Аллогенная трансплантация стволовых клеток при ХМЛ с частичным истощением Т-клеток

Пациенты получали пероральный бусульфан 12 мг/кг (дни от -6 до -4), циклофосфамид 120 мг/кг (дни -3, -2), антитимоцитарный глобулин кролика (Fresenius, Бад-Гамбург, Германия) 25 мг/кг (дни -5). до -1) и флударабин 200 мг/кг (дни от -7 до -3). Окончательная доза бусульфана определялась индивидуально на основе измерений уровней бусульфана в сыворотке с целевой дозой 850-1400 мкМ в минуту.

Трансплантации проводились в обратных изолированных комнатах, оборудованных высокоэффективными системами фильтрации воздуха (HEPA). Посттрансплантационная профилактика РТПХ не проводилась. Посттрансплантационная профилактика инфекции включала ацикловир, итраконазол, триметоприм-сульфаметоксазол и пенициллин ВК. Статус цитомегаловируса (ЦМВ) определяли еженедельно с помощью ПЦР на ДНК ЦМВ и антигенемии pp65 в лейкоцитах крови с последующим превентивным введением ганцикловира при положительном результате.

Доноры Донорами были человеческие лейкоцитарные антигены (HLA) A, B, C, совпадающие серологически, и DR и DQ, совпадающие на молекулярном уровне. Донорские стволовые клетки собирали после мобилизации с помощью 10 мкг/кг/день G-CSF, вводимого подкожно в течение 5 дней подряд. Клетки CD34 были положительно отобраны с использованием анти-CD34-антитела, конъюгированного с микробусинами декстрана железа, с использованием устройства CliniMACS (Miltenyi Biotech, Бергиш-Гладбах, Германия) с целью сбора > 5,0 x 106 клеток CD34/кг.

Мониторинг заболевания После трансплантации все пациенты находились под тщательным наблюдением на наличие минимальной остаточной болезни (МОБ) с использованием цитогенетического анализа и ПЦР для обнаружения транскриптов BCR/ABL. Образцы костного мозга и периферической крови исследовали каждые 3 месяца в течение первого года после трансплантации и каждые 3-6 месяцев в последующие годы.

Метод ПЦР: RQ-PCR проводили в соответствии с протоколом Europe Against Cancer (EAC)19. Количество копий BCR-ABL и ABL рассчитывали путем сравнения со стандартной кривой, полученной с использованием стандартов IPSOGEN FusionQuant. Результаты количественного определения транскриптов BCR-ABL выражали в виде процентных соотношений по отношению к общему количеству транскриптов ABL.

Минимальное количество 1x104 копий ABL является нижним пределом, ниже которого отрицательный результат ОТ-ПЦР считался ненадежным. В лаборатории молекулярной биологии медицинского центра Rambam Health Care Campus чувствительность количественной Q-ПЦР составляет (10-5).

Инфузия донорских лейкоцитов (DLI). DLI вводили в режиме возрастающей дозы, начиная с 3 х 106 клеток/кг, а затем, при необходимости, 1 х 107 клеток/кг, 5 х 107 клеток/кг и 1 х 108 клеток/кг.

DLI использовали в случае сохранения/повторного появления транскриптов BCR-ABL, начиная с 6 месяцев после трансплантации. В случаях, когда вводилось более 1 DLI, последовательная эскалация дозы вводилась с интервалом ≥ 3 месяцев в соответствии с последующим наблюдением MRD.