Trasplante alogénico de células madre en CML con agotamiento parcial de células T

Los pacientes fueron acondicionados con busulfán oral 12 mg/kg (días -6 a -4), ciclofosfamida 120 mg/kg (días -3, -2), globulina antitimocítica de conejo (Fresenius, Bad Hamburg, Alemania) 25 mg/kg (días -5 a -1) y fludarabina 200 mg/kg (días -7 a -3). La dosis final de busulfán se determinó individualmente en función de las mediciones de los niveles séricos de busulfán con una dosis objetivo de 850-1400 microM x minuto.

Los trasplantes se realizaron en salas de aislamiento inverso equipadas con sistemas de filtración de partículas en el aire (HEPA) de alta eficiencia. No se administró profilaxis de EICH posterior al trasplante. La profilaxis de infecciones postrasplante consistió en aciclovir, itraconazol, trimetoprim-sulfametoxazol y penicilina VK. El estado de citomegalovirus (CMV) se determinó semanalmente mediante PCR para CMV-DNA y antigenemia pp65 en leucocitos sanguíneos, seguido de la administración preventiva de ganciclovir cuando era positivo.

Donantes Los donantes eran antígenos leucocitarios humanos (HLA) A,B,C serológicamente compatibles y hermanos DR y DQ molecularmente compatibles. Las células madre del donante se recogieron después de la movilización con 10 µg/kg/día de G-CSF, administrado por vía subcutánea durante 5 días consecutivos. Las células CD34 se seleccionaron positivamente usando anticuerpo anti-CD34 conjugado con microesferas de hierro-dextrano usando el dispositivo CliniMACS (Miltenyi Biotech, Bergisch Gladbach, Alemania) con el objetivo de recolectar > 5,0 x 106 células CD34/kg.

Supervisión de la enfermedad Después del trasplante, todos los pacientes fueron supervisados ​​de cerca por la presencia de enfermedad residual mínima (MRD) mediante análisis citogenético y PCR para la detección de transcritos de BCR/ABL. Se examinaron muestras de médula ósea y sangre periférica cada 3 meses en el primer año posterior al trasplante y cada 3-6 meses en los años siguientes.

Método PCR: RQ-PCR se realizó de acuerdo con el protocolo Europe Against Cancer (EAC)19. Los números de copias de BCR-ABL y ABL se calcularon comparándolos con la curva estándar generada utilizando los estándares IPSOGEN FusionQuant. Los resultados de cuantificar los transcritos de BCR-ABL se expresaron como proporciones porcentuales con respecto al total de transcritos de ABL.

Un número mínimo de 1x104 copias de ABL es el límite inferior por debajo del cual una RT-PCR negativa se considera poco fiable. En el laboratorio de biología molecular del Rambam Health Care Campus la sensibilidad para la Q-PCR cuantitativa es (10-5).

Infusión de leucocitos de donante (DLI). DLI se administró en un régimen de dosis creciente comenzando con 3 x 106 células/kg seguido según fuera necesario por 1 x 107 células/kg, 5 x 107 células/kg y 1 x 108 células/kg.

Se utilizó DLI en caso de persistencia/reaparición de transcritos de BCR-ABL a partir de los 6 meses posteriores al trasplante en adelante. En los casos en que se administró más de 1 DLI, la dosis escalonada sucesiva se administró a intervalos de ≥ 3 meses según lo dictado por el seguimiento de MRD.