CSF Free Kappa Light Chain for diagnose av demyeliniserende lidelser

Multippel sklerose (MS) er en demyeliniserende sykdom i sentralnervesystemet (CNS) som vanligvis fører til funksjonshemming. Det er den vanligste invalidiserende nevrologiske sykdommen som finnes hos unge voksne, som oftest viser seg i alderen 20 til 40 år. Den nåværende foretrukne kliniske laboratorietesten for diagnosen er påvisning av oligoklonale bånd (OCB) i cerebrospinalvæsken (CSF) ved isoelektrisk fokuseringselektroforese (IEF) etterfulgt av immunoblotting. Denne manuelle teknikken krever at parede CSF- og serumprøver kjøres parallelt, med en subjektiv visuell tolkning. Flertrinnsmetoden er arbeidskrevende og kostbar, med en gjennomsnittlig tid for analytisk behandling på over 3 timer. Det er ingen standarddefinisjon av OCB-mengder som kreves for et klinisk positivt resultat. Med ulike tilnærminger fra ulike institusjoner, kan positivitet karakteriseres av alt fra 1 til 4 unike CSF-bånd, noe som signifikant påvirker sensitiviteten og spesifisiteten til analysen. Måling av nivåene av Kappa Free Light Chain (K-FLC) i CSF har blitt foreslått som et potensielt alternativ til den kvalitative vurderingen av OCB. Denne laboratoriebaserte valideringsstudien ville tillate laboratoriet å kutte utgifter ved å redusere teknologtiden og eliminere dyre IEF-sett. I tillegg vil K-FLC erstatte subjektiv tolkning med kvantitative verdier, og overvinne utfordringene knyttet til ytelse og subjektiv tolkning av OCB-testing. Målet med denne studien er å validere og bestemme det diagnostiske utbyttet av K-FLC i CSF mot OCB via IEF som gullstandard.

OCB via IEF utføres rutinemessig ved Seksjon for kjemisk patologi for pasienter med mistanke om MS eller demyeliniserende lidelser. Sammenkoblede pasient-CSF- og serumprøver samles inn. De oligoklonale båndene er testet av IEF på agarosegel ved bruk av Interlab diagnostics CSF IEF-sett og manuelle immunoblotting-trinn for å overføre proteinene på overføringsmembraner. Samtidig analyse utføres også på serumprøver. Mønsteret av oligoklonale bånd i CSF blir gjennomgått av patolog og funnene deres er notert som positive eller negative for tilstedeværelse eller fravær av CSF OCB eller matching, det vil si bånd tilstede i både serum og CSF.

Prøvene mottatt i løpet av de siste 3 månedene fra juni til august for OCBS via IEF lagres i laboratoriet under frosne forhold, stabile for analyse. 0,5 ml CSF-prøve vil bli brukt for analyse ved nefelometri på Beckman Immage-800 analysator ved bruk av sett fra Freelite, The Binding Site, i henhold til produsentens instruksjoner.

For å sikre konfidensialitet vil alle identifikasjonsdetaljer anonymiseres, og studieidentifikatorer vil bli tildelt. I tillegg vil alle data lagres i et passordbeskyttet elektronisk format av PI.

Med tanke på den lave forventede frekvensen av demyeliniserende lidelser ved et enkelt senter; og for å oppnå betydelig kraft og pålitelighet av statistisk analyse, vil en minimumsprøvestørrelse på 60 CSF-prøver for K-FLC-analyse inkluderes med stratifisering i 3 grupper: Positiv (n=20), negativ (n=20) og matchende (n) =20), for OCB.

Dataanalyse vil bli gjort på SPSS versjon 25. Shapiro Wilk-testen vil bli brukt til å sjekke normaliteten til data. Diagnostisk nøyaktighet av CSF K-FLC vil bli beregnet på grunnlag av sensitivitet, spesifisitet, PPV og NPV som tar OCB som gullstandard. For videre analyse vil mottakeroperasjonskarakteristikken (ROC) plottes for OCB og arealet under kurven (AUC) vil bli beregnet og optimal cut-off vil bli generert ved hjelp av Youdens indeks. For valideringsavtalen mellom CSF vil L-FLC og IEF bli vurdert av Cohens kappa-statistikk.