Allogen stamcellstransplantation i KML med partiell utarmning av T-celler

Patienterna konditionerades med oral busulfan 12 mg/kg (dagar -6 till -4), cyklofosfamid 120 mg/kg (dagar -3,-2), kanin antitymocytiskt globulin, (Fresenius, Bad Hamburg, Tyskland) 25 mg/kg (dagar -5 till -1) och fludarabin 200 mg/kg (dagar -7 till -3). Den slutliga busulfandosen bestämdes individuellt baserat på mätningar av serumbusulfannivåer med en måldos på 850-1400 mikroM x minut.

Transplantationer utfördes i omvända isoleringsrum utrustade med högeffektiva partikelluftfiltreringssystem (HEPA). Ingen post-transplantation GvHD-profylax gavs. Post-transplantation infektionsprofylax bestod av acyklovir, itrakonazol, trimetoprim-sulfametoxazol och penicillin VK. Cytomegalovirus (CMV) status bestämdes varje vecka med PCR för CMV-DNA och pp65 antigenemi i blodleukocyter, följt av förebyggande administrering av ganciklovir när positiv.

Donatorer Donatorer var humant leukocytantigen (HLA) A,B,C serologiskt matchade och DR och DQ molekylärt matchade syskon. Givarstamceller samlades in efter mobilisering med 10 µg/kg/dag G-CSF, givet subkutant under 5 dagar i följd. CD34-celler selekterades positivt med användning av anti-CD34-antikropp konjugerad till järn-dextran-mikropärlor med användning av CliniMACS-anordning (Miltenyi Biotech, Bergisch Gladbach, Tyskland) med målet att samla > 5,0 x 106 CD34-celler/kg.

Sjukdomsövervakning Efter transplantation övervakades alla patienter noggrant med avseende på förekomsten av minimal restsjukdom (MRD) med hjälp av cytogenetisk analys och PCR för detektering av BCR/ABL-transkript. Prover från benmärg och perifert blod undersöktes var tredje månad under det första året efter transplantation och var tredje till var sjätte månad under de efterföljande åren.

PCR-metod: RQ-PCR utfördes enligt protokollet Europe Against Cancer (EAC).19 Antalet BCR-ABL och ABL-kopior beräknades genom att jämföra med standardkurvan som genererades med hjälp av IPSOGEN FusionQuant Standards. Resultaten av kvantifiering av BCR-ABL-transkript uttrycktes som procentuella förhållanden i förhållande till totala ABL-transkript.

Ett minsta antal 1x104 kopior av ABL är den nedre gränsen under vilken en negativ RT-PCR ansågs otillförlitlig. I det molekylärbiologiska laboratoriet på Rambam Health Care Campus är känsligheten för kvantitativ Q-PCR (10-5).

Donatorleukocytinfusion (DLI). DLI administrerades i en eskalerande dosregim med start från 3 x 106 celler/kg följt vid behov av 1 x 107 celler/kg, 5 x 107 celler/kg och 1 x 108 celler/kg.

DLI användes i händelse av persistens/återuppkomst av BCR-ABL-transkript från och med 6 månader efter transplantation och framåt. I fall där mer än 1 DLI administrerades gavs den successiva eskalerade dosen med ≥ 3 månaders intervall enligt MRD-uppföljning.