Catena leggera kappa libera nel liquido cerebrospinale per la diagnosi dei disturbi demielinizzanti

La sclerosi multipla (SM) è una malattia demielinizzante del sistema nervoso centrale (SNC) che comunemente porta alla disabilità. È la più comune malattia neurologica invalidante riscontrata nei giovani adulti, che si presenta più comunemente tra i 20 ei 40 anni. L'attuale test di laboratorio clinico preferito per la diagnosi è la rilevazione di bande oligoclonali (OCB) nel liquido cerebrospinale (CSF) mediante elettroforesi di focalizzazione isoelettrica (IEF) seguita da immunoblotting. Questa tecnica manuale richiede l'analisi in parallelo di campioni accoppiati di liquor e siero, con un'interpretazione visiva soggettiva. Il metodo in più fasi è laborioso e costoso, con un tempo medio per l'elaborazione analitica di oltre 3 ore. Non esiste una definizione standard delle quantità di OCB richieste per un risultato clinicamente positivo. Con approcci diversi da parte di varie istituzioni, la positività può essere caratterizzata da qualsiasi cosa, da 1 a 4 bande CSF uniche, che influenzano in modo significativo la sensibilità e la specificità del dosaggio. La misurazione dei livelli di Kappa Free Light Chain (K-FLC) nel CSF è stata proposta come potenziale alternativa alla valutazione qualitativa degli OCB. Questo studio di convalida basato su laboratorio consentirebbe al laboratorio di tagliare le spese riducendo il tempo del tecnico ed eliminando i costosi kit IEF. Inoltre, K-FLC sostituirebbe l'interpretazione soggettiva con valori quantitativi, superando le sfide associate alle prestazioni e all'interpretazione soggettiva dei test OCB. Lo scopo di questo studio è convalidare e determinare la resa diagnostica di K-FLC nel CSF contro OCB tramite IEF come gold standard.

L'OCB tramite IEF viene eseguito di routine presso la Sezione di Patologia Chimica per i pazienti con sospetto di SM o disturbi demielinizzanti. Vengono raccolti campioni accoppiati di liquor e siero dei pazienti. Le bande oligoclonali vengono testate mediante IEF su gel di agarosio utilizzando il kit Interlab diagnostics CSF IEF e passaggi manuali di immunoblotting per trasferire le proteine ​​sulle membrane di trasferimento. L'analisi simultanea è condotta anche su campioni di siero. Il pattern delle bande oligoclonali nel CSF viene rivisto dal patologo e i loro risultati sono annotati come positivi o negativi per presenza o assenza di CSF OCB o corrispondenza, cioè bande presenti sia nel siero che nel CSF.

I campioni ricevuti negli ultimi 3 mesi da giugno ad agosto per OCBS tramite IEF vengono salvati in laboratorio in condizioni congelate, stabili per l'analisi. Il campione di CSF da 0,5 ml verrà utilizzato per l'analisi mediante nefelometria sull'analizzatore Beckman Immage-800 utilizzando i kit di Freelite, The Binding Site, secondo le istruzioni del produttore.

Per garantire la riservatezza, tutti i dettagli identificativi saranno resi anonimi e verranno assegnati gli identificatori dello studio. Inoltre, tutti i dati saranno conservati in un formato elettronico protetto da password dal PI.

Tenendo presente la bassa frequenza prevista di disturbi demielinizzanti in un singolo centro; e per ottenere una potenza e un'affidabilità significative dell'analisi statistica, sarà inclusa una dimensione minima del campione di 60 campioni di CSF per l'analisi K-FLC con stratificazione in 3 gruppi: Positivo (n=20), negativo (n=20) e corrispondenza (n =20), per gli OCB.

L'analisi dei dati verrà eseguita su SPSS versione 25. Il test di Shapiro Wilk verrà utilizzato per verificare la normalità dei dati. L'accuratezza diagnostica del CSF K-FLC sarà calcolata sulla base di sensibilità, specificità, PPV e NPV prendendo OCB come gold standard. Per ulteriori analisi, verrà tracciata la curva delle caratteristiche operative del ricevitore (ROC) per OCB e verrà calcolata l'area sotto la curva (AUC) e verrà generato il cut-off ottimale utilizzando l'indice di Youden. Per l'accordo di validazione tra CSF L-FLC e IEF sarà valutato dalle statistiche kappa di Cohen.