Биомаркеры у реципиентов трансплантата

Все реципиенты трансплантата проходят периодический мониторинг уровня лекарств и лабораторные анализы для оценки адекватности иммуносупрессии и функции аллотрансплантата. Они выполняются, когда реципиент поступает в больницу после трансплантации или в связи с такими осложнениями, как острое отторжение или токсичность, или когда реципиент находится на амбулаторном лечении.

1. Образцы крови: участников могут попросить предоставить образцы крови для исследований во время регулярных клинических анализов, и они могут собирать до 15 миллилитров крови до 7 раз в течение первого года после трансплантации, а затем реже. Общий собранный объем будет учитывать рост, вес и возраст пациента на момент сбора. Однако, если по какой-либо причине участник не может предоставить образец во время обычного клинического испытания, его можно взять в другое время. Участников попросят предоставить эти образцы на неопределенный срок. Это позволит проводить продольную оценку стабильности экспрессии биомаркеров как отражение клинических концентраций лекарств при повторных измерениях.
2. Сбор слюны: до 5 мл слюны субъекта будет собираться не более четырех раз, если предыдущий образец не дает адекватной информации. Образцы будут собраны в контейнер для самостоятельного сбора во время получения согласия или как можно раньше после получения согласия и будут храниться при комнатной температуре в детской трансплантационной лаборатории, 3344 Forbes Ave. У реципиентов, у которых есть оба варианта, результаты генотипирования в виде ДНК из слюны будут сравниваться между парными образцами крови. Отныне сбор слюны будет предлагаться только тем участникам, которые не могут сдать образцы крови для генотипирования. Образец слюны считается приемлемым альтернативным стандартом для генотипирования цельной крови. Образец слюны будет взят только в том случае, если пациент, его родитель или опекун предпочтет этот вариант забору крови.
3. Сбор мочи, кала и желчи: пять мл любой жидкости организма будут собраны в стерильные емкости для сбора мочи для применения протеомных технологий. Сборы могут быть повторены до четырех раз, если первый образец дает субоптимальную информацию.
4. Сбор оставшихся стандартных образцов биопсии аллотрансплантата и ткани из эксплантатов: Любой фрагмент биопсии аллотрансплантата, признанный патологом остаточным, будет подвергнут тестированию генного массива. Это произойдет, когда участнику назначена стандартная биопсия, или во время операции. Генетический материал, извлеченный из мельчайшей ткани, можно амплифицировать несколькими способами.
5. Измерения: экспрессию биомаркеров оценивают после митогенной и антигенной стимуляции мононуклеарных клеток периферической крови. (1-3). Вкратце, мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) экстрагируют из цельной крови с помощью разделения в градиенте фиколла. После этого либо митогены, такие как фитогемаглютинин, митоген лаконоса или форбол-миристиновая кислота-иономицин, либо вирусные и пептидные антигены главного комплекса гистосовместимости (МНС), или интактные аллоантигенные клетки будут использоваться для стимуляции РВМС реципиента. Клеточные ответы, которые можно измерить, включают, помимо прочего, выраженные провоспалительные или противовоспалительные маркеры, цитокины, пролиферацию, цитотоксичность и апоптоз.