Biomarcadores em Receptores de Transplante

Todos os receptores de transplante recebem monitoramento periódico dos níveis de drogas e exames laboratoriais para avaliar a adequação da imunossupressão e da função do aloenxerto. Estes são realizados quando o receptor é internado no hospital após o transplante ou por uma complicação, como rejeição aguda ou toxicidade, ou quando o receptor é um paciente ambulatorial.

1. Amostras de sangue: Os participantes podem ser solicitados a fornecer amostras de sangue para pesquisa durante os testes clínicos regulares e podem coletar até 15 mililitros de sangue até 7 vezes no primeiro ano do transplante e, depois disso, com menos frequência. O volume total coletado levará em consideração a altura, o peso e a idade do paciente no momento da coleta. No entanto, se por algum motivo o participante não puder fornecer uma amostra durante o teste clínico regular, ela poderá ser coletada em outro momento. Os participantes serão solicitados a fornecer essas amostras por tempo indeterminado. Isso permitirá a avaliação longitudinal da estabilidade da expressão do biomarcador como um reflexo das concentrações clínicas da droga em medições repetidas.
2. Coleta de saliva: Até 5 ml de saliva do sujeito serão coletados no máximo quatro vezes, se a amostra anterior não fornecer informações adequadas. As amostras serão coletadas em recipiente de autocoleta no momento do consentimento ou o mais cedo possível após a obtenção do consentimento e serão armazenadas em temperatura ambiente no Pediatric Transplantation Laboratory, 3344 Forbes Ave. Nos receptores onde ambos estiverem disponíveis, os resultados da genotipagem como DNA da saliva serão comparados entre amostras de sangue pareadas. A partir de agora, a coleta de saliva só será oferecida aos participantes que não puderem doar amostras de sangue para genotipagem. A amostragem salivar é considerada um padrão alternativo aceitável para genotipagem de sangue total. Uma amostra de saliva será coletada apenas se o paciente ou o pai ou tutor do paciente preferir esta opção em vez da amostragem de sangue.
3. Coleta de urina, fezes e bile: cinco ml de qualquer fluido corporal serão coletados em copos de urina estéreis para aplicação de tecnologias proteômicas. As coletas podem ser repetidas até quatro vezes, se a primeira amostra fornecer informações abaixo do ideal.
4. Coleta de espécimes de biópsia de padrão de tratamento de aloenxerto remanescentes e tecido de explantes: Qualquer pedaço de biópsia de aloenxerto considerado residual pelo patologista será submetido a testes de matriz de genes. Isso ocorrerá quando o participante estiver agendado para sua biópsia padrão de atendimento ou durante a cirurgia. O material genético extraído do menor tecido pode ser amplificado usando várias abordagens.
5. Dosagens: A expressão de biomarcadores será avaliada após estimulação de mitógenos e antígenos de células mononucleares do sangue periférico. (1-3). Resumidamente, as células mononucleares do sangue periférico (PBMC) são extraídas do sangue total por separação por gradiente de Ficoll. Posteriormente, ou mitógenos como fitohemaglutinina, mitógeno de pokeweed ou forbol-ácido mirístico-ionomicina, ou antígenos peptídicos virais e do complexo principal de histocompatibilidade (MHC), ou células aloantigênicas intactas serão usadas para estimular PBMC receptoras. As respostas celulares que podem ser medidas incluem, mas não estão limitadas a marcadores pró-inflamatórios ou anti-inflamatórios expressos, citocinas, proliferação, citotoxicidade e apoptose.