Biomarcadores en receptores de trasplantes

Todos los receptores de trasplantes reciben un control periódico de los niveles del fármaco y pruebas de laboratorio para evaluar la idoneidad de la inmunosupresión y la función del aloinjerto. Se realizan cuando el receptor ingresa en el hospital después del trasplante o por una complicación como rechazo agudo o toxicidad, o cuando el receptor es un paciente ambulatorio.

1. Muestras de sangre: se les puede pedir a los participantes que proporcionen muestras de sangre para investigación durante las pruebas clínicas periódicas, y se pueden recolectar hasta 15 mililitros de sangre hasta 7 veces durante el primer año del trasplante, y luego con menos frecuencia. El volumen total recogido tendrá en cuenta la altura, el peso y la edad del paciente en el momento de la recogida. Sin embargo, si por alguna razón el participante no puede proporcionar una muestra durante la prueba clínica regular, se puede recolectar en otro momento. Se pedirá a los participantes que proporcionen estas muestras indefinidamente. Esto permitirá la evaluación longitudinal de la estabilidad de la expresión de biomarcadores como un reflejo de las concentraciones clínicas del fármaco en mediciones repetidas.
2. Recolección de saliva: Se recolectarán hasta 5 ml de saliva del sujeto no más de cuatro veces, si la muestra anterior no proporciona información adecuada. Las muestras se recolectarán en un contenedor de auto-recolección en el momento del consentimiento o tan pronto como sea posible después de que se obtenga el consentimiento, y se almacenarán a temperatura ambiente en el Laboratorio de Trasplantes Pediátricos, 3344 Forbes Ave. En los receptores donde ambos estén disponibles, los resultados del genotipado como ADN de la saliva se compararán entre muestras de sangre pareadas. De ahora en adelante, la recolección de saliva solo se ofrecerá a los participantes que no puedan donar muestras de sangre para el genotipado. El muestreo de saliva se considera un estándar alternativo aceptable para el genotipado de sangre total. Se recolectará una muestra de saliva solo si el paciente o el padre o tutor del paciente prefieren esta opción a la muestra de sangre.
3. Recolección de orina, heces y bilis: se recolectarán cinco ml de cualquier fluido corporal en vasos de orina estériles para la aplicación de tecnologías proteómicas. Las colecciones pueden repetirse hasta cuatro veces, si la primera muestra proporciona información subóptima.
4. Recolección de especímenes de biopsia de aloinjerto de atención estándar restantes y tejido de explantes: cualquier pieza de biopsia de aloinjerto que el patólogo considere residual se someterá a una prueba de matriz de genes. Esto ocurrirá cuando el participante esté programado para su biopsia de atención estándar o durante la cirugía. El material genético extraído del tejido más pequeño se puede amplificar utilizando varios enfoques.
5. Mediciones: la expresión de biomarcadores se evaluará después de la estimulación con mitógenos y antígenos de las células mononucleares de sangre periférica. (1-3). Brevemente, las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) se extraen de la sangre completa mediante la separación del gradiente de Ficoll. A continuación, mitógenos como la fitohemaglutinina, el mitógeno de la hierba carmín o el ácido mirístico-forbol-ionomicina, o antígenos peptídicos virales y del complejo principal de histocompatibilidad (MHC), o se utilizarán células aloantigénicas intactas para estimular las PBMC receptoras. Las respuestas celulares que se pueden medir incluyen, pero no se limitan a, marcadores proinflamatorios o antiinflamatorios expresados, citocinas, proliferación, citotoxicidad y apoptosis.