Biomarkery u příjemců transplantací

Všichni příjemci transplantátu jsou pravidelně monitorováni hladinou léčiva a laboratorními testy k posouzení adekvátnosti imunosuprese a funkce aloštěpu. Ty se provádějí, když je příjemce přijat do nemocnice po transplantaci nebo kvůli komplikacím, jako je akutní odmítnutí nebo toxicita, nebo když je příjemce ambulantní.

1. Vzorky krve: Účastníci mohou být požádáni, aby poskytli vzorky krve pro výzkum během pravidelných klinických testů a mohou odebrat až 15 mililitrů krve až 7krát během prvního roku po transplantaci a poté méně často. Celkový odebraný objem bude brát v úvahu výšku, hmotnost a věk pacienta v době odběru. Pokud však účastník z jakéhokoli důvodu není schopen poskytnout vzorek během pravidelného klinického testu, může být odebrán v jiném termínu. Účastníci budou požádáni o poskytnutí těchto vzorků na dobu neurčitou. To umožní dlouhodobé hodnocení stability exprese biomarkerů jako odraz klinických koncentrací léčiva v opakovaných měřeních.
2. Odběr slin: Až 5 ml slin subjektu bude odebráno maximálně čtyřikrát, pokud předchozí vzorek neposkytuje dostatečné informace. Vzorky budou odebrány do nádoby pro vlastní odběr v době udělení souhlasu nebo co nejdříve po obdržení souhlasu a budou uloženy při pokojové teplotě v laboratoři pro pediatrické transplantace, 3344 Forbes Ave. U příjemců, kde jsou oba dostupné, budou výsledky genotypizace jako DNA ze slin porovnány mezi párovými vzorky krve. Odběr slin bude od nynějška nabízen pouze účastníkům, kteří nemohou darovat krevní vzorky pro genotypizaci. Odběr vzorků slin je považován za přijatelný alternativní standard pro genotypizaci plné krve. Vzorek slin bude odebrán pouze v případě, že pacient nebo jeho rodič nebo opatrovník dává přednost této možnosti před odběrem krve.
3. Odběr moči, stolice a žluči: 5 ml jakékoli tělesné tekutiny bude odebráno do sterilních močových kelímků pro aplikaci proteomických technologií. Odběry lze opakovat až čtyřikrát, pokud první vzorek poskytuje suboptimální informace.
4. Odběr zbývajících standardních bioptických vzorků aloštěpu a tkáně z explantátů: Jakýkoli kus biopsie aloštěpu, který patolog považuje za reziduální, bude podroben testování genového pole. K tomu dojde, když je účastník naplánován na biopsii standardní péče nebo během operace. Genetický materiál extrahovaný z nejmenší tkáně lze amplifikovat pomocí několika přístupů.
5. Měření: Exprese biomarkerů bude hodnocena po mitogenové a antigenní stimulaci mononukleárních buněk periferní krve. (1-3). Stručně řečeno, mononukleární buňky periferní krve (PBMC) jsou extrahovány z plné krve separací na gradientu Ficoll. Poté jsou buď mitogeny, jako je fytohemaglutinin, mitogen pokeweed, nebo forbol-myristová kyselina-ionomycin, nebo virové a peptidové antigeny hlavního histokompatibilního komplexu (MHC), nebo intaktní aloantigenní buňky budou použity ke stimulaci PBMC příjemce. Buněčné reakce, které lze měřit, zahrnují, aniž by byl výčet omezující, exprimované prozánětlivé nebo protizánětlivé markery, cytokiny, proliferaci, cytotoxicitu a apoptózu.