Allogen stamcelletransplantation i CML med delvis udtømning af T-celler

Patienterne blev konditioneret med oral busulfan 12mg/kg (dage -6 til -4), cyclophosphamid 120mg/kg (dage -3,-2), kanin antithymocytisk globulin, (Fresenius, Bad Hamburg, Tyskland) 25mg/kg (dage -5) til -1) og fludarabin 200 mg/kg (dage -7 til -3). Den endelige busulfan-dosis blev individuelt bestemt baseret på målinger af serum-busulfan-niveauer med en måldosis på 850-1400 mikroM x minut.

Transplantationer blev udført i omvendte isolationsrum udstyret med højeffektive partikelluftfiltreringssystemer (HEPA). Der blev ikke givet nogen post-transplantation GvHD-profylakse. Post-transplantation infektionsprofylakse bestod af acyclovir, itraconazol, trimethoprim-sulfamethoxazol og penicillin VK. Cytomegalovirus (CMV) status blev bestemt ugentligt ved anvendelse af PCR for CMV-DNA og pp65 antigenemi i blodleukocytter, efterfulgt af forebyggende ganciclovir administration, når positiv.

Donorer Donorer var humant leukocytantigen (HLA) A,B,C serologisk matchede og DR og DQ molekylært matchede søskende. Donorstamceller blev opsamlet efter mobilisering med 10 µg/kg/dag G-CSF givet subkutant i 5 på hinanden følgende dage. CD34-celler blev positivt selekteret under anvendelse af anti-CD34-antistof konjugeret til jern-dextran-mikroperler ved anvendelse af CliniMACS-enhed (Miltenyi Biotech, Bergisch Gladbach, Tyskland) med det formål at indsamle > 5,0 x 106 CD34-celler/kg.

Sygdomsovervågning Efter transplantation var alle patienter under tæt overvågning for tilstedeværelsen af ​​minimal residual sygdom (MRD) ved brug af cytogenetisk analyse og PCR til påvisning af BCR/ABL-transkripter. Knoglemarvs- og perifere blodprøver blev undersøgt hver 3. måned i det første år efter transplantation og hver 3.-6. måned i de efterfølgende år.

PCR-metode: RQ-PCR blev udført i henhold til Europe Against Cancer (EAC) protokollen.19 BCR-ABL og ABL kopital blev beregnet ved at sammenligne med standardkurven genereret ved hjælp af IPSOGEN FusionQuant Standards. Resultaterne af kvantificering af BCR-ABL-transkripter blev udtrykt som procentforhold i forhold til totale ABL-transkripter.

Et minimumsantal på 1x104 kopier af ABL er den nedre grænse, under hvilken en negativ RT-PCR blev betragtet som upålidelig. I det molekylærbiologiske laboratorium på Rambam Health Care Campus er følsomheden for kvantitativ Q-PCR (10-5).

Donor leukocytinfusion (DLI). DLI blev indgivet i eskalerende dosisregimen startende fra 3 x 106 celler/kg efterfulgt efter behov af 1 x 107 celler/kg, 5 x 107 celler/kg og 1 x 108 celler/kg.

DLI blev brugt i tilfælde af persistens/genopkomst af BCR-ABL-transkripter startende fra 6 måneder efter transplantation og fremefter. I tilfælde, hvor mere end 1 DLI blev administreret, blev den successive eskalerede dosis givet med ≥ 3-måneders intervaller som dikteret af MRD-opfølgning.