Biomarkery u biorców przeszczepów

Wszyscy biorcy przeszczepów są poddawani okresowej kontroli stężeń leków i badaniom laboratoryjnym w celu oceny adekwatności immunosupresji i funkcji alloprzeszczepu. Są one wykonywane, gdy biorca zostaje przyjęty do szpitala po przeszczepie lub z powodu komplikacji, takich jak ostre odrzucenie lub toksyczność, lub gdy biorca jest pacjentem ambulatoryjnym.

1. Próbki krwi: Uczestnicy mogą zostać poproszeni o dostarczenie próbek krwi do badań podczas regularnych badań klinicznych i mogą pobrać do 15 mililitrów krwi aż 7 razy w ciągu pierwszego roku przeszczepu, a następnie rzadziej. Całkowita pobrana objętość będzie uwzględniać wzrost, wagę i wiek pacjenta w momencie pobierania. Jeśli jednak z jakiegokolwiek powodu uczestnik nie może dostarczyć próbki podczas regularnego badania klinicznego, może ona zostać pobrana w innym terminie. Uczestnicy będą proszeni o dostarczanie tych próbek w nieskończoność. Pozwoli to na podłużną ocenę stabilności ekspresji biomarkerów jako odzwierciedlenia klinicznych stężeń leków w powtarzanych pomiarach.
2. Pobranie śliny: Do 5 ml śliny pacjenta zostanie pobrane nie więcej niż cztery razy, jeśli poprzednia próbka nie dostarczy odpowiednich informacji. Próbki zostaną pobrane do pojemnika do samodzielnego pobrania w momencie wyrażenia zgody lub jak najszybciej po uzyskaniu zgody i będą przechowywane w temperaturze pokojowej w Pediatric Transplantation Laboratory, 3344 Forbes Ave. W przypadku biorców, u których oba są dostępne, wyniki genotypowania jako DNA ze śliny zostaną porównane między sparowanymi próbkami krwi. Odtąd pobieranie śliny będzie oferowane tylko uczestnikom, którzy nie mogą oddać próbek krwi do genotypowania. Pobieranie próbek śliny jest uważane za akceptowalny alternatywny standard genotypowania krwi pełnej. Próbka śliny zostanie pobrana tylko wtedy, gdy pacjent lub rodzic lub opiekun pacjenta przedkładają tę opcję nad pobranie krwi.
3. Pobieranie moczu, kału i żółci: pięć ml dowolnego płynu ustrojowego zostanie zebranych do sterylnych pojemników na mocz w celu zastosowania technologii proteomicznych. Pobieranie można powtórzyć do czterech razy, jeśli pierwsza próbka dostarczy informacji nieoptymalnych.
4. Pobieranie pozostałych próbek z biopsji alloprzeszczepu oraz tkanki z eksplantów: Każdy fragment biopsji alloprzeszczepu uznany przez patologa za szczątkowy zostanie poddany testom z użyciem macierzy genów. Nastąpi to, gdy uczestnik zostanie zaplanowany na standardową biopsję lub podczas zabiegu chirurgicznego. Materiał genetyczny wyekstrahowany z najmniejszej tkanki można zamplifikować na kilka sposobów.
5. Pomiary: Ekspresja biomarkerów zostanie oceniona po stymulacji jednojądrzastych komórek krwi obwodowej mitogenem i antygenem. (1-3). Pokrótce, komórki jednojądrzaste krwi obwodowej (PBMC) ekstrahuje się z pełnej krwi przez separację w gradiencie Ficoll. Następnie albo mitogeny, takie jak fitohemaglutynina, mitogen szkarłatki lub forbol-kwas mirystynowy-jonomycyna, albo wirusowe i antygeny peptydowe głównego układu zgodności tkankowej (MHC), lub nienaruszone komórki alloantygenowe zostaną użyte do stymulacji PBMC biorcy. Odpowiedzi komórkowe, które można zmierzyć, obejmują, ale nie wyłącznie, wyrażane markery prozapalne lub przeciwzapalne, cytokiny, proliferację, cytotoksyczność i apoptozę.