Biomarqueurs chez les receveurs de greffe

Tous les greffés reçoivent une surveillance périodique des niveaux de médicaments et des tests de laboratoire pour évaluer l'adéquation de l'immunosuppression et de la fonction de l'allogreffe. Celles-ci sont réalisées lorsque le receveur est admis à l'hôpital après une greffe ou pour une complication telle qu'un rejet aigu ou une toxicité, ou lorsque le receveur est en ambulatoire.

1. Échantillons de sang : les participants peuvent être invités à fournir des échantillons de sang de recherche lors d'essais cliniques réguliers et peuvent prélever jusqu'à 15 millilitres de sang jusqu'à 7 fois au cours de la première année suivant la greffe, puis moins souvent par la suite. Le volume total prélevé tiendra compte de la taille, du poids et de l'âge du patient au moment du prélèvement. Cependant, si pour une raison quelconque le participant n'est pas en mesure de fournir un échantillon lors d'un test clinique régulier, il peut être prélevé à un autre moment. Les participants seront invités à fournir ces échantillons indéfiniment. Cela permettra une évaluation longitudinale de la stabilité de l'expression des biomarqueurs en tant que reflet des concentrations cliniques de médicaments dans des mesures répétées.
2. Collecte de salive : Jusqu'à 5 ml de la salive du sujet seront prélevés quatre fois au maximum, si l'échantillon précédent ne fournit pas d'informations adéquates. Les échantillons seront prélevés dans un récipient d'auto-collecte au moment du consentement ou dès que possible après l'obtention des consentements, et seront conservés à température ambiante dans le laboratoire de transplantation pédiatrique, 3344 Forbes Ave. Chez les receveurs où les deux sont disponibles, les résultats du génotypage sous forme d'ADN de la salive seront comparés entre des échantillons de sang appariés. Dorénavant, la collecte de salive ne sera offerte qu'aux participants qui ne peuvent pas donner d'échantillons sanguins pour le génotypage. Le prélèvement salivaire est considéré comme une norme alternative acceptable pour le génotypage du sang total. Un échantillon de salive ne sera prélevé que si le patient ou le parent ou tuteur du patient préfère cette option au prélèvement sanguin.
3. Collecte d'urine, de matières fécales et de bile : cinq ml de tout liquide corporel seront collectés dans des gobelets à urine stériles pour l'application de technologies protéomiques. Les collectes peuvent être répétées jusqu'à quatre fois, si le premier échantillon fournit des informations sous-optimales.
4. Collecte des échantillons de biopsie restants de la norme de soins d'allogreffe et des tissus des explants : tout morceau de biopsie d'allogreffe jugé résiduel par le pathologiste sera soumis à un test de matrice de gènes. Cela se produira lorsque le participant est programmé pour sa biopsie standard de soins, ou pendant la chirurgie. Le matériel génétique extrait du plus petit tissu peut être amplifié en utilisant plusieurs approches.
5. Mesures : L'expression des biomarqueurs sera évaluée après stimulation par des mitogènes et des antigènes des cellules mononucléaires du sang périphérique. (1-3). Brièvement, les cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC) sont extraites du sang total par séparation sur gradient de Ficoll, Par la suite, soit des mitogènes tels que la phytohémagglutinine, le mitogène pokeweed, ou le phorbol-acide myristique-ionomycine, soit des antigènes peptidiques viraux et du complexe majeur d'histocompatibilité (CMH), ou des cellules alloantigéniques intactes seront utilisées pour stimuler les PBMC receveurs. Les réponses cellulaires qui peuvent être mesurées comprennent, mais sans s'y limiter, les marqueurs pro-inflammatoires ou anti-inflammatoires exprimés, les cytokines, la prolifération, la cytotoxicité et l'apoptose.