Kappa lehký řetěz bez CSF pro diagnostiku demyelinizačních poruch

Roztroušená skleróza (RS) je demyelinizační onemocnění centrálního nervového systému (CNS), které běžně vede k invaliditě. Jedná se o nejčastější invalidizující neurologické onemocnění vyskytující se u mladých dospělých, nejčastěji ve věku 20 až 40 let. Současným preferovaným klinickým laboratorním testem pro diagnostiku je detekce oligoklonálních proužků (OCB) v mozkomíšním moku (CSF) pomocí izoelektrické fokusační elektroforézy (IEF) s následným imunoblotem. Tato manuální technika vyžaduje paralelní zpracování párových CSF a sérových vzorků se subjektivní vizuální interpretací. Vícekroková metoda je náročná na práci a nákladná, s průměrnou dobou analytického zpracování přes 3 hodiny. Pro klinicky pozitivní výsledek neexistuje žádná standardní definice množství OCB. S různými přístupy různých institucí může být pozitivita charakterizována čímkoli od 1 do 4 jedinečných pruhů CSF, což významně ovlivňuje senzitivitu a specificitu testu. Měření hladin kappa volného lehkého řetězce (K-FLC) v CSF bylo navrženo jako potenciální alternativa ke kvalitativnímu hodnocení OCB. Tato laboratorní validační studie by umožnila laboratoři snížit výdaje snížením času technologa a odstraněním drahých sad IEF. Kromě toho by K-FLC nahradil subjektivní interpretaci kvantitativními hodnotami, čímž by překonal problémy spojené s výkonem a subjektivní interpretací testování OCB. Cílem této studie je ověřit a stanovit diagnostickou výtěžnost K-FLC v CSF proti OCB prostřednictvím IEF jako zlatého standardu.

OCB přes IEF se rutinně provádí na Sekci chemické patologie u pacientů s podezřením na RS nebo demyelinizační poruchy. Odeberou se spárované vzorky CSF a séra pacienta. Oligoklonální pásy jsou testovány pomocí IEF na agarózovém gelu s použitím soupravy Interlab diagnostics CSF IEF kit a manuálního imunoblotování pro přenos proteinů na přenosové membrány. Simultánní analýza se také provádí na vzorcích séra. Vzor oligoklonálních pruhů v CSF je přezkoumán patologem a jejich nálezy jsou označeny jako pozitivní nebo negativní na přítomnost nebo nepřítomnost CSF OCB nebo odpovídající, tj. pruhy přítomné v séru i CSF.

Vzorky přijaté během posledních 3 měsíců od června do srpna pro OCBS prostřednictvím IEF jsou uloženy v laboratoři ve zmrazených podmínkách, stabilní pro analýzu. Vzorek CSF o objemu 0,5 ml bude použit pro analýzu nefelometrií na analyzátoru Beckman Immage-800 za použití souprav od Freelite, The Binding Site, podle pokynů výrobce.

Pro zajištění důvěrnosti budou všechny identifikační údaje anonymizovány a budou přiděleny identifikátory studie. Kromě toho budou všechna data uložena v elektronickém formátu chráněném heslem PI.

S ohledem na nízkou očekávanou frekvenci demyelinizačních poruch v jediném centru; a pro dosažení významné síly a spolehlivosti statistické analýzy bude minimální velikost vzorku 60 vzorků CSF pro analýzu K-FLC zahrnuta se stratifikací do 3 skupin: pozitivní (n=20), negativní (n=20) a odpovídající (n =20), pro OCB.

Analýza dat bude provedena na SPSS verze 25. Pro kontrolu normality dat bude použit Shapiro Wilk test. Diagnostická přesnost CSF K-FLC bude vypočítána na základě senzitivity, specificity, PPV a NPV, přičemž OCB jako zlatý standard. Pro další analýzu bude vykreslena křivka provozní charakteristiky přijímače (ROC) pro OCB a bude vypočtena plocha pod křivkou (AUC) a pomocí Youdenova indexu bude generováno optimální omezení. Pro validaci dohody mezi CSF L-FLC a IEF bude posouzena Cohenova kappa statistika.