Biomarcatori nei destinatari del trapianto

Tutti i riceventi di trapianto ricevono un monitoraggio periodico dei livelli di farmaco e test di laboratorio per valutare l'adeguatezza dell'immunosoppressione e la funzione dell'allotrapianto. Questi vengono eseguiti quando il ricevente è ricoverato in ospedale dopo il trapianto o per una complicazione come rigetto acuto o tossicità, o quando il ricevente è un paziente ambulatoriale.

1. Campioni di sangue: ai partecipanti può essere chiesto di fornire campioni di sangue di ricerca durante i normali test clinici e possono raccogliere fino a 15 millilitri di sangue fino a 7 volte entro il primo anno dal trapianto, e successivamente meno spesso. Il volume totale raccolto terrà conto dell'altezza, del peso e dell'età del paziente al momento del prelievo. Tuttavia, se per qualsiasi motivo il partecipante non è in grado di fornire un campione durante il normale test clinico, può essere raccolto in un altro momento. Ai partecipanti verrà chiesto di fornire questi campioni a tempo indeterminato. Ciò consentirà la valutazione longitudinale della stabilità dell'espressione del biomarcatore come riflesso delle concentrazioni cliniche del farmaco in misurazioni ripetute.
2. Raccolta della saliva: fino a 5 ml di saliva del soggetto verranno raccolti non più di quattro volte, se il campione precedente non fornisce informazioni adeguate. I campioni verranno raccolti in un contenitore per l'auto-raccolta al momento del consenso o il prima possibile dopo l'ottenimento del consenso e verranno conservati a temperatura ambiente nel Pediatric Transplantation Laboratory, 3344 Forbes Ave. Nei riceventi in cui entrambi sono disponibili, i risultati della genotipizzazione come DNA dalla saliva verranno confrontati tra campioni di sangue accoppiati. D'ora in poi, la raccolta della saliva sarà offerta solo ai partecipanti che non possono donare campioni di sangue per la genotipizzazione. Il campionamento salivare è considerato uno standard alternativo accettabile per la genotipizzazione del sangue intero. Verrà prelevato un campione di saliva solo se il paziente o il genitore o tutore del paziente preferisce questa opzione rispetto al prelievo di sangue.
3. Raccolta di urina, feci e bile: cinque ml di qualsiasi fluido corporeo saranno raccolti in coppette sterili per l'urina per l'applicazione delle tecnologie di proteomica. Le raccolte possono essere ripetute fino a quattro volte, se il primo campione fornisce informazioni non ottimali.
4. Raccolta dei rimanenti campioni di biopsia standard di cura dell'allotrapianto e tessuto da espianti: qualsiasi pezzo di biopsia dell'allotrapianto ritenuto residuo dal patologo sarà sottoposto a test dell'array genetico. Ciò si verificherà quando il partecipante è programmato per la biopsia standard di cura o durante un intervento chirurgico. Il materiale genetico estratto dal tessuto più piccolo può essere amplificato utilizzando diversi approcci.
5. Misure: L'espressione del biomarcatore sarà valutata dopo la stimolazione del mitogeno e dell'antigene delle cellule mononucleari del sangue periferico. (1-3). In breve, le cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC) vengono estratte dal sangue intero mediante separazione del gradiente di Ficoll, successivamente, o mitogeni come fitoemagglutinina, mitogeno di pokeweed o acido forbolo-miristico-ionomicina, o antigeni peptidici virali e del complesso maggiore di istocompatibilità (MHC), o cellule alloantigeniche intatte verranno utilizzate per stimolare le PBMC riceventi. Le risposte cellulari che possono essere misurate includono ma non sono limitate a marcatori proinfiammatori o antinfiammatori espressi, citochine, proliferazione, citotossicità e apoptosi.