Allogen stamcelletransplantasjon i CML med delvis utarming av T-celler

Pasientene ble kondisjonert med oral busulfan 12mg/kg (dager -6 til -4), cyklofosfamid 120mg/kg (dager -3,-2), kanin antitymocytisk globulin, (Fresenius, Bad Hamburg, Tyskland) 25mg/kg (dager -5 til -1) og fludarabin 200 mg/kg (dager -7 til -3). Endelig busulfandose ble individuelt bestemt basert på målinger av serumbusulfannivåer med en måldose på 850-1400 mikroM x minutt.

Transplantasjoner ble utført i omvendte isolasjonsrom utstyrt med høyeffektive partikkelluftfiltreringssystemer (HEPA). Det ble ikke gitt GvHD-profylakse etter transplantasjon. Post-transplantasjonsinfeksjonsprofylakse besto av acyklovir, itrakonazol, trimetoprim-sulfametoksazol og penicillin VK. Cytomegalovirus (CMV) status ble bestemt ukentlig ved bruk av PCR for CMV-DNA og pp65 antigenemi i blodleukocytter, etterfulgt av forebyggende administrering av ganciklovir når positiv.

Donorer Donorer var humant leukocyttantigen (HLA) A,B,C serologisk matchet og DR og DQ molekylært matchede søsken. Donorstamceller ble samlet etter mobilisering med 10 µg/kg/dag G-CSF, gitt subkutant i 5 påfølgende dager. CD34-celler ble positivt selektert ved bruk av anti-CD34-antistoff konjugert til jern-dekstran-mikrokuler ved bruk av CliniMACS-enhet (Miltenyi Biotech, Bergisch Gladbach, Tyskland) med et mål om å samle > 5,0 x 106 CD34-celler/kg.

Sykdomsovervåking Etter transplantasjon ble alle pasienter under nøye overvåking for tilstedeværelse av minimal restsykdom (MRD) ved bruk av cytogenetisk analyse og PCR for påvisning av BCR/ABL-transkripter. Benmarg og perifere blodprøver ble undersøkt hver 3. måned i det første året etter transplantasjon og hver 3.-6. måned i de påfølgende årene.

PCR-metode: RQ-PCR ble utført i henhold til Europe Against Cancer (EAC)-protokollen.19 BCR-ABL og ABL kopitall ble beregnet ved å sammenligne med standardkurven generert ved bruk av IPSOGEN FusionQuant Standards. Resultatene av kvantifisering av BCR-ABL-transkripter ble uttrykt som prosentandeler i forhold til totale ABL-transkripter.

Et minimum antall 1x104 kopier av ABL er den nedre grensen under hvilken en negativ RT-PCR ble ansett som upålitelig. I det molekylærbiologiske laboratoriet på Rambam Health Care Campus er sensitiviteten for kvantitativ Q-PCR (10-5).

Donor leukocyttinfusjon (DLI). DLI ble administrert i eskalerende doseregime fra 3 x 106 celler/kg etterfulgt etter behov av 1 x 107 celler/kg, 5 x 107 celler/kg og 1 x 108 celler/kg.

DLI ble brukt i tilfelle vedvarende/gjenopptreden av BCR-ABL-transkripsjoner fra 6 måneder etter transplantasjon og utover. I tilfeller der mer enn 1 DLI ble administrert, ble den påfølgende eskalerte dosen gitt med ≥ 3-måneders intervaller som diktert av MRD-oppfølging.