Легкая цепь каппа, не содержащая ЦСЖ, для диагностики демиелинизирующих заболеваний

Рассеянный склероз (РС) — демиелинизирующее заболевание центральной нервной системы (ЦНС), часто приводящее к инвалидности. Это наиболее распространенное инвалидизирующее неврологическое заболевание, обнаруживаемое у молодых людей, чаще всего проявляющееся в возрасте от 20 до 40 лет. В настоящее время предпочтительным клинико-лабораторным тестом для диагностики является обнаружение олигоклональных полос (ОКБ) в спинномозговой жидкости (ЦСЖ) с помощью изоэлектрофокусирующего электрофореза (ИЭФ) с последующим иммуноблоттингом. Этот ручной метод требует параллельного анализа парных образцов спинномозговой жидкости и сыворотки с субъективной визуальной интерпретацией. Многоэтапный метод является трудоемким и дорогостоящим, при этом среднее время аналитической обработки составляет более 3 часов. Не существует стандартного определения количества OCB, необходимого для получения клинически положительного результата. При разных подходах в разных учреждениях положительный результат можно охарактеризовать от 1 до 4 уникальных полос ЦСЖ, что значительно влияет на чувствительность и специфичность анализа. Измерение уровней легкой каппа-свободной цепи (K-FLC) в спинномозговой жидкости было предложено в качестве потенциальной альтернативы качественной оценке OCB. Это лабораторное проверочное исследование позволит лаборатории сократить расходы за счет сокращения времени технолога и отказа от дорогостоящих наборов IEF. Кроме того, K-FLC заменит субъективную интерпретацию количественными значениями, преодолев проблемы, связанные с производительностью и субъективной интерпретацией тестирования OCB. Целью этого исследования является проверка и определение диагностической эффективности K-FLC в спинномозговой жидкости по сравнению с OCB с помощью IEF в качестве золотого стандарта.

ОКБ через ИЭФ обычно проводится в отделении химической патологии у пациентов с подозрением на РС или демиелинизирующие заболевания. Собираются парные образцы спинномозговой жидкости и сыворотки пациента. Олигоклональные полосы тестируют с помощью IEF на агарозном геле с использованием набора Interlab Diagnostics CSF IEF и этапов ручного иммуноблоттинга для переноса белков на мембраны для переноса. Одновременно проводится анализ образцов сыворотки. Характер олигоклональных полос в спинномозговой жидкости изучается патологоанатомом, и их результаты отмечаются как положительные или отрицательные в зависимости от присутствия или отсутствия OCB в спинномозговой жидкости или совпадения, то есть полос, присутствующих как в сыворотке, так и в спинномозговой жидкости.

Образцы, полученные в течение последних 3 месяцев с июня по август для OCBS через IEF, сохраняются в лаборатории в замороженных условиях, стабильных для анализа. Образец ЦСЖ объемом 0,5 мл будет использоваться для нефелометрического анализа на анализаторе Beckman Immage-800 с использованием наборов от Freelite, The Binding Site, в соответствии с инструкциями производителя.

Для обеспечения конфиденциальности все идентификационные данные будут обезличены, и будут присвоены идентификаторы исследований. Кроме того, все данные будут храниться в защищенном паролем электронном формате PI.

Принимая во внимание низкую предполагаемую частоту демиелинизирующих заболеваний в одном центре; и для достижения значительной мощности и надежности статистического анализа минимальный размер выборки 60 образцов СМЖ для анализа K-FLC будет включен со стратификацией на 3 группы: положительные (n = 20), отрицательные (n = 20) и соответствующие (n =20), для ОКБ.

Анализ данных будет проводиться в SPSS версии 25. Тест Шапиро-Уилка будет использоваться для проверки нормальности данных. Диагностическая точность CSF K-FLC будет рассчитываться на основе чувствительности, специфичности, PPV и NPV, принимая OCB в качестве золотого стандарта. Для дальнейшего анализа будет построена кривая рабочих характеристик приемника (ROC) для OCB, площадь под кривой (AUC) будет рассчитана, а оптимальная отсечка будет сгенерирована с использованием индекса Юдена. Для валидации соглашение между CSF L-FLC и IEF будет оцениваться по каппа-статистике Коэна.