Biomarker bei Transplantatempfängern

Alle Transplantatempfänger erhalten eine regelmäßige Überwachung der Arzneimittelspiegel und Labortests, um die Angemessenheit der Immunsuppression und der Allotransplantatfunktion zu beurteilen. Diese werden durchgeführt, wenn der Empfänger nach einer Transplantation oder wegen einer Komplikation wie einer akuten Abstoßung oder Toxizität ins Krankenhaus eingeliefert wird oder wenn der Empfänger ambulant behandelt wird.

1. Blutproben: Die Teilnehmer können gebeten werden, während regelmäßiger klinischer Tests Blutproben zu Forschungszwecken zur Verfügung zu stellen, und können innerhalb des ersten Jahres der Transplantation sieben Mal bis zu 15 Milliliter Blut entnehmen und danach seltener. Das entnommene Gesamtvolumen berücksichtigt Größe, Gewicht und Alter des Patienten zum Zeitpunkt der Entnahme. Wenn der Teilnehmer jedoch aus irgendeinem Grund während des regulären klinischen Tests keine Probe abgeben kann, kann diese zu einem anderen Zeitpunkt entnommen werden. Die Teilnehmer werden gebeten, diese Proben auf unbestimmte Zeit zur Verfügung zu stellen. Dies wird eine Längsschnittbeurteilung der Stabilität der Biomarker-Expression als Widerspiegelung klinischer Arzneimittelkonzentrationen in wiederholten Messungen ermöglichen.
2. Speichelsammlung: Bis zu 5 ml des Speichels des Probanden werden höchstens viermal gesammelt, wenn die vorherige Probe keine ausreichenden Informationen liefert. Die Proben werden zum Zeitpunkt der Zustimmung oder so früh wie möglich nach Erhalt der Zustimmung in einem Selbstentnahmebehälter entnommen und bei Raumtemperatur im Pediatric Transplantation Laboratory, 3344 Forbes Ave., gelagert. Bei Empfängern, bei denen beide verfügbar sind, werden die Genotypisierungsergebnisse als DNA aus Speichel zwischen gepaarten Blutproben verglichen. Künftig wird die Speichelsammlung nur Teilnehmern angeboten, die keine Blutproben zur Genotypisierung spenden können. Speichelproben werden als akzeptabler alternativer Standard für die Genotypisierung von Vollblut angesehen. Eine Speichelprobe wird nur entnommen, wenn der Patient oder die Eltern oder der Vormund des Patienten diese Option der Blutentnahme vorziehen.
3. Sammlung von Urin, Kot und Galle: Fünf ml einer beliebigen Körperflüssigkeit werden in sterilen Urinbechern zur Anwendung von Proteomics-Technologien gesammelt. Sammlungen können bis zu viermal wiederholt werden, wenn die erste Probe suboptimale Informationen liefert.
4. Entnahme von verbleibenden Allotransplantat-Biopsieproben und Gewebe von Explantaten: Jedes Stück einer Allotransplantat-Biopsie, das vom Pathologen als Rest angesehen wird, wird einem Gen-Array-Test unterzogen. Dies geschieht, wenn der Teilnehmer für seine Standard-Behandlungsbiopsie oder während einer Operation eingeplant ist. Genetisches Material, das aus kleinstem Gewebe extrahiert wurde, kann mit mehreren Ansätzen amplifiziert werden.
5. Messungen: Die Biomarker-Expression wird nach Mitogen- und Antigen-Stimulation peripherer mononukleärer Blutzellen evaluiert. (1-3). Kurz gesagt, periphere mononukleäre Blutzellen (PBMC) werden aus Vollblut durch Ficoll-Gradienten-Trennung extrahiert. Danach werden entweder Mitogene wie Phytohämagglutinin, Kermesbeere-Mitogen oder Phorbol-Myristinsäure-Ionomycin oder virale und Haupthistokompatibilitätskomplex (MHC)-Peptid-Antigene, oder intakte alloantigene Zellen werden verwendet, um Empfänger-PBMC zu stimulieren. Zelluläre Reaktionen, die gemessen werden können, schließen exprimierte entzündungsfördernde oder entzündungshemmende Marker, Zytokine, Proliferation, Zytotoxizität und Apoptose ein, sind aber nicht darauf beschränkt.