Transplante alogênico de células-tronco em LMC com depleção parcial de células T

Os pacientes foram condicionados com busulfan oral 12mg/kg (dias -6 a -4), ciclofosfamida 120mg/kg (dias -3,-2), globulina antitimocítica de coelho (Fresenius, Bad Hamburg, Alemanha) 25mg/kg (dias -5 a -1) e fludarabina 200 mg/kg (dias -7 a-3). A dose final de bussulfano foi determinada individualmente com base nas medições dos níveis séricos de bussulfano com uma dose alvo de 850-1400 microM x minuto.

Os transplantes foram realizados em salas de isolamento reverso equipadas com sistemas de filtragem de ar particulado de alta eficiência (HEPA). Nenhuma profilaxia pós-transplante GvHD foi dada. A profilaxia da infecção pós-transplante consistiu em aciclovir, itraconazol, trimetoprim-sulfametoxazol e penicilina VK. O status do citomegalovírus (CMV) foi determinado semanalmente usando PCR para CMV-DNA e antigenemia pp65 em leucócitos sanguíneos, seguido de administração preventiva de ganciclovir quando positivo.

Doadores Os doadores eram antígeno leucocitário humano (HLA) A,B,C sorologicamente compatível e irmãos DR e DQ molecularmente compatíveis. As células-tronco doadoras foram coletadas após mobilização com 10 µg/kg/dia de G-CSF, administrado por via subcutânea por 5 dias consecutivos. As células CD34 foram selecionadas positivamente usando anticorpo anti-CD34 conjugado com microesferas de ferro-dextrano usando o dispositivo CliniMACS (Miltenyi Biotech, Bergisch Gladbach, Alemanha) com o objetivo de coletar > 5,0 x 106 células CD34/kg.

Monitoramento da doença Após o transplante, todos os pacientes estavam sob vigilância rigorosa quanto à presença de doença residual mínima (DRM) usando análise citogenética e PCR para a detecção de transcritos BCR/ABL. Amostras de medula óssea e sangue periférico foram examinadas a cada 3 meses no primeiro ano após o transplante e a cada 3-6 meses nos anos subsequentes.

Método de PCR: RQ-PCR foi realizado de acordo com o protocolo Europe Against Cancer (EAC).19 Os números de cópias BCR-ABL e ABL foram calculados por comparação com a curva padrão gerada usando os padrões IPSOGEN FusionQuant. Os resultados da quantificação dos transcritos BCR-ABL foram expressos como razões percentuais em relação aos transcritos ABL totais.

Um número mínimo de 1x104 cópias de ABL é o limite inferior abaixo do qual um RT-PCR negativo foi considerado não confiável. No laboratório de biologia molecular do Rambam Health Care Campus, a sensibilidade para Q-PCR quantitativo é (10-5).

Infusão de leucócitos do doador (DLI). DLI foi administrado em regime de dose crescente começando de 3 x 106 células/kg seguido conforme necessário por 1 x 107 células/kg, 5 x 107 células/kg e 1 x 108 células/kg.

DLI foi usado em caso de persistência/reaparecimento de transcritos BCR-ABL a partir de 6 meses após o transplante. Nos casos em que mais de 1 DLI foi administrado, a dose escalonada sucessiva foi administrada em intervalos ≥ 3 meses, conforme ditado pelo acompanhamento do MRD.