Allogene stamceltransplantatie in CML met gedeeltelijke T-celdepletie

Patiënten werden geconditioneerd met oraal busulfan 12 mg/kg (dagen -6 tot -4), cyclofosfamide 120 mg/kg (dagen -3, -2), konijnenantithymocytisch globuline, (Fresenius, Bad Hamburg, Duitsland) 25 mg/kg (dagen -5 tot -1) en fludarabine 200 mg/kg (dag -7 tot -3). De uiteindelijke dosis busulfan werd individueel bepaald op basis van metingen van serumbusulfanspiegels met een doeldosis van 850-1400 microM x minuut.

Transplantaties werden uitgevoerd in omgekeerde isolatiekamers die waren uitgerust met zeer efficiënte deeltjesluchtfiltratiesystemen (HEPA). Er werd geen GvHD-profylaxe na transplantatie gegeven. Post-transplantatie infectieprofylaxe bestond uit aciclovir, itraconazol, trimethoprim-sulfamethoxazol en penicilline VK. Cytomegalovirus (CMV) -status werd wekelijks bepaald met behulp van PCR voor CMV-DNA en pp65-antigenemie in bloedleukocyten, gevolgd door preventieve toediening van ganciclovir indien positief.

Donoren Donoren waren humaan leukocytenantigeen (HLA) A, B, C serologisch gematcht en DR en DQ moleculair gematchte broers en zussen. Donorstamcellen werden verzameld na mobilisatie met 10 µg/kg/dag G-CSF, subcutaan toegediend gedurende 5 opeenvolgende dagen. CD34-cellen werden positief geselecteerd met behulp van anti-CD34-antilichaam geconjugeerd aan ijzer-dextran-microbolletjes met behulp van CliniMACS-apparaat (Miltenyi Biotech, Bergisch Gladbach, Duitsland) met als doel > 5,0 x 106 CD34-cellen/kg te verzamelen.

Ziektemonitoring Na de transplantatie werden alle patiënten nauwlettend gecontroleerd op de aanwezigheid van minimale residuele ziekte (MRD) met behulp van cytogenetische analyse en PCR voor de detectie van BCR/ABL-transcripten. Beenmerg- en perifere bloedmonsters werden elke 3 maanden onderzocht in het eerste jaar na de transplantatie en elke 3-6 maanden in de daaropvolgende jaren.

PCR-methode: RQ-PCR werd uitgevoerd volgens het Europe Against Cancer (EAC)-protocol.19 De BCR-ABL- en ABL-kopieaantallen werden berekend door ze te vergelijken met de standaardcurve die werd gegenereerd met behulp van IPSOGEN FusionQuant Standards. De resultaten van het kwantificeren van BCR-ABL-transcripten werden uitgedrukt als procentuele verhoudingen ten opzichte van de totale ABL-transcripten.

Een minimum aantal van 1x104 ABL-kopieën is de ondergrens waaronder een negatieve RT-PCR als onbetrouwbaar werd beschouwd. In het laboratorium voor moleculaire biologie van de Rambam Health Care Campus is de gevoeligheid voor kwantitatieve Q-PCR (10-5).

Donorleukocyteninfusie (DLI). DLI werd toegediend in een oplopende dosis, beginnend met 3 x 106 cellen/kg, zo nodig gevolgd door 1 x 107 cellen/kg, 5 x 107 cellen/kg en 1 x 108 cellen/kg.

DLI werd gebruikt in geval van persistentie/terugkeer van BCR-ABL-transcripten vanaf 6 maanden na transplantatie. In gevallen waarin meer dan 1 DLI werd toegediend, werd de opeenvolgende verhoogde dosis gegeven met intervallen van ≥ 3 maanden, zoals voorgeschreven door MRD-follow-up.