Łańcuch lekki Kappa wolny od płynu mózgowo-rdzeniowego do diagnozy zaburzeń demielinizacyjnych

Stwardnienie rozsiane (SM) jest chorobą demielinizacyjną ośrodkowego układu nerwowego (OUN), która często prowadzi do niepełnosprawności. Jest to najczęstsza choroba neurologiczna powodująca niepełnosprawność u młodych dorosłych, najczęściej występująca w wieku od 20 do 40 lat. Obecnie preferowanym klinicznym testem laboratoryjnym do diagnozy jest wykrycie prążków oligoklonalnych (OCB) w płynie mózgowo-rdzeniowym (CSF) za pomocą elektroforezy z ogniskowaniem izoelektrycznym (IEF), a następnie immunoblottingu. Ta ręczna technika wymaga równoległego analizowania sparowanych próbek płynu mózgowo-rdzeniowego i surowicy, z subiektywną interpretacją wizualną. Metoda wieloetapowa jest pracochłonna i kosztowna, a średni czas przetwarzania analitycznego wynosi ponad 3 godziny. Nie ma standardowej definicji ilości OCB wymaganych do uzyskania klinicznie pozytywnego wyniku. Przy różnych podejściach różnych instytucji, pozytywność może charakteryzować się od 1 do 4 unikalnych prążków w płynie mózgowo-rdzeniowym, co znacząco wpływa na czułość i swoistość testu. Pomiar poziomów wolnego łańcucha lekkiego Kappa (K-FLC) w CSF został zaproponowany jako potencjalna alternatywa dla jakościowej oceny OCB. To laboratoryjne badanie walidacyjne pozwoliłoby laboratorium obniżyć wydatki poprzez skrócenie czasu pracy technologa i wyeliminowanie drogich zestawów IEF. Ponadto K-FLC zastąpi subiektywną interpretację wartościami ilościowymi, pokonując wyzwania związane z wydajnością i subiektywną interpretacją testów OCB. Celem tego badania jest walidacja i określenie wydajności diagnostycznej K-FLC w płynie mózgowo-rdzeniowym przeciwko OCB za pomocą IEF jako złotego standardu.

OCB przez IEF jest rutynowo wykonywane w Zakładzie Patologii Chemicznej u pacjentów z podejrzeniem SM lub zaburzeń demielinizacyjnych. Pobiera się sparowane próbki płynu mózgowo-rdzeniowego i surowicy pacjenta. Prążki oligoklonalne są testowane przez IEF na żelu agarozowym przy użyciu zestawu diagnostycznego CSF ​​IEF firmy Interlab i ręcznych etapów immunoblottingu w celu przeniesienia białek na membrany transferowe. Jednoczesna analiza jest również prowadzona na próbkach surowicy. Wzorzec prążków oligoklonalnych w płynie mózgowo-rdzeniowym jest oceniany przez patologa, a ich wyniki są odnotowywane jako dodatnie lub ujemne pod kątem obecności lub braku OCB w płynie mózgowo-rdzeniowym lub dopasowania, to znaczy prążków obecnych zarówno w surowicy, jak i płynie mózgowo-rdzeniowym.

Próbki otrzymane w ciągu ostatnich 3 miesięcy od czerwca do sierpnia do OCBS za pośrednictwem IEF są przechowywane w laboratorium w warunkach zamrożenia, stabilnych do analizy. Próbka 0,5 ml płynu mózgowo-rdzeniowego zostanie wykorzystana do analizy nefelometrycznej na analizatorze Beckman Immage-800 przy użyciu zestawów z firmy Freelite, The Binding Site, zgodnie z instrukcjami producenta.

Aby zapewnić poufność, wszystkie dane identyfikacyjne zostaną zanonimizowane, a identyfikatory badań zostaną przydzielone. Dodatkowo, wszystkie dane będą przechowywane przez PI w formacie elektronicznym chronionym hasłem.

Mając na uwadze niską przewidywaną częstość występowania zaburzeń demielinizacyjnych w jednym ośrodku; oraz aby osiągnąć znaczącą moc i wiarygodność analizy statystycznej, minimalna wielkość próby 60 próbek płynu mózgowo-rdzeniowego do analizy K-FLC zostanie uwzględniona z podziałem na 3 grupy: dodatnią (n=20), ujemną (n=20) i dopasowaną (n =20), dla OCB.

Analiza danych zostanie przeprowadzona na SPSS w wersji 25. Do sprawdzenia normalności danych zostanie wykorzystany test Shapiro Wilka. Dokładność diagnostyczna CSF K-FLC zostanie obliczona na podstawie czułości, swoistości, PPV i NPV, przyjmując OCB jako złoty standard. Do dalszej analizy zostanie wykreślona krzywa charakterystyki operacyjnej odbiornika (ROC) dla OCB i obliczona powierzchnia pod krzywą (AUC) oraz zostanie wygenerowane optymalne odcięcie przy użyciu indeksu Youdena. W celu walidacji umowa między CSF L-FLC a IEF zostanie oceniona na podstawie statystyki kappa Cohena.