcy zebrano po mobilizacji za pomocą 10 ug/kg/dzień G-CSF, podawanego podskórnie przez 5 kolejnych dni. Komórki CD34 selekcjonowano pozytywnie stosując przeciwciało anty-CD34 skoniugowane z mikroperełkami żelazo-dekstran przy użyciu urządzenia CliniMACS (Miltenyi Biotech, Bergisch Gladbach, Niemcy) w celu zebrania > 5,0 x 106 komórek CD34/kg.

Monitorowanie choroby Po przeszczepie wszyscy pacjenci byli pod ścisłą obserwacją pod kątem obecności minimalnej choroby resztkowej (MRD) przy użyciu analizy cytogenetycznej i PCR w celu wykrycia transkryptów BCR/ABL. Próbki szpiku kostnego i krwi obwodowej badano co 3 miesiące w pierwszym roku po przeszczepie i co 3-6 miesięcy w kolejnych latach.

Metoda PCR: RQ-PCR przeprowadzono zgodnie z protokołem Europe Against Cancer (EAC).19 Liczby kopii BCR-ABL i ABL obliczono przez porównanie z krzywą wzorcową wygenerowaną przy użyciu standardów IPSOGEN FusionQuant. Wyniki ilościowego oznaczania transkryptów BCR-ABL wyrażono jako stosunki procentowe w stosunku do całkowitych transkryptów ABL.

Minimalna liczba 1x104 kopii ABL jest dolną granicą, poniżej której ujemny wynik RT-PCR uznano za niewiarygodny. W laboratorium biologii molekularnej Rambam Health Care Campus czułość ilościowego Q-PCR wynosi (10-5).

Infuzja leukocytów dawcy (DLI). DLI podawano w schemacie zwiększania dawki zaczynając od 3 x 106 komórek/kg, a następnie w razie potrzeby 1 x 107 komórek/kg, 5 x 107 komórek/kg i 1 x 108 komórek/kg.

DLI stosowano w przypadku utrzymywania się/ponownego pojawiania się transkryptów BCR-ABL począwszy od 6 miesięcy po przeszczepie. W przypadkach, w których podano więcej niż 1 DLI, kolejne zwiększane dawki podawano w odstępach ≥ 3-miesięcznych, zgodnie z zaleceniami obserwacji MRD.