Chaîne légère Kappa libre de LCR pour le diagnostic des troubles démyélinisants

La sclérose en plaques (SEP) est une maladie démyélinisante du système nerveux central (SNC) qui entraîne souvent une invalidité. Il s'agit de la maladie neurologique invalidante la plus courante chez les jeunes adultes, se présentant le plus souvent entre 20 et 40 ans. Le test de laboratoire clinique actuellement préféré pour le diagnostic est la détection de bandes oligoclonales (OCB) dans le liquide céphalo-rachidien (LCR) par électrophorèse à focalisation isoélectrique (IEF) suivie d'un immunotransfert. Cette technique manuelle nécessite que des échantillons de LCR et de sérum appariés soient analysés en parallèle, avec une interprétation visuelle subjective. La méthode en plusieurs étapes est laborieuse et coûteuse, avec un temps moyen de traitement analytique de plus de 3 heures. Il n'y a pas de définition standard des quantités d'OCB requises pour un résultat cliniquement positif. Avec des approches différentes par diverses institutions, la positivité peut être caractérisée par n'importe quoi de 1 à 4 bandes uniques de LCR, ce qui affecte de manière significative la sensibilité et la spécificité du test. La mesure des niveaux de chaîne légère libre Kappa (K-FLC) dans le LCR a été proposée comme alternative potentielle à l'évaluation qualitative des OCB. Cette étude de validation en laboratoire permettrait au laboratoire de réduire ses dépenses en réduisant le temps des technologues et en éliminant les kits IEF coûteux. De plus, K-FLC remplacerait l'interprétation subjective par des valeurs quantitatives, surmontant les défis associés à la performance et à l'interprétation subjective des tests OCB. Le but de cette étude est de valider et de déterminer le rendement diagnostique de K-FLC dans le LCR contre les OCB via IEF comme étalon-or.

L'OCB via IEF est systématiquement effectuée à la Section de pathologie chimique pour les patients suspects de SEP ou de troubles démyélinisants. Des échantillons de LCR et de sérum de patients appariés sont prélevés. Les bandes oligoclonales sont testées par IEF sur gel d'agarose à l'aide du kit Interlab diagnostics CSF IEF et d'étapes d'immunotransfert manuel pour transférer les protéines sur des membranes de transfert. Une analyse simultanée est également effectuée sur des échantillons de sérum. Le schéma des bandes oligoclonales dans le LCR est examiné par le pathologiste et leurs résultats sont notés comme positifs ou négatifs pour la présence ou l'absence de CSF OCB ou correspondant, c'est-à-dire les bandes présentes à la fois dans le sérum et le LCR.

Les échantillons reçus au cours des 3 derniers mois de juin à août pour OCBS via IEF sont conservés au laboratoire dans des conditions congelées, stables pour l'analyse. 0,5 ml d'échantillon de LCR sera utilisé pour l'analyse par néphélométrie sur l'analyseur Beckman Immage-800 à l'aide des kits de Freelite, The Binding Site, conformément aux instructions du fabricant.

Pour garantir la confidentialité, tous les détails d'identification seront anonymisés et des identifiants d'étude seront attribués. De plus, toutes les données seront stockées dans un format électronique protégé par un mot de passe par le PI.

Compte tenu de la faible fréquence anticipée des troubles démyélinisants dans un seul centre ; et pour obtenir une puissance et une fiabilité significatives de l'analyse statistique, une taille d'échantillon minimale de 60 échantillons de LCR pour l'analyse K-FLC sera incluse avec une stratification en 3 groupes : positif (n = 20), négatif (n = 20) et correspondant (n =20), pour les OCB.

L'analyse des données se fera sur SPSS version 25. Le test de Shapiro Wilk sera utilisé pour vérifier la normalité des données. La précision diagnostique du CSF K-FLC sera calculée sur la base de la sensibilité, de la spécificité, de la VPP et de la VPN en prenant l'OCB comme étalon-or. Pour une analyse plus approfondie, la courbe des caractéristiques fonctionnelles du récepteur (ROC) sera tracée pour l'OCB et l'aire sous la courbe (AUC) sera calculée et le seuil optimal sera généré à l'aide de l'indice de Youden. Pour l'accord de validation entre CSF, L-FLC et IEF seront évalués par les statistiques kappa de Cohen.