CSF Free Kappa Light Chain för diagnos av demyeliniserande störningar

Multipel skleros (MS) är en demyeliniserande sjukdom i centrala nervsystemet (CNS) som vanligtvis leder till funktionshinder. Det är den vanligaste invalidiserande neurologiska sjukdomen som finns hos unga vuxna, oftast mellan 20 och 40 år. Det nuvarande föredragna kliniska laboratorietestet för diagnosen är detektering av oligoklonala band (OCB) i cerebrospinalvätskan (CSF) genom isoelektrisk fokuserande elektrofores (IEF) följt av immunoblotting. Denna manuella teknik kräver att parade CSF- och serumprover körs parallellt, med en subjektiv visuell tolkning. Flerstegsmetoden är arbetsintensiv och kostsam, med en genomsnittlig tid för analytisk bearbetning på över 3 timmar. Det finns ingen standarddefinition av OCB-mängder som krävs för ett kliniskt positivt resultat. Med olika tillvägagångssätt från olika institutioner kan positivitet karakteriseras av allt från 1 till 4 unika CSF-band, vilket signifikant påverkar analysens känslighet och specificitet. Att mäta nivåerna av Kappa Free Light Chain (K-FLC) i CSF har föreslagits som ett potentiellt alternativ till den kvalitativa bedömningen av OCB. Denna labbbaserade valideringsstudie skulle göra det möjligt för laboratoriet att minska utgifterna genom att minska teknikerns tid och eliminera dyra IEF-kit. Dessutom skulle K-FLC ersätta subjektiv tolkning med kvantitativa värden, och övervinna utmaningarna i samband med prestanda och subjektiv tolkning av OCB-testning. Syftet med denna studie är att validera och bestämma det diagnostiska utbytet av K-FLC i CSF mot OCB via IEF som guldstandard.

OCB via IEF utförs rutinmässigt vid sektionen för kemisk patologi för patienter med misstanke om MS eller demyeliniserande störningar. Parade patient-CSF- och serumprover tas. De oligoklonala banden testas av IEF på agarosgel med Interlab diagnostik CSF IEF-kit och manuella immunoblottingsteg för att överföra proteinerna på överföringsmembran. Samtidig analys görs också på serumprover. Mönstret av oligoklonala band i CSF granskas av patolog och deras fynd noteras som positiva eller negativa för närvaro eller frånvaro av CSF OCB eller matchning, det vill säga band närvarande i både serum och CSF.

De prover som tagits emot under de senaste 3 månaderna från juni till augusti för OCBS via IEF sparas i labbet under frusna förhållanden, stabila för analys. 0,5 ml CSF-prov kommer att användas för analys med nefelometri på Beckman Immage-800 analysator med hjälp av kit från Freelite, The Binding Site, enligt tillverkarens instruktioner.

För att säkerställa konfidentialitet kommer alla identifieringsdetaljer att anonymiseras och studieidentifierare kommer att tilldelas. Dessutom kommer all data att lagras i ett lösenordsskyddat elektroniskt format av PI.

Med tanke på den låga förväntade frekvensen av demyeliniserande störningar vid ett enda centrum; och för att uppnå signifikant kraft och tillförlitlighet för statistisk analys, kommer en minsta provstorlek på 60 CSF-prover för K-FLC-analys att inkluderas med stratifiering i 3 grupper: positiva (n=20), negativa (n=20) och matchande (n) =20), för OCB.

Dataanalys kommer att göras på SPSS version 25. Shapiro Wilk test kommer att användas för att kontrollera normaliteten av data. Diagnostisk noggrannhet för CSF K-FLC kommer att beräknas på basis av sensitivitet, specificitet, PPV och NPV med OCB som guldstandard. För ytterligare analys kommer Receiver operative characteristic (ROC) kurva att plottas för OCB och area under the curve (AUC) kommer att beräknas och optimal cut-off kommer att genereras med hjälp av Youdens Index. För valideringsavtalet mellan CSF kommer L-FLC och IEF att bedömas av Cohens kappastatistik.